用高效液相色谱法测定去纤软肝胶囊中丹参酮ⅡA的含量
作者：张敏 刘翔 菊德生 朱喆
单位：张敏 刘翔 菊德生(沈阳市第六人民医院,沈阳 110006)；朱喆(沈阳市第四人民医院,沈阳 110031)
关键词：高效液相色谱法；去纤软肝胶囊；丹参；丹参酮ⅡA
沈阳药科大学学报000515 摘 要 采用高效液相色谱法测定去纤软肝胶囊中丹参酮ⅡA的含量.回收率为100.4%，RSD为0.90%.
分类号 R914
Determination of the Content of Tanshinone ⅡA in the Quxianruangan Capsules by HPLC
Zhang Min, Liu Xiang, Ju Desheng, Zhu Zhe
, 百拇医药
(The No.6 Hospital of Shenyang, Shenyang 110006)
Abstract The Quxianruangan Capsule is made of Radix Salviae miltiorrhizae,Radix Bupleuri, Carapax Trionycis,Ganoderma，etc.It treats eopatitis and,cirrhosis of the liver.Tanshinone ⅡA in the Quxianrungan Capsule was determind quantitatively by HPLC with the YMC-Pack ODS-A(5μm,4.6 mm×150 mm).The mobile phase was MeOH-H2O(75∶25) and the UV absorbency was monitored at 270nm.The mean recovery of tanshinone ⅡA was 100% with the relative standard deviation of 0.90%.The results showed that this method was simple,sensitive,precise and accurate enough to be used in the quality control of Quxianruangan Capsules.
, 百拇医药
Key words
Key words HPLC;Quxianruangan Capsule;Salvia miltiorrhiza;tanshinone ⅡA
去纤软肝胶囊(0.5 g/粒)由丹参、柴胡、鳖甲、冬虫夏草等7种中药提制而成，临床用于慢性肝炎及肝硬化.本处方丹参为君药，所以，以丹参中所含成分作为指标值，控制制剂质量是非常必要的.丹参中丹参酮类化合物的测定方法较多〔1～3〕，作者报道用高效液相色谱法测定去纤软肝胶囊中丹参酮ⅡA的含量.
1 仪器与材料
高效液相色谱仪：岛津LC—10A；检测器：岛津SPD—10A；数据处理仪：岛津CR—6A；去纤软肝胶囊(沈阳市第六人民医院)；丹参酮ⅡA对照品(中国药品生物制品检定所)；甲醇(色谱纯)；重蒸馏水；乙醚(分析纯).
, http://www.100md.com
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：YMC-Pack ODS-A柱(5 μm,4.6 mm×150 mm)；流动相：甲醇-水(体积比75∶25)；检测波长：270 nm；流速：1.0 mL/min.
2.2 线性试验
精密称取丹参酮ⅡA对照品适量，加甲醇制成0.1 mg/mL的溶液,精密量取0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，分别置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度.精密量取上述溶液各20 μL,测定，记录峰面积，以丹参酮ⅡA为横坐标(C)，峰面积积分为纵坐标(A)，进行线性回归，得回归方程为A=26 611C+1 316 814，r=0.999 6.结果表明丹参酮ⅡA在选定的浓度范围(0.1～1.0 μg)内，标准曲线线性关系良好，符合外标法定量测定要求.
, 百拇医药
2.3 精密度试验
取线性试验项下丹参酮ⅡA对照品溶液(0.1 mg/mL),连续进样5次,每次20 μL，根据峰面积计算，RSD=1.60%.
2.4 稳定性试验
样品(批号：991111)溶液在室温下放置，每隔6 h测定1次，24 h内共测4次，峰面积积分值分别是1 490 793、1 489 052、1 480 204、1 479 686，RSD为0.34%，证明丹参酮ⅡA含量至少在24 h内稳定.
2.5 样品测定
取本品10粒，取出内容物，研细，精密称取1.000 0 g，加乙醚30 mL，超声波震荡15 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇适量使溶解并定量转移至50 mL量瓶中，加甲醇至刻度，作为供试品溶液；另取丹参酮ⅡA对照品适量，加甲醇制成0.1 mg/mL溶液，作为对照品溶液，分别测定，记录峰面积(图1、2)，计算即得.结果见表1.
, 百拇医药
2.6 回收率试验
按去纤软肝胶囊处方,配制不含丹参的胶囊.取6份(每份1.000 0 g),分别加入2.00 mg丹参酮ⅡA对照品，按样品测定法测定含量，结果见表2.
