武汉地区汉族人AT1受体基因A1166C与原发性高血压的关系
作者：胡本容 林先明 向继洲 曹圣
单位：胡本容 林先明 向继洲(同济医科大学基础医学院药理学教研室，武汉 430030)；曹圣(同济医科大学卫生部呼吸系疾病重点实验室，武汉 430030)
关键词：AT1受体；基因多态性；原发性高血压
同济医科大学学报000405 摘要 血管紧张素Ⅱ 1型(AT1)受体基因突变体A1166C (碱基A被C取代)可能与原发性高血压的发生有关，但目前的研究结果并不一致。利用对靶基 因的PCR扩增片段进行酶切的方法对武汉地区103例汉族人AT1受体基因多态性(A1166C)与原 发性高血压发生的关系进行了分析，发现正常人和原发性高血压患者两组间A1166C基因型频 率分别为40 %和62 % (χ2=4.95, P<0.05)。初步结果表明，被检测者中A1166C在 原发性高血压患者和正常人两组间有显著性差异。
, 百拇医药
中图法分类号 Q51， R544.1
Relationship between the Angiotensin Ⅱ Type 1 Receptor Gene A1166C
Polymorphism and Human Primary Hypertension in the Han People of Wuhan
Hu Benrong Lin Xianming Xiang Jizhou et al
(Department of Pharmacology, School of Basic Medical Sc iences, Tongji Medical University, Wuhan 430030)
Abstract By using polymerase chain reaction followed by restric tion analysis on the targeting gene, the relationship between angiotensin Ⅱ typ e 1 receptor gene A1166C polymorphism and human primary hypertension in 103 Han People of Wuhan was analyzed. It was found that frequency of A1166C in the healt hy population and in the patients with primary hypertension was 40 % and 62 % re spectively (χ2=4.95, P<0.05). It was suggested that polymorphism of the AT1 receptor gene might be associated with the development of primary hypertensi on.
, 百拇医药
Key words angiotensin Ⅱ type 1 receptor; gene polymorphism; primary hypertension
近年来，国外资料报道，AT1受体基因3/-非编码区A1166C(碱基A被C取代)与许多心血管疾 病的发生有关，包括原发性高血压、心肌梗死、冠心病等，但不同学者对不同人种所得研究 结果并不一致[1～3]。本文就武汉地区汉族人AT1受体基因A1166C与原发性高血压 的关系作初步探讨，以认识汉族人种AT1受体基因多态性在原发性高血压发病中的作用。
1 对象与方法
1.1 受试对象
原发性高血压组： 原发性高血压患者58例，男35例，女23例，民族：均为汉族，年龄(56 .4±7.8)岁，BMI(25.3±1.7)kg/m2。高血压患者入选标准：(1) 确诊高血压：已 诊断为高血压且长期接受抗高血压药物治疗，未接受治疗者，不同日3次测量血压，舒张压 12.66 kPa，收缩压21.33 kPa；(2) 排除继发性高血压。
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正常人组：正常人45例，男26例，女19例，民族：均为汉族，年龄(50.0±15.1)岁，BM I(23.3±2.4)kg/m2。血压正常，无高血压病史。
1.2 AT1受体基因多态性分析
1.2.1外周血染色体DNA的提取：肝素抗凝全血1ml，分别用红细胞裂解液和白细胞核裂 解液处理，再用蛋白酶K消化，TE饱和酚和氯仿抽提染色体DNA。
1.2.2 聚合酶链反应(PCR)：A1166C突变位点位于AT1受体基因3′-非编码区。据此设计 以下引物序列[4]：上游引物(1028-1047), 5′-ATAATGTAAGCTCATCCACC-3′, 下游引物(1359-1378), 5′-GAGATTGCATTTCTGTCAGT-3′(由上海生工工程公司合成)。PC R反应体积 100 μl，其中染色体DNA 200 ng，引物各30 pmol，dNTP(上海生工工程公司)各 200 μmol，TaqDNA聚合酶(上海生工工程公司)3.0 U，10(buffer 10 μl，MgCl2 2.0 mmol。94 ℃变性10 min后，94 ℃ 45 s变性，55 ℃ 1 min复性，72 ℃ 90 s延伸进行35次 循环。
, 百拇医药
1.2.3 突变位点的酶切分析：PCR产物经TE饱和酚和氯仿抽提后，用无水乙醇沉淀，灭菌 双蒸水溶解。用DdeI(美国Gibco公司)进行酶切，分析突变位点。酶切产物置于30 g/L琼脂 糖凝胶上进行电泳，溴化乙锭染色，在紫外灯下观察结果。
