低氧对体外培养的肺血管周细胞免疫表型的影响
作者：袁永辉 王林 熊密 车东媛
单位：同济医科大学基础医学院病理学教研室， 武汉 430030
关键词：肺动脉高压；低氧；周细胞；免疫表型
同济医科大学学报000404 摘要 用细胞培养、免疫细胞化学染色、图像分析及 流式细胞术观察低氧和猪肺动脉缺氧内皮细胞条件培养液(HECCM)对体外培养的新生大鼠肺 血管周细胞(PC)α-SM-actin、CD34、S-100和PCNA的表达及细胞周期的影响。 结 果发现 ，低氧和HECCM可促进PC表达α-SM-actin和PCNA, 而抑制CD34和S-100的合成, 促 进PC由静止期(G0/G1期)进入DNA合成期(S期)及有丝分裂期(G2+M期)。提示，低氧不 仅能 促进PC增殖, 而且还可促进其向平滑肌样细胞转化。故PC是慢性低氧性肺动脉高压时无肌型 细动脉肌化的重要细胞来源。
, http://www.100md.com
中图法分类号 R543.2， R392.11
Effects of Hypoxia on the Immunophenotyp es of
Pulmonary Vascular Pericytes in Vitro
Yuan Yonghui Wang Lin Xiong Mi et al
(Department of Pathology, School of Basic Medical Scien ces,Tongji Medical University, Wuhan 430030)
Abstract By using cell culture, immunocytochemical staining, im age analysis and flow cytometry etc, the effects of hypoxia and the medium condi tioned by hyp oxically cultured endothelial cells(HECCM) from porcine pulmonary arteries on th e expression of α-smooth muscle actin (α-SM-actin), CD34, S-100 and proliferat ing cell nuclear antigen (PCNA) and on cell cycle of newborn rat pulmonary vascu lar pericytes in vitro were studied. The results showed that hypoxia and HECCM c ould enhance the expression of α-SM-actin and PCNA of pericytes and promote t he pericyte from static phase (G0/G1 phase) to DNA synthetic phase (S phase) a nd m itotic phase (G2+M phase), but diminish the expression of CD34 and S-10 0 of peri cytes. These results suggested that hypoxia not only stimulated the proliferatio n of pericytes, but also induced pericyte differentiation into smooth-muscle-c el l-like cells. Thus pulmonary vascular pericytes are one important cellular sour c e of muscularization of non-muscular arterioles during the development of chron ic hypoxic pulmonary hypertension.
, 百拇医药
Key words pulmonary hypertension; hypoxia; pericyte; immunop henotype
无肌细动脉的肌化是慢性低氧性肺动脉高压时重要的血管构型重建现象之一[1～2] 。肺血管周细胞是位于无肌细动脉和毛细血管后静脉处的一种具有收缩和分化潜能的幼稚间 叶细胞, 在生理状态下, 对改变微血管管径、调节微循环血流量具有重要作用; 在病理状态 下, 可以增殖, 向中胚层源性的其他细胞转化[2～3]。为了探讨无肌细动脉肌化细 胞的来源, 本室在国内首次建立了肺血管周细胞的体外培养方法[4]。本实验采用 细胞培养、免疫细胞化学染色、图像分析及流式细胞术等方法来观察体外培养的肺血管周细 胞及低氧对周细胞增殖和免疫表型的影响。
1 材料和方法
1.1 主要试剂
, http://www.100md.com