3 讨论
a. 实验表明，采用乙醚超声波震荡提取与采用甲醇为溶媒加热回流提取(1 h)或索氏提取器中乙醚回流提取(3 h)比较,杂质干扰少.
Fig.1 The chromatogram of the sample
Fig.2 The chromatogram of the control
Tab.1 Determination of the weight of tanshinone ⅡA in the Quxianruangan Capsule Batch number
, http://www.100md.com
Content of tanshinoneⅡA/mg*grain-1
RSD/%
1
2
3
Mean
991111
0.563 6
0.565 5
0.563 8
0.564 3
0.14
, http://www.100md.com
991201
0.556 6
0.559 2
0.555 3
0.557 0
0.26
991222
0.538 4
0.544 4
0.545 2
0.542 7
0.52
, http://www.100md.com
Tab.2 The results of recoveries No.
The weight of the sample
without Dan-Shen Root/g
The added weight
of tanshinone ⅡA/mg
Measuremental
weight/mg
Recovery/%
1
1.000 0
, http://www.100md.com
2.00
1.998
99.9
2
1.000 0
2.00
2.000
100.0
3
1.000 0
2.00
1.978
98.8
, 百拇医药
4
1.000 0
2.00
2.052
102.6
5
1.000 0
2.00
2.016
100.8
6
1.000 0
2.00
, 百拇医药
2.004
100.2
X=100.4%；RSD=0.90% b.采用高效液相色谱法测定去纤软肝胶囊中丹参酮ⅡA，制剂中其他成分无干扰，可用于制定去纤软肝胶囊的质量标准.
c.丹参中所含的丹参酮类化合物为脂溶性成分，如制剂工艺不当，成品中仅含微量丹参酮类化合物，应引起注意.
参考文献
1，中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国药典:一部.广州：广东科技出版社，1995.62
2，Nobuyuki Okamura，Keizo Kobayashi,Akira Yagi.High-performance liquid chromatography of abietane-type compounds.J Chromatogr,1991,542:317
3，王宝琴主编.中成药质量标准与标准物质研究.北京：中国医药科技出版社，1994.242
收稿日期:2000-03-20
, http://www.100md.com
单位：张敏 刘翔 菊德生(沈阳市第六人民医院,沈阳 110006)；朱喆(沈阳市第四人民医院,沈阳 110031)
关键词：高效液相色谱法；去纤软肝胶囊；丹参；丹参酮ⅡA
沈阳药科大学学报000515 摘 要 采用高效液相色谱法测定去纤软肝胶囊中丹参酮ⅡA的含量.回收率为100.4%，RSD为0.90%.
分类号 R914
Determination of the Content of Tanshinone ⅡA in the Quxianruangan Capsules by HPLC
Zhang Min, Liu Xiang, Ju Desheng, Zhu Zhe
, 百拇医药
(The No.6 Hospital of Shenyang, Shenyang 110006)
Abstract The Quxianruangan Capsule is made of Radix Salviae miltiorrhizae,Radix Bupleuri, Carapax Trionycis,Ganoderma，etc.It treats eopatitis and,cirrhosis of the liver.Tanshinone ⅡA in the Quxianrungan Capsule was determind quantitatively by HPLC with the YMC-Pack ODS-A(5μm,4.6 mm×150 mm).The mobile phase was MeOH-H2O(75∶25) and the UV absorbency was monitored at 270nm.The mean recovery of tanshinone ⅡA was 100% with the relative standard deviation of 0.90%.The results showed that this method was simple,sensitive,precise and accurate enough to be used in the quality control of Quxianruangan Capsules.
, 百拇医药
Key words
Key words HPLC;Quxianruangan Capsule;Salvia miltiorrhiza;tanshinone ⅡA
去纤软肝胶囊(0.5 g/粒)由丹参、柴胡、鳖甲、冬虫夏草等7种中药提制而成，临床用于慢性肝炎及肝硬化.本处方丹参为君药，所以，以丹参中所含成分作为指标值，控制制剂质量是非常必要的.丹参中丹参酮类化合物的测定方法较多〔1～3〕，作者报道用高效液相色谱法测定去纤软肝胶囊中丹参酮ⅡA的含量.
