金丝桃苷对培养的乳鼠心肌细胞的保护作用
作者：徐颖 马轶 陈飞 孙朋悦 张宝凤 陈英杰
单位：徐颖(沈阳药科大学药学系，沈阳 110015)；马轶(沈阳市传染病医院，沈阳 110015)；陈飞(辽宁省微生物研究所)；孙朋悦 张宝凤 陈英杰(沈阳药科大学药学系，沈阳 110015)
关键词：金丝桃苷；心肌细胞；保护作用
沈阳药科大学学报000519 摘 要 利用体外培养的乳鼠心肌细胞，观察到金丝桃苷12.5 μg/mL对阿霉素所致的心肌细胞损伤有保护作用；50、12.5 μg/mL对丝裂霉素所致的心肌细胞损伤有保护作用；50 μg/mL对缺血缺糖所致的心肌细胞损伤有保护作用； 50、12.5 μg/mL对缺氧再给氧所致的心肌细胞损伤有保护作用.
分类号 R96
The Protective Effects of Hyperin on Culture Myocardial Cells
, 百拇医药
Xu Ying，Ma Yi，Chen Fei，Sun Pengyue，Zhang Baofeng，Chen Yingjie
(Department of Pharmacy， Shenyang Pharmaceutical University， Shenyang 110015)
Abstract The protective effects of hyperin on culture myocardial cells were observed. Hyp 12.5 μg/mL protected cell membranes of myocardial cells against injury by DOX， and less LDH was released；50，12.5 μg/mL could prevent injury of myocardial cells from MMC and chemico-reperfused injury；50 μg/mL could also protect myocardial cells from hypoxia.
, 百拇医药
Key words hyperin；myocardial cell；protection
金丝桃苷(hyperin，Hpy)是多种中草药中的成分之一.据文献报道〔1〕，Hpy不仅能对抗大鼠心肌缺血再灌注引起的心肌损伤，而且能对抗阿霉素所致的小鼠心肌损伤.作者利用体外培养的乳鼠心肌细胞，观察了Hyp对心肌细胞的保护作用.
1 材料
1.1 药品
金丝桃苷(Hyp)：沈阳药科大学植化教研室提供，由淫羊藿中提取分离而得，纯度大于97%.用前DMSO溶解,以D-Hank′s稀释至所需浓度；阿霉素(DOX)：Farmitalia Carloerbal Let公司产品，批号：9504；丝裂霉素(MMC)：Kyowa Hakko Kogyolo Ltd 1-6-1公司产品，批号：071AEJ.
, 百拇医药
1.2 动物
Wistar乳鼠，1～3日龄，沈阳药科大学实验动物中心提供.
2 方法与结果
2.1 乳鼠心肌细胞的制备与培养〔2〕
1～3日龄乳鼠，取其心脏，剪去心包膜、血管及心房组织后，用D-hank′s液冲洗2～3次，剪碎，胰酶消化，离心洗涤后以PRMI1640培养基(含10%小牛血清)分散后，于37℃、5%CO2、饱和湿度下培养2 h，纯化细胞后，将细胞于37℃、5%CO2、饱和湿度下密闭培养2～3 d，待用.
2.2 Hyp对DOX损伤的心肌细胞的影响〔3〕
取上述培养的乳鼠心肌细胞，分为对照组、损伤组及损伤给药组.对照组换无血清培养基，损伤组及损伤给药组换含药的无血清培养基，于37℃、5%CO2、饱和湿度下密闭培养4 h后，按比色法〔4〕测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量.结果(见表1)显示Hyp 12.5 μg/mL能抑制DOX所致的心肌细胞损伤，使培养液中LDH的含量下降(P<0.01).