M199培养基、无血清DME/F-12混合培养液(SFM)、胎牛血清(FBS)等均为美国生命公司产品;平滑肌肌动蛋白(α-SM-actin)、CD34、S-100、增殖细胞核抗原(PCNA)等单克隆抗体,链霉亲和素-生物素-过氧化物酶复合物(SABC)试剂盒均购自武汉博士德生物工程有限公司。
1.2 猪肺动脉内皮细胞(PAEC)的培养及其条件培养液(ECCM)的收集
参见文献[5],无菌取出成年猪肺动脉干,用胰蛋白酶消化收集PAEC,加入含100ml/LFBS的M199培养液置37℃CO2培养箱内培养和传代。常氧内皮细胞条件培养液(NECCM)和缺氧内皮细胞条件培养液(HECCM)的制备:取第2～4代生长汇合的PAEC,换以SFM后,分别在常氧(21%O2,5%CO2和74%N2)和低氧(4%O2,5%CO2和91%N2)条件下继续培养24h,收集上清液,离心,微孔滤膜过滤后即为NECCM和HECCM。-20℃保存备用。
, 百拇医药
1.3 新生大鼠肺血管周细胞的培养及实验分组 参见文献[4],新生1～2d的SD大鼠，由同济医科大学实验动物学部提供,颈椎脱臼法处死,无菌条件下取出心肺,D-Hanks液漂洗2次,剔除肺膜、支气管、较大血管及其分支。取末梢肺组织,加入2.0g/LⅣ型胶原酶37℃消化2h,消化悬液先后经80目(孔径约216μm),140目(孔径约110μm)和220目(孔径约70μm)的不锈钢筛网过滤,收集220目筛网上、长度约70～110μm的微血管段,用100ml/LFBS的M199培养液静置培养3d后,换用选择性条件培养液(M199+100ml/LFBS+400ml/L灭活的骨肉瘤S180细胞条件培养液)[6]。传代至4～5代,即可得到纯度较高的微血管周细胞[4～7]。细胞体积较大,呈多边形,细胞边缘不平,伸出大量伪足,与相邻细胞围成似“管状”结构,细胞间无接触抑制,可生长成多层排列。取生长在盖玻片上或培养瓶内的第5代周细胞，改换SFM液，同步培养24h后，再按下列4种不同条件分组，继续培养24h，收样。实验分组:N组(SFM，常氧),H组(SFM，低氧),NECCM组(NECCM，常氧)和HECCM组(HECCM，常氧)。
, 百拇医药
1.4 免疫细胞化学染色及图像分析
取出各组附有细胞生长的盖玻片，用冷酒精丙酮(1∶1)固定20min后,分别用抗PCNA,抗α-SM-actin、抗CD34、抗S-100等4种单克隆抗体对各组周细胞进行SABC法染色,光镜下,对α-SM-actin、CD34和S-100进行半定量分析；对α-SM-actin和PCNA进行定量分析，即光镜下随机选取多个细胞，用TJTY-300型全自动图像分析仪检测其相对含量即平均吸光度(A值);并对各项数据进行t检验。
1.5 周细胞的细胞周期检测
取各组培养瓶内生长的细胞，用酶消化制成细胞悬液，计数，各组细胞总数在2×106个左右者，用700ml/L冷酒清(4℃)固定30min,碘化丙锭染色15min，FACS440型流式细胞仪进行细胞周期分析,经微机处理得出各期细胞数占细胞总数的百分率。
, 百拇医药
2 结果
2.1 周细胞表达的α-SM-actin、CD34和S-100蛋白的半定量结果
免疫细胞化学染色,细胞浆内有棕黄色均质或细颗粒状物质为强阳性反应，出现淡黄色均质或细颗粒状物质为阳性反应；无黄色物质为阴性反应。半定量分析结果见表1。
表1 各组周细胞α-SM-actin、CD34和S-100半定量分析结果 组别
α-SM-actin
CD34
S-100
N
+
, 百拇医药
+
+
H
-
-
NECCM
+
+
+
HECCM
-
-
, 百拇医药
：强阳性，+：阳性， -：阴性
2.2 周细胞的α-SM-actin和PCNA表达的图像分析
α-SM-actin在周细胞浆内表达为黄色丝状或条状物质。H组和HECCM组周细胞胞浆内α-S M- actin表达较强, 呈棕黄色; N组和NECCM组表达较弱, 呈淡黄色，图像分析及统计结果见表2 。H组的表达量为N组的1.11倍(P<0.01)； HECCM组表达量分别为N组和NECCM组的1.1 4倍(P<0.01)和1.13倍(P<0.01), N组与NECCM组间无显著差异(P>0.05)。PCNA在细胞核内均匀染为棕黄色的颗粒即为阳性反应。H组和HECCM组细胞核内阳性颗粒较多 , 核致密浓染。图像分析及统计结果见表2。H组和HECCM组的表达量分别是NECCM组的1.22 倍 (P<0.01)和1.16倍(P<0.01)，亦分别是N组的1.49倍(P<0.01)和1 .41倍(P<0.01)。HECCM组和H组的表达量相比，无显著差异(P>0.05)。表2 各组周细胞α-SM-actin、PCNA表达量
, 百拇医药
(
±s,A值) 组别
n
α-SM-actin表达量
PCNA表达量
N
20
0.1237±0.0094**
0.1225±0.0184**
H
20
0.1368±0.0087
, 百拇医药
0.1821±0.0209
NECCM
20
