胶囊采样法检测幽门螺杆菌
作者：秦建萍 史兵伟 杨春秀
单位：213003 江苏省常州中医院
关键词：螺杆菌，幽门；胃粘液；多聚酶链反应；细菌学技术
实用医学杂志000540 摘 要 目的：介绍一种胶囊采集胃粘液标本用脲素酶试验和多聚酶链反应(PCR)检测Hp的方法。方法：对照检测64例胃镜检查者的128份胃粘液(胶囊采集)和胃组织(胃镜采样头采集)标本的Hp，同时用PCR法检测了唾液中Hp的存在情况。结果：建立胶囊采取胃粘液标本的脲素酶、PCR检测阳性率分别为67.2%，75.3%，与相应的胃组织标本相同方法检测结果(阳性率70.3%，79.7%)具有良好的相关性(均P<0.005)，并排除胶囊从口腔拉出时受唾液污染的情况，唾液中Hp的阳性检出率为31.3%(20/64)，49例胃粘液PCR检测阳性者中有16例唾液中检出Hp。结论：胶囊采样法是一种无损伤的非侵入性采样方法，简单、方便，采集样品可用于脲素酶试验、PCR检测，为Hp的感染诊断和治疗随访提供了一种新的思路。
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幽门螺杆菌(Hp)能通过特异性内毒素、对宿主的免疫反应、致ras癌基因突变和促进胃泌素释放增加等多种因素[1，2]引起慢性胃炎、消化道溃疡，并在胃癌和胃淋巴瘤中起重要作用。在发展中国家，70%～90%的人携带Hp[3]。目前用来检测Hp的方法很多，最常用的有培养、脲素酶试验、PCR法、组织学方法及血清抗体检测等，一般需通过胃镜采集组织标本，有一定创伤性，并易引起交叉的医院内污染[4]。本研究目的在于寻找一种非侵入性采样方法代替胃镜采样，用于Hp的脲素酶试验和PCR检测。
1 资料与方法
1.1 一般资料 收集胃镜病人胃粘液、胃粘膜组织和嗽口液，胃粘液用胶囊采集，做胃镜前30 min让病人吞服采样胶囊，胶囊用一根细线连接体外，30 min后取出，用无菌剪刀把采样头小心剪为两半，一半进行脲素酶试验，另一半置-20℃生理盐水保存，用作PCR试验。胃镜下用胃镜采样头夹取可疑组织两块，一块置-20℃生理盐水保存，用作PCR试验，另一块立即进行脲素酶试验。吞胶囊前用少量冷开水嗽口，嗽口液吐入一次性杯子中，-20℃保存，用作PCR试验。
, 百拇医药
1.2 标本来源 选择1998年4～8月本院胃镜室做胃镜检查病人共64例。慢性胃炎16例，胃炎合并糜烂或萎缩28例，消化性溃疡8例，胃癌12例，其中男41例，年龄中位数37岁(22～63岁)，女23例，年龄中位数45岁(29～61岁)。
1.3 采样胶囊 由一吸水性很强的棉线团外接一根细线，高压灭菌消毒后，在线团外包一胶囊。
1.4 方法 脲素酶试验：柯氏脲素培养基作基础培养基，并按每100 ml加万古霉素1 mg，多粘菌素B 250 IU，TMP 0.5 mg，两性霉素B 0.2 mg，每管3 ml分装，4℃保存。标本种入培养管后，35℃培养，分别于6，12 h观察结果。PCR法：采用针对Hp UreC基因设计的引物进行扩增。试剂由上海复兴公司提供。基因扩增仪为美国MJ公司PTC-100。严格按照试剂盒说明书操作，2%琼脂糖电泳观察结果，在220 bp处出现桔黄色条带者为阳性。
, 百拇医药 1.5 统计学处理 采用配对计数资料χ2检验。
2 结果
2.1 PCR检测 64例胃镜检查病人PCR法胃粘膜组织和胃粘液Hp检测阳性率分别为79.7%(51/64)和75.3%(49/64)，两者的统计分析见表1。
表1 胃粘膜组织与胃粘液Hp PCR检测结果(例)
胃粘膜组织
+
-
胃粘液
+
46
3
, 百拇医药
-
5
10
注：χ2=22.4，P<0.005
2.2 脲素酶试验 64例患者脲素酶试验胃粘膜组织和胃粘液Hp检测阳性率分别为70.3%(45/64)和67.2%(43/64)，两者统计分析见表2。
2.3 唾液的PCR检测 20例(31.2%)阳性，其中胃粘液检测阳性的49例患者有16例检出Hp。
3 讨论
本文介绍了一种非侵入性的胶囊采样法，采集胃粘液进行各种检测。关于Hp的胃液与胃粘液检测结果报道不一，于洪波等[5]认为胃液标本Hp阳性检出率较低，但采用PCR法检测时与组织标本相比差异无显著意义，而Nowak等[6]则认为对证实Hp感染，胃粘液是一种合适标本。本组结果显示粘膜组织脲素酶法与PCR法的Hp检出率比胃粘液略高，统计分析两者具有良好的相关性(均P<0.005)。Hp的斑片状分布可能引起组织标本的假阴性，而本实验介绍的胶囊采取的是胃组织表面粘液，但吞入胶囊时的少量开水、胶囊采样头与胃粘膜的接触程度是否能引起采样误差，有待进一步探讨。表2 胃粘膜组织、胃粘液Hp脲素酶试验结果(例)
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胃粘膜组织
+
-
胃粘液
+
41
2
-
4
16
注：χ2=31.8，P<0.005
唾液的PCR检测表明，Hp能在口腔中生存，与白先慧[7]报道一致，其中80%(16/20)唾液Hp阳性者胃部存在Hp感染。但通过胃粘液与胃组织检查结果的χ2检验发现，口腔中Hp的存在并未影响用胶囊采样，可能与胶囊在口腔中停留时间较短有关。实验结果支持Hp的口-口感染途径。
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胶囊采样是一种无损伤非侵入性方法，简单、准确，为临床Hp感染的诊断和疗效评判提供了一种新的方法。
参考文献
1，方平楚，严 杰. 幽门螺杆菌内毒素对小鼠成纤维细胞和人胃粘膜组织细胞的侵入和损害. 中国人兽共患病杂志，1996，12(2)：14～16.