, 百拇医药
Tab.1 The effects of Hyp on myocardial cells injury subjected by DOX(n=3) Group
Dose/μg.mL-1
LDH×10-2/u.mL-1，±s
Control
—
129.0±13.5
DOX
1.0
165.7±18.5△
, 百拇医药
Hyp
50.0
161.2±10.3
Hyp
12.5
115.5±10.0**
ΔP<0.05 vs control group; **P<0.01 vs DOX group2.3 Hyp对MMC损伤的心肌细胞的影响〔5〕
取上述培养的乳鼠心肌细胞，分组同前，37℃、5% CO2、饱和湿度下密闭培养24 h后，测定培养液中LDH的含量.结果(见表2)表明，Hyp 50、12.5 μg/mL能抑制MMC所致的心肌细胞损伤.
, 百拇医药
Tab.2 The effects of Hyp on myocardial cells injury subjected by MMC(n=3) Group
Dose/μg.mL-1
LDH×10-2/u.mL-1，±s
Control
—
80.6±20.6
MMC
5.0
126.1±10.2△
, http://www.100md.com
Hyp
50.0
69.8±12.3**
Hyp
12.5
110.1±9.1*
△P<0.05 vs control group; *P<0.05，**P<0.01 vs MMC group2.4 Hyp对缺氧缺糖损伤的心肌细胞的影响〔6〕 取上述培养的乳鼠心肌细胞，分组同前.试验时弃去上清液，正常对照组加入含糖D-hank′s液，不充氮气；缺血缺糖组及缺血缺糖给药组加入预先饱和氮气的无糖D-hank′s液后于充满氮气的密闭容器中37℃、饱和湿度下密闭培养6 h或8 h后，测定培养液中LDH的含量.结果(见表3)可见Hyp 50 μg/mL在缺氧缺糖损伤后6 h即可抑制缺氧缺糖所致的心肌细胞损伤(P<0.01)，作用可持续至8 h(P<0.01).
, 百拇医药
Tab.3 The effects of Hyp on myocardial cells injury subjected by hypoxia injury(n=3) Group
Dose/
μg*mL-1
LDH×10-2/u.mL-1，±s
6 h
8 h
Control
—
54.1±15.9
, http://www.100md.com
54.1±15.9
Injury
—
87.4±10.0△
108.8±7.1△
Hyp
50.0
53.1±14.7**
80.1±7.1**
Hyp
12.5
, http://www.100md.com
91.8±14.7
f102.2±7.9
△P<0.05 vs control group; **P<0.01 vs injury group
2.5 Hyp对缺氧再给氧损伤的心肌细胞的影响〔6〕
取上述培养的乳鼠心肌细胞用缺氧缺糖方法造成缺氧缺糖3 h后，弃去上清液，加入含糖D-hank′s液，37℃、5% CO2、饱和湿度下密闭培养6 h或8 h后，测定培养液中LDH的含量.结果(见表4)表明，Hyp 50、12.5 μg/mL对缺氧再给氧损伤6 h即出现保护作用，作用可持续至8 h.
Tab.4 The effects of Hyp on myocardial cells injury subjected by ischemia-reperfused injury(n=3) Group
, http://www.100md.com
Dose/
μg*mL-1
LDH×10-2/u.mL-1，±s
6 h
8 h
Control
—
129.0±13.5
129.0±13.5
Injury
—
, 百拇医药
175.9±5.6△
195.8±18.8△
Hyp
50.0
136.3±10.6**
161.0±12.3**
Hyp
12.5
136.3±7.7**
152.2±9.4**
, 百拇医药
△P<0.05 vs control group; **P<0.01 vs injury group
3 讨论
作者用多种模型观察了Hyp对体外心肌细胞的保护作用.体外培养的心肌细胞可因许多因素造成损伤.受损时，其生长、代谢和功能等都受到影响.其中乳酸脱氢酶的外漏可作为损伤判断的依据〔7〕.阿霉素为一种抗肿瘤药物，其特殊的毒性反应是心脏的毒性，它可以损伤心肌细胞，损伤机制与心肌细胞的氧自由基增多有关〔8〕.心肌细胞的缺氧再给氧损伤也与自由基增多有关〔9〕，Hyp对这两种因素造成的心肌细胞损伤均有一定的保护作用.其机制可能与其减少自由基的产生有关〔3〕.MMC可通过抑制DNA合成而造成细胞损伤〔5〕，Hyp不同浓度对MMC损伤有保护作用.而心肌细胞在缺氧缺糖损伤时，线粒体ATP的产生和储存减少，钠泵、钙泵功能降低，排钠、排钙能力下降，胞浆钙增加，同时激活酯解酶造成细胞膜磷脂分解，膜破坏，胞内酶外漏〔7〕.Hyp为钙内流阻滞剂〔10〕，可减少钙的内流，使细胞内钙负荷减少.Hyp减少由缺氧缺糖所致的心肌细胞损伤可能与其抑制钙内流有关.上述结果提示Hpy对心肌细胞的保护作用机制是多方面的.