0.1255±0.0101**
0.1492±0.0130**
HECCM
20
0.1413±0.0109
0.1727±0.0131
与H和HECCM组比较 ** P<0.01
2.3 周细胞的细胞周期分析
, 百拇医药
流式细胞仪检测结果，各期细胞数占细胞总数的百分率见表3。表中可见：H组和HECCM组G 0/G1期细胞的百分率分别较N组低11.61%和17.30%，较NECCM组低2.70%和8.39%。H组 和HECCM组的S期细胞的百分率分别较N组高6.32%和8.18%，较NECCM组高0.80%和2.66%。 H组和HECCM组的G2+M期细胞的百分率分别较N组高5.28%和9.12%，较NECCM组高1.88% 和5.72%。
表3 周细胞的细胞周期中各期细胞的百分率(%) 组别
G0/G1
S
G2+M
N
, 百拇医药
93.55
4.44
2.01
H
81.94
10.76
7.29
NECCM
84.64
9.96
5.41
HECCM
76.25
, 百拇医药
12.62
11.13
3 讨论
低氧是慢性肺动脉高压形成的重要因素之一, 它不仅可以直接刺激细胞增殖[8], 还可以 刺激肺血管内皮细胞合成、分泌某些生长因子(如PDGF, bFGF等)促进肺血管壁细胞增殖、迁 移和表型转变[9]。肺血管周细胞和内皮细胞有密切的结构和功能上的联系, 内皮 细胞与 周细胞常形成“闭锁”状连接(close or occluding junction)[2～10]及独特的嵌 合状结构, 称为“插头插座式”连接(peg and socket junction)[2～11]。生理状态下, 内 皮细胞抑制 周细胞生长[7], 在慢性低氧性肺动脉高压时, 无肌型肺动脉内皮细胞受损, 对内 皮下周 细胞的生长抑制作用减弱, 部分内皮细胞受到刺激后也可能分泌某些生长因子促进周细胞增 殖、分化[2]。本实验采用免疫细胞化学方法对体外培养的周细胞进行染色，观察 到H组和HECCM组周细胞表达α-SM-actin增强而不合成CD34和S-100，且分别与N组 和NECCM组相比,差异显著; 这与平滑肌细胞免疫表型相符[4～12]；而N组和NECCM 组的周细胞均表达α-SM-actin、CD34和S-100，与周细胞免疫表型相符[4～ 12]。同时， H组与HECCM组周细胞的PC NA表达明显较N组和NECCM组为高，差异极显著。流式细胞术分析表明，H组和HECCM组不仅能 推动细胞突破G0/G1期的关卡(check point)进入S期, 而且还可以推动细胞越过第二个 关卡G2/M期, 进入细胞分裂期。本实验结果表明，低氧可直接或经内皮细胞介导诱导肺血管周细胞增殖, 并向平滑肌样细胞 分化。进一步从体外证实了肺血管周细胞增殖、向平滑肌样细胞分化是慢性低氧性肺动脉高 压形成过程中无肌型肺动脉肌化的重要细胞来源。
, http://www.100md.com
国家自然科学基金资助项目(No. 39570289)
袁永辉，男，1966年生，主管技师
参 考 文 献
1，Emery CJ. Vascular remodeling in the lung. Eur Respir J，1994,7:217
2，吴永平, 车东媛. 周细胞在肺腺泡内动脉构型重建中的意义. 国外医学生理* 病理科学与临床分册, 1994,14(2):73
3，Nehls V, Drenckhahn D. The Versatility of microvascular pericytes : from mesenchyme to smooth muscle? Histochemistry, 1993, 99:1
, http://www.100md.com
4，张 燕, 熊 密, 车东媛等. 大鼠肺血管周细胞培养方法的建立及鉴定. 中国 学术期刊文摘 (科技快报), 1998, 4(2):209
5，袁永辉, 车东媛. 猪肺动脉壁细胞培养方法在肺血管构型重建机制研究中的应 用. 同济医科大学学报，1995, 24(6): 408
6，Gitlin J D, D'Amore P A. Culture of retinal capillary cells using selective growth media. Microvasc Res, 1979,26:74
7，Davies P, Smith B T, Maddalo F B et al. Characteristics of Lung pericytes in culture inducing their growth inhibition by endothelial substrate. Microvasc Res, 1987,33: 300
, 百拇医药
8，Storch T G, Talleg G D. Oxygen concentration regulates the prolife rative response of human fibroblasts to serum and growth factors. Exp cell Res, 1988,175:317