1.3 统计学处理
组间基因型频率比较用χ2检验。
2 结果
2.1 DdeI酶切结果
DdeI可识别序列为CTNAG，PCR扩增产物片段长度为351 bp左右。如1166位碱基为C，则 扩增片段中具有该序列，如为A则没有该序列。因此，PCR扩增产物经DdeI处理后,只在351 b p处有一条条带的为没有突变的纯合子A1166，在202 bp和149 bp处各有一条条带的为突变的 纯合子C1166，而杂合子基因型A1166C在351, 202, 149 bp处各有一条条带(见图1)。
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图1 DdeI酶切电泳结果
2.2 不同组间A1166C基因型频率的比较
原发性高血压患者和正常人两组间出现A1166C基因型频率分别为62% 和40%,χ2检验有显 著性差异(χ2=4.95 , P<0.05)。不同性别组间出现A1166C基因型的频率，男性为49%，女性为57%，χ2检验没有显著性差 异(χ2=0.63, P>0.10)。
3 讨论
AT1受体基因位于3号染色体长臂(3q)，通过PCR-SSCP分析60例高血压患者AT1R基因 的编码区和3′-非编码区，发现有5个突变位点(T573C，A1062G，A1166C，G1517T和A1878G )，仅有A1166C与原发性高血压的发生有关[1]。Wang WY通过对108例有高血压病家 族史，早期发病的原发性高血压患者进行研究也得出了同样的结论[5]。但并不是 所有的研究都得到了肯定的结论，Schmidt S认为A1166C与原发性高血压的发生无关，且年 龄大于50岁的原发性高血压患者A1166C有降低的趋势[3]。本研究也观察了武汉地 区103例汉族人AT1R基因A1166C与原发性高血压发生的关系，发现正常人和原发性高血压患 者两组间出现A1166C基因型频率有显著性差异，对于不同性别，两组间出现A1166C基因型频 率没有显著性差异。
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原发性高血压是多基因相关疾病，在研究AT1受体基因多态性与原发性高血压的关系时 ，除了地区，种族的差异外，还受受试者的年龄、性别、体表指数、有无高血压病家族史等 因素的影响。这也可能是以前的研究得出不同结论的原因。本研究收集样本时，保持原发性 高血压患者和正常人两组间年龄、体表指数等因素齐同，尽量避免了这些因素对实验结果的 影响。AT1R基因(A1166C)突变与原发性高血压的关系尚不清楚，其多态性只是作为一种标 志， 提示其连锁基因可能参与原发性高血压的发病[6]。阐明A1166C与原发性高血压发 生的关系及其在高血压发病中的作用，还需进一步研究。
卫生部科研基金资助项目(98-2-092)
胡本容，女，1954年生，主管技师
参 考 文 献
1，Bonnardaux A, Davies E, Jeunemaitre X et al. Angiotensin Ⅱ typ e 1 receptor gene polymorphisms in human essential hypertension. Hypertension , 1994 , 24： 63
, http://www.100md.com
2，Benetos A, Topouchian J, Ricard S et al. Influence of angiotens in Ⅱtype 1 r eceptor polymorphisms on aortic stiffness in never-treated hypertensive patient s. Hypertension, 1995, 26：44
3，Schmidt S, Beige J, Walla-Friedel M et al. A polymorphism in the gene for t he angiotensin Ⅱ type 1 receptor is not associated with hypertension. J Hyperte nsion , 1997, 15： 1385
4，Tiret L, Bonnardeaux A, Poirier O et al. Synergistic effect of angiotensin -converting enzyme and angiotensin Ⅱ type 1 receptor gene polymorphism on risk of myocardial infarction. Lancet, 1994, 344： 910
, http://www.100md.com
5，Wang W Y. Association of angiotensin Ⅱ type 1 receptor gene polymor phism with essential hypertension. Clin Genet, 1997, 51： 31
6，Berge K E, Bakken A, Bohn M et al. A DNA polymorphism at the ang iote nsin Ⅱ type 1 receptor (AT1R) locus and myocardial infarction. Clin Genet, 1997 , 52： 71
(1998-11-03 收稿), http://www.100md.com
单位：胡本容 林先明 向继洲(同济医科大学基础医学院药理学教研室，武汉 430030)；曹圣(同济医科大学卫生部呼吸系疾病重点实验室，武汉 430030)