, 百拇医药
参考文献
1，汪为群，张艳，方志炼，等.金丝桃甙对心肌脂质过氧化的影响.中国药理学通报，1995，11(2)：123～125
2，李元建，邓汉武，陈修.人参皂甙及其组分对心肌细胞缺氧再给氧和心肌缺血再灌注损伤的保护作用.药学学报，1987，22：1～5
3，朱向阳，荣烨之，蔡青，等.抗坏血酸保护阿霉素导致的心肌细胞损伤.上海医学，1992，15(4)：211～212
4，王同明.生物化学及检验技术.南京：江苏科技出版社，1986.340～342
5，李连达，刘志云，高凤辉，等.丝裂霉素C对体外培养的乳鼠心肌细胞的影响.药学通报，1985，20(2)：123
6，徐淑云,卞如濂,陈修主编.药理实验方法学.第2版.北京:人民卫生出版社,1991.941
, 百拇医药
7，中国药理学会.药理学进展(1980)心血管药理学分册.北京:人民卫生出版社,1981.215
8，蔡青，荣烨之，黄国华，等.阿霉素对体外培养的心肌细胞乳酸脱氢酶、丙二醛的影响.中国药理学通报，1990，6：233～235
9，唐景荣，石琳，李胜亭.丹皮酚对正常及钙反常培养乳鼠心肌细胞的抗氧化作用.中草药，1990，20：547～549
10，陈志武，马传庚，方明，等.金丝桃甙对钙离子内流的影响.药学学报，1994，25：15～18
收稿日期:1999-12-21
, 百拇医药
单位：徐颖(沈阳药科大学药学系，沈阳 110015)；马轶(沈阳市传染病医院，沈阳 110015)；陈飞(辽宁省微生物研究所)；孙朋悦 张宝凤 陈英杰(沈阳药科大学药学系，沈阳 110015)
关键词：金丝桃苷；心肌细胞；保护作用
沈阳药科大学学报000519 摘 要 利用体外培养的乳鼠心肌细胞，观察到金丝桃苷12.5 μg/mL对阿霉素所致的心肌细胞损伤有保护作用；50、12.5 μg/mL对丝裂霉素所致的心肌细胞损伤有保护作用；50 μg/mL对缺血缺糖所致的心肌细胞损伤有保护作用； 50、12.5 μg/mL对缺氧再给氧所致的心肌细胞损伤有保护作用.
分类号 R96
The Protective Effects of Hyperin on Culture Myocardial Cells
, 百拇医药
Xu Ying，Ma Yi，Chen Fei，Sun Pengyue，Zhang Baofeng，Chen Yingjie
(Department of Pharmacy， Shenyang Pharmaceutical University， Shenyang 110015)
Abstract The protective effects of hyperin on culture myocardial cells were observed. Hyp 12.5 μg/mL protected cell membranes of myocardial cells against injury by DOX， and less LDH was released；50，12.5 μg/mL could prevent injury of myocardial cells from MMC and chemico-reperfused injury；50 μg/mL could also protect myocardial cells from hypoxia.
, 百拇医药
Key words hyperin；myocardial cell；protection
金丝桃苷(hyperin，Hpy)是多种中草药中的成分之一.据文献报道〔1〕，Hpy不仅能对抗大鼠心肌缺血再灌注引起的心肌损伤，而且能对抗阿霉素所致的小鼠心肌损伤.作者利用体外培养的乳鼠心肌细胞，观察了Hyp对心肌细胞的保护作用.