9，蔡英年. 肺动脉高压形成时肺血管壁细胞的增殖和调节. 生理科学进展, 1992 , 23(4):298
10，Schwartz S M, Liaw L. Growth control and morphogenesis in the de velopment and pathology of arteries. J cardiovasc pharmacol, 1993, 21:531
11，Shin W. Endothelium and pericyte interdigitation pathway for epiderm al growth factor? Microvasc Res, 1990, 40: 285
12，David Shepro, Nicole M L. Pericyte physiology. FASEB J, 1993,7:1031
(1999-11-30 收稿), 百拇医药
单位：同济医科大学基础医学院病理学教研室， 武汉 430030
关键词：肺动脉高压；低氧；周细胞；免疫表型
同济医科大学学报000404 摘要 用细胞培养、免疫细胞化学染色、图像分析及 流式细胞术观察低氧和猪肺动脉缺氧内皮细胞条件培养液(HECCM)对体外培养的新生大鼠肺 血管周细胞(PC)α-SM-actin、CD34、S-100和PCNA的表达及细胞周期的影响。 结 果发现 ，低氧和HECCM可促进PC表达α-SM-actin和PCNA, 而抑制CD34和S-100的合成, 促 进PC由静止期(G0/G1期)进入DNA合成期(S期)及有丝分裂期(G2+M期)。提示，低氧不 仅能 促进PC增殖, 而且还可促进其向平滑肌样细胞转化。故PC是慢性低氧性肺动脉高压时无肌型 细动脉肌化的重要细胞来源。
, http://www.100md.com
中图法分类号 R543.2， R392.11
Effects of Hypoxia on the Immunophenotyp es of
Pulmonary Vascular Pericytes in Vitro
Yuan Yonghui Wang Lin Xiong Mi et al
(Department of Pathology, School of Basic Medical Scien ces,Tongji Medical University, Wuhan 430030)
Abstract By using cell culture, immunocytochemical staining, im age analysis and flow cytometry etc, the effects of hypoxia and the medium condi tioned by hyp oxically cultured endothelial cells(HECCM) from porcine pulmonary arteries on th e expression of α-smooth muscle actin (α-SM-actin), CD34, S-100 and proliferat ing cell nuclear antigen (PCNA) and on cell cycle of newborn rat pulmonary vascu lar pericytes in vitro were studied. The results showed that hypoxia and HECCM c ould enhance the expression of α-SM-actin and PCNA of pericytes and promote t he pericyte from static phase (G0/G1 phase) to DNA synthetic phase (S phase) a nd m itotic phase (G2+M phase), but diminish the expression of CD34 and S-10 0 of peri cytes. These results suggested that hypoxia not only stimulated the proliferatio n of pericytes, but also induced pericyte differentiation into smooth-muscle-c el l-like cells. Thus pulmonary vascular pericytes are one important cellular sour c e of muscularization of non-muscular arterioles during the development of chron ic hypoxic pulmonary hypertension.
