喉癌间质肥大细胞与其他浸润细胞的关系
作者：曲静 王会珍 彭希平 王周南
单位：曲静(山西医科大学 组织胚胎学教研室，太原 030001)；王会珍(山西医科大学 组织胚胎学教研室，太原 030001)；彭希平(山西医科大学 组织胚胎学教研室，太原 030001)；王周南(山西医科大学 组织胚胎学教研室，太原 030001)
关键词：喉肿瘤；肥大细胞；显微镜检查，电子
山西医科大学学报000402 摘要：为了探讨肥大细胞(MC)在喉癌间质反应中的作用， 用 光镜、电镜技术研究了45例喉鳞癌组织及癌旁组织中MC形态学特征及其与其他浸润细胞的关 系。结果 发现癌间质中MC呈活跃的脱颗粒状态，并与淋巴细胞、浆细胞、巨噬细胞、嗜酸粒细胞、成 纤维细胞关系密切。癌旁组织中淋巴细胞浸润程度高的，MC数量多(P<0.01)；癌组织 中有 明显胶原纤维包裹的，MC数量多(P<0.01)。结果提示：喉癌间质中的MC与其他浸润细 胞有协同作用，可能参与了宿主抗肿瘤免疫反应。
, http://www.100md.com
中图分类号：R361+.3 文献标识码：A
文章编号：1007-6611(2000)04-0292-03
Relationship between mast cells and other infiltrated cells in the stroma of laryngeal carcinoma
QU Jing WANG Hui-zhen PENG Xi-ping et al
(Dept.of Histology and Embryolog y, Shanxi Medical University,Taiyuan 030001,China)
Abstract:To explore the effect of tumor-associ ated mast cells and other infiltrated cells in the stroma of laryngeal carcinoma .Forty-five specimens were divided into two groups:tumor group (n=35) and pe ritu mor group (n=10).Results:Mast cells in the tumor group exhibited active degr anul ation,and contacted closely with lymphocytes, plasma cells, macrophages, eosinop hils and fibroblasts. The number of mast cells was significantly higher in the p eritumor group with lymphocytes infiltration than that with few lymphocyte infil tration. The number of mast cells was significantly higher in the tumor group wi th more collagenous fiber than that with few collagenous fiber. These suggest th at mast cells and other infiltrated cells may together play a critical role in t he host antitumor immune reaction.
, http://www.100md.com
Key words:laryngeal neoplasms; mast cells; microscopy，electron
肿瘤是严重威胁人类健康的常见病。目前 的研究认为，肿瘤间质内可影响肿瘤细胞生长的三个因素为血管、炎细胞、成纤维细胞及其 产物。而肥大细胞(MC)作为间质结缔组织的一种细胞成分，其作用如何至今还有争议[ 1，2 ]。本文观察分析了喉癌间质MC与淋巴细胞等浸润细胞的关系，及与成纤维细胞及胶原纤 维的关系，以期为进一步探讨MC在肿瘤生长中的作用提供形态学参考。
1 材料和方法
1.1 材料 收集1997-06～1998-09喉癌手术标本45例，35例在癌中心取癌组织为癌组，另 10例取癌与正常交界处的喉组织为癌旁组。
1.2 光镜标本 将两组标本用10%福尔马林固定，石蜡包埋，6 μm连续切片，作如下染色 。