1 仪器与材料
高效液相色谱仪：岛津LC—10A；检测器：岛津SPD—10A；数据处理仪：岛津CR—6A；去纤软肝胶囊(沈阳市第六人民医院)；丹参酮ⅡA对照品(中国药品生物制品检定所)；甲醇(色谱纯)；重蒸馏水；乙醚(分析纯).
, http://www.100md.com
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：YMC-Pack ODS-A柱(5 μm,4.6 mm×150 mm)；流动相：甲醇-水(体积比75∶25)；检测波长：270 nm；流速：1.0 mL/min.
2.2 线性试验
精密称取丹参酮ⅡA对照品适量，加甲醇制成0.1 mg/mL的溶液,精密量取0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，分别置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度.精密量取上述溶液各20 μL,测定，记录峰面积，以丹参酮ⅡA为横坐标(C)，峰面积积分为纵坐标(A)，进行线性回归，得回归方程为A=26 611C+1 316 814，r=0.999 6.结果表明丹参酮ⅡA在选定的浓度范围(0.1～1.0 μg)内，标准曲线线性关系良好，符合外标法定量测定要求.
, 百拇医药
2.3 精密度试验
取线性试验项下丹参酮ⅡA对照品溶液(0.1 mg/mL),连续进样5次,每次20 μL，根据峰面积计算，RSD=1.60%.
2.4 稳定性试验
样品(批号：991111)溶液在室温下放置，每隔6 h测定1次，24 h内共测4次，峰面积积分值分别是1 490 793、1 489 052、1 480 204、1 479 686，RSD为0.34%，证明丹参酮ⅡA含量至少在24 h内稳定.
2.5 样品测定
取本品10粒，取出内容物，研细，精密称取1.000 0 g，加乙醚30 mL，超声波震荡15 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇适量使溶解并定量转移至50 mL量瓶中，加甲醇至刻度，作为供试品溶液；另取丹参酮ⅡA对照品适量，加甲醇制成0.1 mg/mL溶液，作为对照品溶液，分别测定，记录峰面积(图1、2)，计算即得.结果见表1.
, 百拇医药
2.6 回收率试验
按去纤软肝胶囊处方,配制不含丹参的胶囊.取6份(每份1.000 0 g),分别加入2.00 mg丹参酮ⅡA对照品，按样品测定法测定含量，结果见表2.
3 讨论
a. 实验表明，采用乙醚超声波震荡提取与采用甲醇为溶媒加热回流提取(1 h)或索氏提取器中乙醚回流提取(3 h)比较,杂质干扰少.
Fig.1 The chromatogram of the sample
Fig.2 The chromatogram of the control
Tab.1 Determination of the weight of tanshinone ⅡA in the Quxianruangan Capsule Batch number
, http://www.100md.com
Content of tanshinoneⅡA/mg*grain-1
RSD/%
1
2
3
Mean
991111
0.563 6
0.565 5
0.563 8
0.564 3
0.14
, http://www.100md.com
991201
0.556 6
0.559 2
0.555 3
0.557 0
0.26
991222
0.538 4
0.544 4
0.545 2
0.542 7
0.52
, http://www.100md.com
Tab.2 The results of recoveries No.
The weight of the sample
without Dan-Shen Root/g
The added weight
of tanshinone ⅡA/mg
Measuremental
weight/mg
Recovery/%
1
1.000 0
, http://www.100md.com
2.00
1.998
99.9
2
1.000 0
2.00
2.000
100.0
3
1.000 0
2.00
1.978
98.8
, 百拇医药
4
1.000 0
2.00
2.052
102.6
5
1.000 0
2.00
2.016
100.8
6
1.000 0
2.00
, 百拇医药
2.004
100.2
X=100.4%；RSD=0.90% b.采用高效液相色谱法测定去纤软肝胶囊中丹参酮ⅡA，制剂中其他成分无干扰，可用于制定去纤软肝胶囊的质量标准.
c.丹参中所含的丹参酮类化合物为脂溶性成分，如制剂工艺不当，成品中仅含微量丹参酮类化合物，应引起注意.
参考文献
1，中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国药典:一部.广州：广东科技出版社，1995.62
2，Nobuyuki Okamura，Keizo Kobayashi,Akira Yagi.High-performance liquid chromatography of abietane-type compounds.J Chromatogr,1991,542:317
3，王宝琴主编.中成药质量标准与标准物质研究.北京：中国医药科技出版社，1994.242
收稿日期:2000-03-20
, http://www.100md.com