, 百拇医药
Key words pulmonary hypertension; hypoxia; pericyte; immunop henotype
无肌细动脉的肌化是慢性低氧性肺动脉高压时重要的血管构型重建现象之一[1～2] 。肺血管周细胞是位于无肌细动脉和毛细血管后静脉处的一种具有收缩和分化潜能的幼稚间 叶细胞, 在生理状态下, 对改变微血管管径、调节微循环血流量具有重要作用; 在病理状态 下, 可以增殖, 向中胚层源性的其他细胞转化[2～3]。为了探讨无肌细动脉肌化细 胞的来源, 本室在国内首次建立了肺血管周细胞的体外培养方法[4]。本实验采用 细胞培养、免疫细胞化学染色、图像分析及流式细胞术等方法来观察体外培养的肺血管周细 胞及低氧对周细胞增殖和免疫表型的影响。
1 材料和方法
1.1 主要试剂
, http://www.100md.com
M199培养基、无血清DME/F-12混合培养液(SFM)、胎牛血清(FBS)等均为美国生命公司产品;平滑肌肌动蛋白(α-SM-actin)、CD34、S-100、增殖细胞核抗原(PCNA)等单克隆抗体,链霉亲和素-生物素-过氧化物酶复合物(SABC)试剂盒均购自武汉博士德生物工程有限公司。
1.2 猪肺动脉内皮细胞(PAEC)的培养及其条件培养液(ECCM)的收集
参见文献[5],无菌取出成年猪肺动脉干,用胰蛋白酶消化收集PAEC,加入含100ml/LFBS的M199培养液置37℃CO2培养箱内培养和传代。常氧内皮细胞条件培养液(NECCM)和缺氧内皮细胞条件培养液(HECCM)的制备:取第2～4代生长汇合的PAEC,换以SFM后,分别在常氧(21%O2,5%CO2和74%N2)和低氧(4%O2,5%CO2和91%N2)条件下继续培养24h,收集上清液,离心,微孔滤膜过滤后即为NECCM和HECCM。-20℃保存备用。
, 百拇医药
1.3 新生大鼠肺血管周细胞的培养及实验分组 参见文献[4],新生1～2d的SD大鼠，由同济医科大学实验动物学部提供,颈椎脱臼法处死,无菌条件下取出心肺,D-Hanks液漂洗2次,剔除肺膜、支气管、较大血管及其分支。取末梢肺组织,加入2.0g/LⅣ型胶原酶37℃消化2h,消化悬液先后经80目(孔径约216μm),140目(孔径约110μm)和220目(孔径约70μm)的不锈钢筛网过滤,收集220目筛网上、长度约70～110μm的微血管段,用100ml/LFBS的M199培养液静置培养3d后,换用选择性条件培养液(M199+100ml/LFBS+400ml/L灭活的骨肉瘤S180细胞条件培养液)[6]。传代至4～5代,即可得到纯度较高的微血管周细胞[4～7]。细胞体积较大,呈多边形,细胞边缘不平,伸出大量伪足,与相邻细胞围成似“管状”结构,细胞间无接触抑制,可生长成多层排列。取生长在盖玻片上或培养瓶内的第5代周细胞，改换SFM液，同步培养24h后，再按下列4种不同条件分组，继续培养24h，收样。实验分组:N组(SFM，常氧),H组(SFM，低氧),NECCM组(NECCM，常氧)和HECCM组(HECCM，常氧)。
, 百拇医药
1.4 免疫细胞化学染色及图像分析
取出各组附有细胞生长的盖玻片，用冷酒精丙酮(1∶1)固定20min后,分别用抗PCNA,抗α-SM-actin、抗CD34、抗S-100等4种单克隆抗体对各组周细胞进行SABC法染色,光镜下,对α-SM-actin、CD34和S-100进行半定量分析；对α-SM-actin和PCNA进行定量分析，即光镜下随机选取多个细胞，用TJTY-300型全自动图像分析仪检测其相对含量即平均吸光度(A值);并对各项数据进行t检验。
1.5 周细胞的细胞周期检测
取各组培养瓶内生长的细胞，用酶消化制成细胞悬液，计数，各组细胞总数在2×106个左右者，用700ml/L冷酒清(4℃)固定30min,碘化丙锭染色15min，FACS440型流式细胞仪进行细胞周期分析,经微机处理得出各期细胞数占细胞总数的百分率。
, 百拇医药
2 结果
2.1 周细胞表达的α-SM-actin、CD34和S-100蛋白的半定量结果
免疫细胞化学染色,细胞浆内有棕黄色均质或细颗粒状物质为强阳性反应，出现淡黄色均质或细颗粒状物质为阳性反应；无黄色物质为阴性反应。半定量分析结果见表1。
表1 各组周细胞α-SM-actin、CD34和S-100半定量分析结果 组别
α-SM-actin
CD34
S-100
N
+
, 百拇医药
+
+
H
-
-
NECCM
+
+
+
HECCM
-
-
, 百拇医药
：强阳性，+：阳性， -：阴性
2.2 周细胞的α-SM-actin和PCNA表达的图像分析