2，陈军贤，宋 芸，方宗桥. 幽门螺杆菌感染与胃癌及癌前病变中P21蛋白的表达. 肿瘤防治研究，1996，23(3)：149～150.
3，Dunn BE,Cohen H,Blaser MJ. Helicobacter Pyliri (medline record in process). Clin Microbiol Rew,1997,10(4):720～741.
4，肖正达，谢宇野，金冠球，等. 胃镜检查与幽门螺杆菌感染关系的初步探讨. 内镜，1994，11(6)：323～325.
5，尹洪波，姜 琦. 聚合酶链反应检测幽门螺杆菌的临床评价. 中国实用内科杂志，1996，16(1)：25～26.
6，Nowak JA,Forouzandeh B. Estimates of Helicobacter pyloridensities in the gastric mucus layer by PCR,histologicexamination and CLO test. Am J Clin Pathol,1997,108(3):284～288.
7，白先慧. 口腔含嗽液中幽门螺杆菌与消化性溃疡，慢性胃炎关系的研究. 广西医学，1996，18(2)：103～104., 百拇医药
单位：213003 江苏省常州中医院
关键词：螺杆菌，幽门；胃粘液；多聚酶链反应；细菌学技术
实用医学杂志000540 摘 要 目的：介绍一种胶囊采集胃粘液标本用脲素酶试验和多聚酶链反应(PCR)检测Hp的方法。方法：对照检测64例胃镜检查者的128份胃粘液(胶囊采集)和胃组织(胃镜采样头采集)标本的Hp，同时用PCR法检测了唾液中Hp的存在情况。结果：建立胶囊采取胃粘液标本的脲素酶、PCR检测阳性率分别为67.2%，75.3%，与相应的胃组织标本相同方法检测结果(阳性率70.3%，79.7%)具有良好的相关性(均P<0.005)，并排除胶囊从口腔拉出时受唾液污染的情况，唾液中Hp的阳性检出率为31.3%(20/64)，49例胃粘液PCR检测阳性者中有16例唾液中检出Hp。结论：胶囊采样法是一种无损伤的非侵入性采样方法，简单、方便，采集样品可用于脲素酶试验、PCR检测，为Hp的感染诊断和治疗随访提供了一种新的思路。
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幽门螺杆菌(Hp)能通过特异性内毒素、对宿主的免疫反应、致ras癌基因突变和促进胃泌素释放增加等多种因素[1，2]引起慢性胃炎、消化道溃疡，并在胃癌和胃淋巴瘤中起重要作用。在发展中国家，70%～90%的人携带Hp[3]。目前用来检测Hp的方法很多，最常用的有培养、脲素酶试验、PCR法、组织学方法及血清抗体检测等，一般需通过胃镜采集组织标本，有一定创伤性，并易引起交叉的医院内污染[4]。本研究目的在于寻找一种非侵入性采样方法代替胃镜采样，用于Hp的脲素酶试验和PCR检测。
1 资料与方法
1.1 一般资料 收集胃镜病人胃粘液、胃粘膜组织和嗽口液，胃粘液用胶囊采集，做胃镜前30 min让病人吞服采样胶囊，胶囊用一根细线连接体外，30 min后取出，用无菌剪刀把采样头小心剪为两半，一半进行脲素酶试验，另一半置-20℃生理盐水保存，用作PCR试验。胃镜下用胃镜采样头夹取可疑组织两块，一块置-20℃生理盐水保存，用作PCR试验，另一块立即进行脲素酶试验。吞胶囊前用少量冷开水嗽口，嗽口液吐入一次性杯子中，-20℃保存，用作PCR试验。
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1.2 标本来源 选择1998年4～8月本院胃镜室做胃镜检查病人共64例。慢性胃炎16例，胃炎合并糜烂或萎缩28例，消化性溃疡8例，胃癌12例，其中男41例，年龄中位数37岁(22～63岁)，女23例，年龄中位数45岁(29～61岁)。
1.3 采样胶囊 由一吸水性很强的棉线团外接一根细线，高压灭菌消毒后，在线团外包一胶囊。
1.4 方法 脲素酶试验：柯氏脲素培养基作基础培养基，并按每100 ml加万古霉素1 mg，多粘菌素B 250 IU，TMP 0.5 mg，两性霉素B 0.2 mg，每管3 ml分装，4℃保存。标本种入培养管后，35℃培养，分别于6，12 h观察结果。PCR法：采用针对Hp UreC基因设计的引物进行扩增。试剂由上海复兴公司提供。基因扩增仪为美国MJ公司PTC-100。严格按照试剂盒说明书操作，2%琼脂糖电泳观察结果，在220 bp处出现桔黄色条带者为阳性。