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1.2.1 HE染色 一般组织学观察，并观察二组标本中淋巴细胞浸润情况，据Hamlin提 出的淋巴细胞浸润的半定量评分法：I级无淋巴细胞浸润或偶见；Ⅱ级少量淋巴细胞浸润， 较分散；Ⅲ级中等量的淋巴细胞浸润，稍密集；Ⅳ级大量致密的淋巴细胞浸润但不伴淋巴小 结形成；Ⅴ级大量致密的淋巴细胞浸润伴淋巴小结形成。把Ⅰ级和Ⅱ级归为淋巴细胞浸润程 度低组，Ⅲ级、Ⅳ级和Ⅴ级归为淋巴细胞浸润程度高组。另外观察癌间质中胶原纤维的分布 情况把有二个或二个以上癌巢完整地被胶原纤维包裹的归为有明显胶原纤维包裹组，反之归 为无明显胶原纤维包裹组。
1.2.2 甲苯胺蓝(TB)染色 用0.5% TB染液(pH 0.5)室温下染30 min，利用MC颗粒的异 染性来观察其形态、分布并计数。
1.3 电镜标本 取新鲜喉癌组织6例，癌旁组织3例按常规方 法制备电镜标本并观察MC超微结构及其与周围细胞的关系。
1.4 MC计数及统计方法 用网络测微计数器对MC进行计数。每例标本随机计数20个高倍 (×400)网格视野，计算出每组标本，每mm2内MC的均数和标准误(s
)。统计方法用t检验。
, 百拇医药
2 结果
2.1 光镜部分
2.1.1 HE染色 35例喉癌组织均为鳞状上皮癌，且大多为高分化鳞癌，而10例癌旁组织 标本均为正常喉组织，上皮未见增生。
2.1.2 TB染色 癌间质MC形状不规则，体积较大(图1)，细胞内颗粒呈深紫蓝色，而癌旁 组织中MC数量多且形状规则。比较二组淋巴细胞浸润程度与MC数量的关系发现：癌组，MC数 量与淋巴细胞浸润程度无关(P>0.05)；癌旁组，淋巴细胞浸润程度高者MC数量多，反 之则少(P<0.01，见表1)。另外比较喉癌胶原纤维分布与MC数量的关系发现：有明 显胶 原纤维包裹组MC的数量(n=16，462.00±31.08)明显高于无明显胶原纤维包裹组MC的数 量(n=19，362.97±15.68)，二者相比，差别有显著性意义(t=2.98，P<0.01) 。
表 1 淋巴细胞浸润程度与MC数 量的关系(mm2，±s)
, 百拇医药
淋巴细胞浸润程度高组
淋巴细胞浸润程度低组
t值
癌组(n=35)
423.00±31.74(n=18)
392.62±17.65(n=17)
0.82
癌旁组(n=10)
759.76±71.72(n=5)
486.39±22.25(n=5)
3.64
, 百拇医药
与低组比P>0.05，与低组比P<0. 01
2.2 电镜部分
2.2.1 癌间质中MC形态不规则，颗粒电子密度不均，甚至完全空泡化；而癌旁组织中MC 颗粒电子密度较为均匀一致。
2.2.2 有些MC与淋巴细胞紧密接触，并可看到MC脱出的颗粒靠近淋巴细胞，此处的淋巴 细胞核大，有切迹，核内常染色质增多，呈母细胞化(图2)。镜下可见MC与浆细胞紧密接触 ，还可见到活化的淋巴细胞、浆细胞与MC同时出现的情况。有些MC与巨噬细胞、嗜酸粒细胞 紧密接触，并可见细胞膜的融合。许多MC常与成纤维细胞相邻，此处可见胶原纤维的增多。
3 讨论
喉癌是呼吸系统常见的肿瘤之一，影响喉癌预后的因素很多。但近几年宿主的免疫状态，特 别是反映局部抗肿瘤免疫能力的癌周浸润细胞受到了人们的重视，而喉癌组织周边淋巴细胞 浸润 程度是宿主抗肿瘤免疫反应比较直接的客观指标[3]。本文的实验结果显示癌周组 织 淋巴细胞浸润程度高的，MC数量也多，反之则少。这表明淋巴细胞浸润程度高的，宿主抗肿 瘤免疫反应强的，MC数量也多。在电镜观察中也可见到淋巴细胞与MC关系密切，此时的淋巴 细胞呈母细胞化，MC也呈活跃的脱颗粒状，脱出的颗粒靠近淋巴细胞。虽然多数学者认为肿 瘤免疫系统以细胞免疫为主，其形式是以激活的淋巴细胞包绕肿瘤组织来完成，但本实验在 肿瘤 细胞附近也同时观察到浆细胞，则可能此时有致敏的B淋巴细胞分化为浆细胞，并产生相应 的抗体参与了抗肿瘤作用。
, 百拇医药
图1 癌间质MC TB×400
图2 癌间质中MC与活化的淋巴细胞(↑)相邻 ×10 000
本文还观察到了处于脱颗粒状态的MC与巨噬细胞、嗜酸粒细胞有紧密接触，接触之处细 胞膜界限不清。由此推测MC与这二种细胞也有相互作用。
综上所见，我们认为在肿瘤间质中MC功能活跃，可与淋巴细胞等多种细胞有协同作用，参与 宿 主抗肿瘤免疫反应[5]。而这种协同作用可能是通过MC-白细胞的细胞因子串联实 现的，即激活的MC可产生多种细胞因子，这些细胞因子可影响其他效应细胞的参与，而新 参与的细胞也可分泌细胞因子，又反过来影响MC的功能。
此外，本实验结果还发现有明显胶 原纤维包裹组的MC数量显著多于无明显胶原纤维包裹组。即MC多的，纤维化程度也高。在电 镜观察中也常看到MC与成纤维细胞紧密相邻，此处胶原纤维增多，有文章报道，成纤维细胞 可吞 噬MC颗粒，后者可能刺激胶原合成[6]，而在许多纤维化疾病或纤维化状态都有MC 数目的增加及MC脱颗粒现象。在肿瘤间质中出现大量胶原纤维可以包裹癌巢，能限制肿瘤细 胞的发展及进一步的浸润和转移，而MC促进了这一作用。
, 百拇医药
作者简介：曲静，女，1969年4月生，硕士，讲师.