α-SM-actin在周细胞浆内表达为黄色丝状或条状物质。H组和HECCM组周细胞胞浆内α-S M- actin表达较强, 呈棕黄色; N组和NECCM组表达较弱, 呈淡黄色，图像分析及统计结果见表2 。H组的表达量为N组的1.11倍(P<0.01)； HECCM组表达量分别为N组和NECCM组的1.1 4倍(P<0.01)和1.13倍(P<0.01), N组与NECCM组间无显著差异(P>0.05)。PCNA在细胞核内均匀染为棕黄色的颗粒即为阳性反应。H组和HECCM组细胞核内阳性颗粒较多 , 核致密浓染。图像分析及统计结果见表2。H组和HECCM组的表达量分别是NECCM组的1.22 倍 (P<0.01)和1.16倍(P<0.01)，亦分别是N组的1.49倍(P<0.01)和1 .41倍(P<0.01)。HECCM组和H组的表达量相比，无显著差异(P>0.05)。表2 各组周细胞α-SM-actin、PCNA表达量
, 百拇医药
(
±s,A值) 组别n
α-SM-actin表达量
PCNA表达量
N
20
0.1237±0.0094**
0.1225±0.0184**
H
20
0.1368±0.0087
, 百拇医药
0.1821±0.0209
NECCM
20
0.1255±0.0101**
0.1492±0.0130**
HECCM
20
0.1413±0.0109
0.1727±0.0131
与H和HECCM组比较 ** P<0.01
2.3 周细胞的细胞周期分析
, 百拇医药
流式细胞仪检测结果，各期细胞数占细胞总数的百分率见表3。表中可见：H组和HECCM组G 0/G1期细胞的百分率分别较N组低11.61%和17.30%，较NECCM组低2.70%和8.39%。H组 和HECCM组的S期细胞的百分率分别较N组高6.32%和8.18%，较NECCM组高0.80%和2.66%。 H组和HECCM组的G2+M期细胞的百分率分别较N组高5.28%和9.12%，较NECCM组高1.88% 和5.72%。
表3 周细胞的细胞周期中各期细胞的百分率(%) 组别
G0/G1
S
G2+M
N
, 百拇医药
93.55
4.44
2.01
H
81.94
10.76
7.29
NECCM
84.64
9.96
5.41
HECCM
76.25
, 百拇医药
12.62
11.13
3 讨论
低氧是慢性肺动脉高压形成的重要因素之一, 它不仅可以直接刺激细胞增殖[8], 还可以 刺激肺血管内皮细胞合成、分泌某些生长因子(如PDGF, bFGF等)促进肺血管壁细胞增殖、迁 移和表型转变[9]。肺血管周细胞和内皮细胞有密切的结构和功能上的联系, 内皮 细胞与 周细胞常形成“闭锁”状连接(close or occluding junction)[2～10]及独特的嵌 合状结构, 称为“插头插座式”连接(peg and socket junction)[2～11]。生理状态下, 内 皮细胞抑制 周细胞生长[7], 在慢性低氧性肺动脉高压时, 无肌型肺动脉内皮细胞受损, 对内 皮下周 细胞的生长抑制作用减弱, 部分内皮细胞受到刺激后也可能分泌某些生长因子促进周细胞增 殖、分化[2]。本实验采用免疫细胞化学方法对体外培养的周细胞进行染色，观察 到H组和HECCM组周细胞表达α-SM-actin增强而不合成CD34和S-100，且分别与N组 和NECCM组相比,差异显著; 这与平滑肌细胞免疫表型相符[4～12]；而N组和NECCM 组的周细胞均表达α-SM-actin、CD34和S-100，与周细胞免疫表型相符[4～ 12]。同时， H组与HECCM组周细胞的PC NA表达明显较N组和NECCM组为高，差异极显著。流式细胞术分析表明，H组和HECCM组不仅能 推动细胞突破G0/G1期的关卡(check point)进入S期, 而且还可以推动细胞越过第二个 关卡G2/M期, 进入细胞分裂期。本实验结果表明，低氧可直接或经内皮细胞介导诱导肺血管周细胞增殖, 并向平滑肌样细胞 分化。进一步从体外证实了肺血管周细胞增殖、向平滑肌样细胞分化是慢性低氧性肺动脉高 压形成过程中无肌型肺动脉肌化的重要细胞来源。
, http://www.100md.com
国家自然科学基金资助项目(No. 39570289)
袁永辉，男，1966年生，主管技师
参 考 文 献
1，Emery CJ. Vascular remodeling in the lung. Eur Respir J，1994,7:217
2，吴永平, 车东媛. 周细胞在肺腺泡内动脉构型重建中的意义. 国外医学生理* 病理科学与临床分册, 1994,14(2):73
3，Nehls V, Drenckhahn D. The Versatility of microvascular pericytes : from mesenchyme to smooth muscle? Histochemistry, 1993, 99:1
, http://www.100md.com
4，张 燕, 熊 密, 车东媛等. 大鼠肺血管周细胞培养方法的建立及鉴定. 中国 学术期刊文摘 (科技快报), 1998, 4(2):209
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(1999-11-30 收稿), 百拇医药