1 材料
1.1 药品
金丝桃苷(Hyp)：沈阳药科大学植化教研室提供，由淫羊藿中提取分离而得，纯度大于97%.用前DMSO溶解,以D-Hank′s稀释至所需浓度；阿霉素(DOX)：Farmitalia Carloerbal Let公司产品，批号：9504；丝裂霉素(MMC)：Kyowa Hakko Kogyolo Ltd 1-6-1公司产品，批号：071AEJ.
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1.2 动物
Wistar乳鼠，1～3日龄，沈阳药科大学实验动物中心提供.
2 方法与结果
2.1 乳鼠心肌细胞的制备与培养〔2〕
1～3日龄乳鼠，取其心脏，剪去心包膜、血管及心房组织后，用D-hank′s液冲洗2～3次，剪碎，胰酶消化，离心洗涤后以PRMI1640培养基(含10%小牛血清)分散后，于37℃、5%CO2、饱和湿度下培养2 h，纯化细胞后，将细胞于37℃、5%CO2、饱和湿度下密闭培养2～3 d，待用.
2.2 Hyp对DOX损伤的心肌细胞的影响〔3〕
取上述培养的乳鼠心肌细胞，分为对照组、损伤组及损伤给药组.对照组换无血清培养基，损伤组及损伤给药组换含药的无血清培养基，于37℃、5%CO2、饱和湿度下密闭培养4 h后，按比色法〔4〕测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量.结果(见表1)显示Hyp 12.5 μg/mL能抑制DOX所致的心肌细胞损伤，使培养液中LDH的含量下降(P<0.01).
, 百拇医药
Tab.1 The effects of Hyp on myocardial cells injury subjected by DOX(n=3) Group
Dose/μg.mL-1
LDH×10-2/u.mL-1，±s
Control
—
129.0±13.5
DOX
1.0
165.7±18.5△
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Hyp
50.0
161.2±10.3
Hyp
12.5
115.5±10.0**
ΔP<0.05 vs control group; **P<0.01 vs DOX group2.3 Hyp对MMC损伤的心肌细胞的影响〔5〕
取上述培养的乳鼠心肌细胞，分组同前，37℃、5% CO2、饱和湿度下密闭培养24 h后，测定培养液中LDH的含量.结果(见表2)表明，Hyp 50、12.5 μg/mL能抑制MMC所致的心肌细胞损伤.
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Tab.2 The effects of Hyp on myocardial cells injury subjected by MMC(n=3) Group
Dose/μg.mL-1
LDH×10-2/u.mL-1，±s
Control
—
80.6±20.6
MMC
5.0
126.1±10.2△
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Hyp
50.0
69.8±12.3**
Hyp
12.5
110.1±9.1*
△P<0.05 vs control group; *P<0.05，**P<0.01 vs MMC group2.4 Hyp对缺氧缺糖损伤的心肌细胞的影响〔6〕 取上述培养的乳鼠心肌细胞，分组同前.试验时弃去上清液，正常对照组加入含糖D-hank′s液，不充氮气；缺血缺糖组及缺血缺糖给药组加入预先饱和氮气的无糖D-hank′s液后于充满氮气的密闭容器中37℃、饱和湿度下密闭培养6 h或8 h后，测定培养液中LDH的含量.结果(见表3)可见Hyp 50 μg/mL在缺氧缺糖损伤后6 h即可抑制缺氧缺糖所致的心肌细胞损伤(P<0.01)，作用可持续至8 h(P<0.01).