关键词：AT1受体；基因多态性；原发性高血压
同济医科大学学报000405 摘要 血管紧张素Ⅱ 1型(AT1)受体基因突变体A1166C (碱基A被C取代)可能与原发性高血压的发生有关，但目前的研究结果并不一致。利用对靶基 因的PCR扩增片段进行酶切的方法对武汉地区103例汉族人AT1受体基因多态性(A1166C)与原 发性高血压发生的关系进行了分析，发现正常人和原发性高血压患者两组间A1166C基因型频 率分别为40 %和62 % (χ2=4.95, P<0.05)。初步结果表明，被检测者中A1166C在 原发性高血压患者和正常人两组间有显著性差异。
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中图法分类号 Q51， R544.1
Relationship between the Angiotensin Ⅱ Type 1 Receptor Gene A1166C
Polymorphism and Human Primary Hypertension in the Han People of Wuhan
Hu Benrong Lin Xianming Xiang Jizhou et al
(Department of Pharmacology, School of Basic Medical Sc iences, Tongji Medical University, Wuhan 430030)
Abstract By using polymerase chain reaction followed by restric tion analysis on the targeting gene, the relationship between angiotensin Ⅱ typ e 1 receptor gene A1166C polymorphism and human primary hypertension in 103 Han People of Wuhan was analyzed. It was found that frequency of A1166C in the healt hy population and in the patients with primary hypertension was 40 % and 62 % re spectively (χ2=4.95, P<0.05). It was suggested that polymorphism of the AT1 receptor gene might be associated with the development of primary hypertensi on.
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Key words angiotensin Ⅱ type 1 receptor; gene polymorphism; primary hypertension
近年来，国外资料报道，AT1受体基因3/-非编码区A1166C(碱基A被C取代)与许多心血管疾 病的发生有关，包括原发性高血压、心肌梗死、冠心病等，但不同学者对不同人种所得研究 结果并不一致[1～3]。本文就武汉地区汉族人AT1受体基因A1166C与原发性高血压 的关系作初步探讨，以认识汉族人种AT1受体基因多态性在原发性高血压发病中的作用。
1 对象与方法
1.1 受试对象
原发性高血压组： 原发性高血压患者58例，男35例，女23例，民族：均为汉族，年龄(56 .4±7.8)岁，BMI(25.3±1.7)kg/m2。高血压患者入选标准：(1) 确诊高血压：已 诊断为高血压且长期接受抗高血压药物治疗，未接受治疗者，不同日3次测量血压，舒张压 12.66 kPa，收缩压21.33 kPa；(2) 排除继发性高血压。
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正常人组：正常人45例，男26例，女19例，民族：均为汉族，年龄(50.0±15.1)岁，BM I(23.3±2.4)kg/m2。血压正常，无高血压病史。
1.2 AT1受体基因多态性分析
1.2.1外周血染色体DNA的提取：肝素抗凝全血1ml，分别用红细胞裂解液和白细胞核裂 解液处理，再用蛋白酶K消化，TE饱和酚和氯仿抽提染色体DNA。
1.2.2 聚合酶链反应(PCR)：A1166C突变位点位于AT1受体基因3′-非编码区。据此设计 以下引物序列[4]：上游引物(1028-1047), 5′-ATAATGTAAGCTCATCCACC-3′, 下游引物(1359-1378), 5′-GAGATTGCATTTCTGTCAGT-3′(由上海生工工程公司合成)。PC R反应体积 100 μl，其中染色体DNA 200 ng，引物各30 pmol，dNTP(上海生工工程公司)各 200 μmol，TaqDNA聚合酶(上海生工工程公司)3.0 U，10(buffer 10 μl，MgCl2 2.0 mmol。94 ℃变性10 min后，94 ℃ 45 s变性，55 ℃ 1 min复性，72 ℃ 90 s延伸进行35次 循环。
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1.2.3 突变位点的酶切分析：PCR产物经TE饱和酚和氯仿抽提后，用无水乙醇沉淀，灭菌 双蒸水溶解。用DdeI(美国Gibco公司)进行酶切，分析突变位点。酶切产物置于30 g/L琼脂 糖凝胶上进行电泳，溴化乙锭染色，在紫外灯下观察结果。