参考文献：
[1]Ionov ID.Inhibition of mast cell activity as a new approach to anticancer therapy [J]. Int J Radiat Biol, 1991, 60: 287.
[2]Tanooka H,Kitamura Y,Sudo T, et al. Evidence for involvemen t o f mast cells in tumor suppression in mice [J]. J Natl Cancer Inst, 1982, 69 (6 ): 1305.
[3]韩德民，边岩松，夏文茹, 等. 喉癌及其周围组织三维结构特点扫描电 镜观察[J]. 中华肿瘤杂志， 1997, 19 (1)： 32.
, 百拇医药
[4]Matsvda H, Kawakita K, Kiso Y, et al.Substance P induces gr anulocy te infiltration through degranulation of mast cells [J]. J Immunol ogy, 1989, 142 (2): 927.
[5]鲍笑，李莉. 肥大细胞分泌的细胞因子及生物学作用[J]. 国外医学免 疫学分册， 1998, 21 (1)： 27.
[6]Takeda Y. Phagocytosis of mast cell granules by fibroblasts of human gingiva [J]. Virchows Arch (Pathol Anat), 1985, 406: 197.
收稿日期：1999-12-01, http://www.100md.com
单位：曲静(山西医科大学 组织胚胎学教研室，太原 030001)；王会珍(山西医科大学 组织胚胎学教研室，太原 030001)；彭希平(山西医科大学 组织胚胎学教研室，太原 030001)；王周南(山西医科大学 组织胚胎学教研室，太原 030001)
关键词：喉肿瘤；肥大细胞；显微镜检查，电子
山西医科大学学报000402 摘要：为了探讨肥大细胞(MC)在喉癌间质反应中的作用， 用 光镜、电镜技术研究了45例喉鳞癌组织及癌旁组织中MC形态学特征及其与其他浸润细胞的关 系。结果 发现癌间质中MC呈活跃的脱颗粒状态，并与淋巴细胞、浆细胞、巨噬细胞、嗜酸粒细胞、成 纤维细胞关系密切。癌旁组织中淋巴细胞浸润程度高的，MC数量多(P<0.01)；癌组织 中有 明显胶原纤维包裹的，MC数量多(P<0.01)。结果提示：喉癌间质中的MC与其他浸润细 胞有协同作用，可能参与了宿主抗肿瘤免疫反应。
, http://www.100md.com
中图分类号：R361+.3 文献标识码：A
文章编号：1007-6611(2000)04-0292-03
Relationship between mast cells and other infiltrated cells in the stroma of laryngeal carcinoma
QU Jing WANG Hui-zhen PENG Xi-ping et al
(Dept.of Histology and Embryolog y, Shanxi Medical University,Taiyuan 030001,China)
Abstract:To explore the effect of tumor-associ ated mast cells and other infiltrated cells in the stroma of laryngeal carcinoma .Forty-five specimens were divided into two groups:tumor group (n=35) and pe ritu mor group (n=10).Results:Mast cells in the tumor group exhibited active degr anul ation,and contacted closely with lymphocytes, plasma cells, macrophages, eosinop hils and fibroblasts. The number of mast cells was significantly higher in the p eritumor group with lymphocytes infiltration than that with few lymphocyte infil tration. The number of mast cells was significantly higher in the tumor group wi th more collagenous fiber than that with few collagenous fiber. These suggest th at mast cells and other infiltrated cells may together play a critical role in t he host antitumor immune reaction.