, 百拇医药 1.5 统计学处理 采用配对计数资料χ2检验。
2 结果
2.1 PCR检测 64例胃镜检查病人PCR法胃粘膜组织和胃粘液Hp检测阳性率分别为79.7%(51/64)和75.3%(49/64)，两者的统计分析见表1。
表1 胃粘膜组织与胃粘液Hp PCR检测结果(例)
胃粘膜组织
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胃粘液
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3
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注：χ2=22.4，P<0.005
2.2 脲素酶试验 64例患者脲素酶试验胃粘膜组织和胃粘液Hp检测阳性率分别为70.3%(45/64)和67.2%(43/64)，两者统计分析见表2。
2.3 唾液的PCR检测 20例(31.2%)阳性，其中胃粘液检测阳性的49例患者有16例检出Hp。
3 讨论
本文介绍了一种非侵入性的胶囊采样法，采集胃粘液进行各种检测。关于Hp的胃液与胃粘液检测结果报道不一，于洪波等[5]认为胃液标本Hp阳性检出率较低，但采用PCR法检测时与组织标本相比差异无显著意义，而Nowak等[6]则认为对证实Hp感染，胃粘液是一种合适标本。本组结果显示粘膜组织脲素酶法与PCR法的Hp检出率比胃粘液略高，统计分析两者具有良好的相关性(均P<0.005)。Hp的斑片状分布可能引起组织标本的假阴性，而本实验介绍的胶囊采取的是胃组织表面粘液，但吞入胶囊时的少量开水、胶囊采样头与胃粘膜的接触程度是否能引起采样误差，有待进一步探讨。表2 胃粘膜组织、胃粘液Hp脲素酶试验结果(例)
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胃粘膜组织
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胃粘液
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注：χ2=31.8，P<0.005
唾液的PCR检测表明，Hp能在口腔中生存，与白先慧[7]报道一致，其中80%(16/20)唾液Hp阳性者胃部存在Hp感染。但通过胃粘液与胃组织检查结果的χ2检验发现，口腔中Hp的存在并未影响用胶囊采样，可能与胶囊在口腔中停留时间较短有关。实验结果支持Hp的口-口感染途径。
, http://www.100md.com
胶囊采样是一种无损伤非侵入性方法，简单、准确，为临床Hp感染的诊断和疗效评判提供了一种新的方法。
参考文献
1，方平楚，严 杰. 幽门螺杆菌内毒素对小鼠成纤维细胞和人胃粘膜组织细胞的侵入和损害. 中国人兽共患病杂志，1996，12(2)：14～16.
2，陈军贤，宋 芸，方宗桥. 幽门螺杆菌感染与胃癌及癌前病变中P21蛋白的表达. 肿瘤防治研究，1996，23(3)：149～150.
3，Dunn BE,Cohen H,Blaser MJ. Helicobacter Pyliri (medline record in process). Clin Microbiol Rew,1997,10(4):720～741.
4，肖正达，谢宇野，金冠球，等. 胃镜检查与幽门螺杆菌感染关系的初步探讨. 内镜，1994，11(6)：323～325.
5，尹洪波，姜 琦. 聚合酶链反应检测幽门螺杆菌的临床评价. 中国实用内科杂志，1996，16(1)：25～26.
6，Nowak JA,Forouzandeh B. Estimates of Helicobacter pyloridensities in the gastric mucus layer by PCR,histologicexamination and CLO test. Am J Clin Pathol,1997,108(3):284～288.
7，白先慧. 口腔含嗽液中幽门螺杆菌与消化性溃疡，慢性胃炎关系的研究. 广西医学，1996，18(2)：103～104., 百拇医药