1.3 统计学处理
组间基因型频率比较用χ2检验。
2 结果
2.1 DdeI酶切结果
DdeI可识别序列为CTNAG，PCR扩增产物片段长度为351 bp左右。如1166位碱基为C，则 扩增片段中具有该序列，如为A则没有该序列。因此，PCR扩增产物经DdeI处理后,只在351 b p处有一条条带的为没有突变的纯合子A1166，在202 bp和149 bp处各有一条条带的为突变的 纯合子C1166，而杂合子基因型A1166C在351, 202, 149 bp处各有一条条带(见图1)。
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图1 DdeI酶切电泳结果
2.2 不同组间A1166C基因型频率的比较
原发性高血压患者和正常人两组间出现A1166C基因型频率分别为62% 和40%,χ2检验有显 著性差异(χ2=4.95 , P<0.05)。不同性别组间出现A1166C基因型的频率，男性为49%，女性为57%，χ2检验没有显著性差 异(χ2=0.63, P>0.10)。
3 讨论
AT1受体基因位于3号染色体长臂(3q)，通过PCR-SSCP分析60例高血压患者AT1R基因 的编码区和3′-非编码区，发现有5个突变位点(T573C，A1062G，A1166C，G1517T和A1878G )，仅有A1166C与原发性高血压的发生有关[1]。Wang WY通过对108例有高血压病家 族史，早期发病的原发性高血压患者进行研究也得出了同样的结论[5]。但并不是 所有的研究都得到了肯定的结论，Schmidt S认为A1166C与原发性高血压的发生无关，且年 龄大于50岁的原发性高血压患者A1166C有降低的趋势[3]。本研究也观察了武汉地 区103例汉族人AT1R基因A1166C与原发性高血压发生的关系，发现正常人和原发性高血压患 者两组间出现A1166C基因型频率有显著性差异，对于不同性别，两组间出现A1166C基因型频 率没有显著性差异。
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原发性高血压是多基因相关疾病，在研究AT1受体基因多态性与原发性高血压的关系时 ，除了地区，种族的差异外，还受受试者的年龄、性别、体表指数、有无高血压病家族史等 因素的影响。这也可能是以前的研究得出不同结论的原因。本研究收集样本时，保持原发性 高血压患者和正常人两组间年龄、体表指数等因素齐同，尽量避免了这些因素对实验结果的 影响。AT1R基因(A1166C)突变与原发性高血压的关系尚不清楚，其多态性只是作为一种标 志， 提示其连锁基因可能参与原发性高血压的发病[6]。阐明A1166C与原发性高血压发 生的关系及其在高血压发病中的作用，还需进一步研究。
卫生部科研基金资助项目(98-2-092)
胡本容，女，1954年生，主管技师
参 考 文 献
1，Bonnardaux A, Davies E, Jeunemaitre X et al. Angiotensin Ⅱ typ e 1 receptor gene polymorphisms in human essential hypertension. Hypertension , 1994 , 24： 63
, http://www.100md.com
2，Benetos A, Topouchian J, Ricard S et al. Influence of angiotens in Ⅱtype 1 r eceptor polymorphisms on aortic stiffness in never-treated hypertensive patient s. Hypertension, 1995, 26：44
3，Schmidt S, Beige J, Walla-Friedel M et al. A polymorphism in the gene for t he angiotensin Ⅱ type 1 receptor is not associated with hypertension. J Hyperte nsion , 1997, 15： 1385
4，Tiret L, Bonnardeaux A, Poirier O et al. Synergistic effect of angiotensin -converting enzyme and angiotensin Ⅱ type 1 receptor gene polymorphism on risk of myocardial infarction. Lancet, 1994, 344： 910
, http://www.100md.com
5，Wang W Y. Association of angiotensin Ⅱ type 1 receptor gene polymor phism with essential hypertension. Clin Genet, 1997, 51： 31
6，Berge K E, Bakken A, Bohn M et al. A DNA polymorphism at the ang iote nsin Ⅱ type 1 receptor (AT1R) locus and myocardial infarction. Clin Genet, 1997 , 52： 71
(1998-11-03 收稿), http://www.100md.com