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Tab.3 The effects of Hyp on myocardial cells injury subjected by hypoxia injury(n=3) Group
Dose/
μg*mL-1
LDH×10-2/u.mL-1，±s
6 h
8 h
Control
—
54.1±15.9
, http://www.100md.com
54.1±15.9
Injury
—
87.4±10.0△
108.8±7.1△
Hyp
50.0
53.1±14.7**
80.1±7.1**
Hyp
12.5
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91.8±14.7
f102.2±7.9
△P<0.05 vs control group; **P<0.01 vs injury group
2.5 Hyp对缺氧再给氧损伤的心肌细胞的影响〔6〕
取上述培养的乳鼠心肌细胞用缺氧缺糖方法造成缺氧缺糖3 h后，弃去上清液，加入含糖D-hank′s液，37℃、5% CO2、饱和湿度下密闭培养6 h或8 h后，测定培养液中LDH的含量.结果(见表4)表明，Hyp 50、12.5 μg/mL对缺氧再给氧损伤6 h即出现保护作用，作用可持续至8 h.
Tab.4 The effects of Hyp on myocardial cells injury subjected by ischemia-reperfused injury(n=3) Group
, http://www.100md.com
Dose/
μg*mL-1
LDH×10-2/u.mL-1，±s
6 h
8 h
Control
—
129.0±13.5
129.0±13.5
Injury
—
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175.9±5.6△
195.8±18.8△
Hyp
50.0
136.3±10.6**
161.0±12.3**
Hyp
12.5
136.3±7.7**
152.2±9.4**
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△P<0.05 vs control group; **P<0.01 vs injury group
3 讨论
作者用多种模型观察了Hyp对体外心肌细胞的保护作用.体外培养的心肌细胞可因许多因素造成损伤.受损时，其生长、代谢和功能等都受到影响.其中乳酸脱氢酶的外漏可作为损伤判断的依据〔7〕.阿霉素为一种抗肿瘤药物，其特殊的毒性反应是心脏的毒性，它可以损伤心肌细胞，损伤机制与心肌细胞的氧自由基增多有关〔8〕.心肌细胞的缺氧再给氧损伤也与自由基增多有关〔9〕，Hyp对这两种因素造成的心肌细胞损伤均有一定的保护作用.其机制可能与其减少自由基的产生有关〔3〕.MMC可通过抑制DNA合成而造成细胞损伤〔5〕，Hyp不同浓度对MMC损伤有保护作用.而心肌细胞在缺氧缺糖损伤时，线粒体ATP的产生和储存减少，钠泵、钙泵功能降低，排钠、排钙能力下降，胞浆钙增加，同时激活酯解酶造成细胞膜磷脂分解，膜破坏，胞内酶外漏〔7〕.Hyp为钙内流阻滞剂〔10〕，可减少钙的内流，使细胞内钙负荷减少.Hyp减少由缺氧缺糖所致的心肌细胞损伤可能与其抑制钙内流有关.上述结果提示Hpy对心肌细胞的保护作用机制是多方面的.
, 百拇医药
参考文献
1，汪为群，张艳，方志炼，等.金丝桃甙对心肌脂质过氧化的影响.中国药理学通报，1995，11(2)：123～125
2，李元建，邓汉武，陈修.人参皂甙及其组分对心肌细胞缺氧再给氧和心肌缺血再灌注损伤的保护作用.药学学报，1987，22：1～5
3，朱向阳，荣烨之，蔡青，等.抗坏血酸保护阿霉素导致的心肌细胞损伤.上海医学，1992，15(4)：211～212
4，王同明.生物化学及检验技术.南京：江苏科技出版社，1986.340～342
5，李连达，刘志云，高凤辉，等.丝裂霉素C对体外培养的乳鼠心肌细胞的影响.药学通报，1985，20(2)：123
6，徐淑云,卞如濂,陈修主编.药理实验方法学.第2版.北京:人民卫生出版社,1991.941
, 百拇医药
7，中国药理学会.药理学进展(1980)心血管药理学分册.北京:人民卫生出版社,1981.215
8，蔡青，荣烨之，黄国华，等.阿霉素对体外培养的心肌细胞乳酸脱氢酶、丙二醛的影响.中国药理学通报，1990，6：233～235
9，唐景荣，石琳，李胜亭.丹皮酚对正常及钙反常培养乳鼠心肌细胞的抗氧化作用.中草药，1990，20：547～549
10，陈志武，马传庚，方明，等.金丝桃甙对钙离子内流的影响.药学学报，1994，25：15～18
收稿日期:1999-12-21
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