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Key words:laryngeal neoplasms; mast cells; microscopy，electron
肿瘤是严重威胁人类健康的常见病。目前 的研究认为，肿瘤间质内可影响肿瘤细胞生长的三个因素为血管、炎细胞、成纤维细胞及其 产物。而肥大细胞(MC)作为间质结缔组织的一种细胞成分，其作用如何至今还有争议[ 1，2 ]。本文观察分析了喉癌间质MC与淋巴细胞等浸润细胞的关系，及与成纤维细胞及胶原纤 维的关系，以期为进一步探讨MC在肿瘤生长中的作用提供形态学参考。
1 材料和方法
1.1 材料 收集1997-06～1998-09喉癌手术标本45例，35例在癌中心取癌组织为癌组，另 10例取癌与正常交界处的喉组织为癌旁组。
1.2 光镜标本 将两组标本用10%福尔马林固定，石蜡包埋，6 μm连续切片，作如下染色 。
, http://www.100md.com
1.2.1 HE染色 一般组织学观察，并观察二组标本中淋巴细胞浸润情况，据Hamlin提 出的淋巴细胞浸润的半定量评分法：I级无淋巴细胞浸润或偶见；Ⅱ级少量淋巴细胞浸润， 较分散；Ⅲ级中等量的淋巴细胞浸润，稍密集；Ⅳ级大量致密的淋巴细胞浸润但不伴淋巴小 结形成；Ⅴ级大量致密的淋巴细胞浸润伴淋巴小结形成。把Ⅰ级和Ⅱ级归为淋巴细胞浸润程 度低组，Ⅲ级、Ⅳ级和Ⅴ级归为淋巴细胞浸润程度高组。另外观察癌间质中胶原纤维的分布 情况把有二个或二个以上癌巢完整地被胶原纤维包裹的归为有明显胶原纤维包裹组，反之归 为无明显胶原纤维包裹组。
1.2.2 甲苯胺蓝(TB)染色 用0.5% TB染液(pH 0.5)室温下染30 min，利用MC颗粒的异 染性来观察其形态、分布并计数。
1.3 电镜标本 取新鲜喉癌组织6例，癌旁组织3例按常规方 法制备电镜标本并观察MC超微结构及其与周围细胞的关系。
1.4 MC计数及统计方法 用网络测微计数器对MC进行计数。每例标本随机计数20个高倍 (×400)网格视野，计算出每组标本，每mm2内MC的均数和标准误(s
)。统计方法用t检验。, 百拇医药
2 结果
2.1 光镜部分
2.1.1 HE染色 35例喉癌组织均为鳞状上皮癌，且大多为高分化鳞癌，而10例癌旁组织 标本均为正常喉组织，上皮未见增生。
2.1.2 TB染色 癌间质MC形状不规则，体积较大(图1)，细胞内颗粒呈深紫蓝色，而癌旁 组织中MC数量多且形状规则。比较二组淋巴细胞浸润程度与MC数量的关系发现：癌组，MC数 量与淋巴细胞浸润程度无关(P>0.05)；癌旁组，淋巴细胞浸润程度高者MC数量多，反 之则少(P<0.01，见表1)。另外比较喉癌胶原纤维分布与MC数量的关系发现：有明 显胶 原纤维包裹组MC的数量(n=16，462.00±31.08)明显高于无明显胶原纤维包裹组MC的数 量(n=19，362.97±15.68)，二者相比，差别有显著性意义(t=2.98，P<0.01) 。
表 1 淋巴细胞浸润程度与MC数 量的关系(mm2，
±s), 百拇医药
淋巴细胞浸润程度高组
淋巴细胞浸润程度低组
t值
癌组(n=35)
423.00±31.74(n=18)
392.62±17.65(n=17)
0.82
癌旁组(n=10)
759.76±71.72(n=5)
486.39±22.25(n=5)
3.64
, 百拇医药
与低组比P>0.05，与低组比P<0. 01
2.2 电镜部分
2.2.1 癌间质中MC形态不规则，颗粒电子密度不均，甚至完全空泡化；而癌旁组织中MC 颗粒电子密度较为均匀一致。
2.2.2 有些MC与淋巴细胞紧密接触，并可看到MC脱出的颗粒靠近淋巴细胞，此处的淋巴 细胞核大，有切迹，核内常染色质增多，呈母细胞化(图2)。镜下可见MC与浆细胞紧密接触 ，还可见到活化的淋巴细胞、浆细胞与MC同时出现的情况。有些MC与巨噬细胞、嗜酸粒细胞 紧密接触，并可见细胞膜的融合。许多MC常与成纤维细胞相邻，此处可见胶原纤维的增多。
3 讨论
喉癌是呼吸系统常见的肿瘤之一，影响喉癌预后的因素很多。但近几年宿主的免疫状态，特 别是反映局部抗肿瘤免疫能力的癌周浸润细胞受到了人们的重视，而喉癌组织周边淋巴细胞 浸润 程度是宿主抗肿瘤免疫反应比较直接的客观指标[3]。本文的实验结果显示癌周组 织 淋巴细胞浸润程度高的，MC数量也多，反之则少。这表明淋巴细胞浸润程度高的，宿主抗肿 瘤免疫反应强的，MC数量也多。在电镜观察中也可见到淋巴细胞与MC关系密切，此时的淋巴 细胞呈母细胞化，MC也呈活跃的脱颗粒状，脱出的颗粒靠近淋巴细胞。虽然多数学者认为肿 瘤免疫系统以细胞免疫为主，其形式是以激活的淋巴细胞包绕肿瘤组织来完成，但本实验在 肿瘤 细胞附近也同时观察到浆细胞，则可能此时有致敏的B淋巴细胞分化为浆细胞，并产生相应 的抗体参与了抗肿瘤作用。
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图1 癌间质MC TB×400
图2 癌间质中MC与活化的淋巴细胞(↑)相邻 ×10 000
本文还观察到了处于脱颗粒状态的MC与巨噬细胞、嗜酸粒细胞有紧密接触，接触之处细 胞膜界限不清。由此推测MC与这二种细胞也有相互作用。
综上所见，我们认为在肿瘤间质中MC功能活跃，可与淋巴细胞等多种细胞有协同作用，参与 宿 主抗肿瘤免疫反应[5]。而这种协同作用可能是通过MC-白细胞的细胞因子串联实 现的，即激活的MC可产生多种细胞因子，这些细胞因子可影响其他效应细胞的参与，而新 参与的细胞也可分泌细胞因子，又反过来影响MC的功能。
此外，本实验结果还发现有明显胶 原纤维包裹组的MC数量显著多于无明显胶原纤维包裹组。即MC多的，纤维化程度也高。在电 镜观察中也常看到MC与成纤维细胞紧密相邻，此处胶原纤维增多，有文章报道，成纤维细胞 可吞 噬MC颗粒，后者可能刺激胶原合成[6]，而在许多纤维化疾病或纤维化状态都有MC 数目的增加及MC脱颗粒现象。在肿瘤间质中出现大量胶原纤维可以包裹癌巢，能限制肿瘤细 胞的发展及进一步的浸润和转移，而MC促进了这一作用。
, 百拇医药
作者简介：曲静，女，1969年4月生，硕士，讲师.
参考文献：
[1]Ionov ID.Inhibition of mast cell activity as a new approach to anticancer therapy [J]. Int J Radiat Biol, 1991, 60: 287.
[2]Tanooka H,Kitamura Y,Sudo T, et al. Evidence for involvemen t o f mast cells in tumor suppression in mice [J]. J Natl Cancer Inst, 1982, 69 (6 ): 1305.
[3]韩德民，边岩松，夏文茹, 等. 喉癌及其周围组织三维结构特点扫描电 镜观察[J]. 中华肿瘤杂志， 1997, 19 (1)： 32.
, 百拇医药
[4]Matsvda H, Kawakita K, Kiso Y, et al.Substance P induces gr anulocy te infiltration through degranulation of mast cells [J]. J Immunol ogy, 1989, 142 (2): 927.
[5]鲍笑，李莉. 肥大细胞分泌的细胞因子及生物学作用[J]. 国外医学免 疫学分册， 1998, 21 (1)： 27.
[6]Takeda Y. Phagocytosis of mast cell granules by fibroblasts of human gingiva [J]. Virchows Arch (Pathol Anat), 1985, 406: 197.
收稿日期：1999-12-01, http://www.100md.com