口腔牙菌斑和胃粘膜幽门螺杆菌检测方法探讨与评价
作者：赵然 许彦枝 张立伟 韩丽 黄杰
单位：赵然(白求恩国际和平医院口腔科 石家庄 050082)；许彦枝 张立伟 韩丽(河北医科大学第四医院口腔科)；黄杰(武汉市军工总医院口腔科)
关键词：牙科学；牙菌斑；诊断；胃粘膜；微生物学；螺杆菌,幽门
河北医科大学学报000511
摘 要 目的 寻求一种简便、准确的非创伤性检测方法检测幽门螺杆菌(Hp)感染。方法 应用PCR技术、细菌培养、快速尿素酶试验、病理学检查等方法对150例胃、十二指肠疾病患者胃粘膜、口腔牙菌斑进行Hp检测。结果 上述4种方法胃粘膜Hp检出率分别为64%、41.5%、51.3%、59.3%。PCR技术检测口腔牙菌斑中Hp感染，特异性、敏感性、预测值、精确度均优于细菌培养和尿素酶试验；且每种方法对患者自身的胃粘膜与牙菌斑两者间Hp检出率无显著性差异(P>0.05)。结论 应用PCR技术检测口腔牙菌斑Hp感染，是一种无痛性非创伤性手段，其特异性强，灵敏度高，不受标本条件和时间限制，值得临床应用。
, http://www.100md.com
中图号 R781.2 R573
EXPLORATION AND EVALUATION OF METHODS FOR DETECTION OF HELICOBACTER PYLORI IN DENTAL PLAQUE AND GASTRIC MUCOSA
Zhao Ran Xu Yanzhi Zhang Liwei Han Li Huang Jie
(Department of Stomatology,Bethune International Peace Hospital Shijiazhuang 050082)
ABSTRACT Objective To screen for a simple,accurate and no-traumatic detecting method of Helicobacter Pylori(Hp).Methods Hp in gastric mucosa and dental plaque was detected with PCR,bacterial culture,rapid urease test and pathological examination at the same time in 150 cases of gastroenterpathy patients.Results The detective rates of Hp in gastric mucosa by PCR,bacterial culture,rapid urease test and pathological examination were 64%,41.5%,51.3%,59.3% respectively.As for detection of Hp in dental plaque,the results showed that PCR was more sensitive and simple than those of bacterial culture and urease test.While the predict value and accuracy of PCR were much higher than the latter two methods.No significant differences in the Hp detective rate were found among the those different detection methods in gastric mucosa and dental plaque.Conclusion PCR detection of Hp in dental plaque is specific，sensitive and without trauma.Thus,it is suggested to be used clinically.
, 百拇医药
MeSH dentistry;dental plaque/diagnosis;gastric mucosa/microbiology;helicobacter pylori
目前，检测Hp的方法很多[1]，为了寻求一种简便易行的非侵入性检测方法，本文采用PCR技术、细菌培养、快速尿素酶试验、病理学检查4种方法，检测消化性疾病患者胃粘膜及口腔牙菌斑中的Hp，以探讨和比较这几种方法检测Hp感染的实用性和敏感性，为临床诊断Hp感染提供可靠的简便易行的检测手段。
1 材 料 和 方 法
1.1 临床资料：研究选取河北医科大学第四医院1997年10月～1998年5月，经胃镜检查确诊为慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌患者共150例，其中男性88例，女性62例，年龄最大73岁，最小20岁，平均52.4岁。
1.2 检测方法[2]
, 百拇医药
1.2.1 标本采集：每位患者均同时采取牙菌斑和胃粘膜标本。
1.2.1.1 口腔牙菌斑：刷牙后至少8 h以上，在作胃镜前用无菌牙科刮治器在患者前磨牙和磨牙的龈上、龈下以及邻间隙内取牙菌斑(也可用牙线在患者牙齿的邻间隙中取)，无牙颌患者采集义齿表面菌斑，用过的刮治器彻底清洗严格消毒，防止交叉感染。
1.2.1.2 胃粘膜：使用Olympus GIF-230电子胃镜在距幽门口5 cm内采集胃窦部活检标本2～4块，取出的组织用无菌小镊或消毒针移出。活检钳每次用后用2%戊二醛或75%酒精浸泡，使用前用无菌水或自来水冲洗干净，若活检钳沾有戊二醛则影响Hp检出率。
1.2.2标本处理
1.2.2.1 牙菌斑标本：分别将其1份立即放入快速尿素酶试纸中试验；1份放入细菌培养运输液中充分搅拌后，室温2 h内送至实验室培养；1份放入-4℃冰箱准备行PCR。
, 百拇医药
1.2.2.2 胃粘膜标本：1份立即行快速尿素酶试验；1份在室温下不超过2 h，将活检组织用无菌研磨器磨碎后，接种于布氏琼脂培养基中；1份标本送病理学检查；1份标本置-4℃冰箱内进行PCR试验。
1.2.3 检测Hp感染的实验方法与诊断标准
1.2.3.1 快速尿素酶试验(产品为珠海珠信生物制品开发有限公司出品)：将患者牙菌斑、胃粘膜标本直接分别放在试纸上，根据指示标准，颜色变红，为Hp感染阳性，无变化则为阴性。
1.2.3.2 病理学检查：胃粘膜标本用10%的福尔马林液固定，连续切片嗜银染色辩认Hp，镜下见细胞核和Hp着棕黑色，Hp呈小的短杆菌者，为Hp感染阳性，否则为阴性。
1.2.3.3 细菌培养：将牙菌斑、胃粘膜组织分别放置于小牛血清布氏肉汤运送培养基中送检，以布氏琼脂培养基为基础，加入脱纤维蛋白羊血及联合抗生素，3天后观察结果，选具有透明针尖样(直径1～2 mm)菌落涂片，革兰染色呈阴性，并做生化鉴定。
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1.2.3.4 PCR检测方法：Hp-PCR试剂盒购于上海复星生物制品有限公司。PCR扩增仪为PERKINE ELMER DNA热循环仪。标本处理、PCR扩增与检测均按试剂盒说明操作。为减少污染机会，DNA提取、PCR扩增及电泳分析分别在3个房间进行。
1.3 Hp感染诊断标准：胃粘膜经细菌培养、快速尿素酶试验、PCR技术、病理染色4种方法检测Hp，以细菌培养一项阳性和病理切片染色见到大量细菌者为Hp感染；病理切片染色(未见到大量细菌)快速尿素酶试验、PCR技术任两项阳性者为Hp感染。以胃粘膜Hp感染为标准，分别统计PCR、尿素酶试验和细菌培养3种检测方法在口腔牙菌斑中对Hp感染的敏感性、特异性、预测值和准确度作出评价。
1.4 统计学分析：采用配对四格表资料的χ2检验。
2 结 果
2.1 胃粘膜Hp感染检测结果：150例患者经PCR扩增阳性96例(64.0%)；病理染色阳性89例(59.3%)；快速尿素酶试验阳性77例(51.3%)；随机选取36例患者行细菌培养，阳性15例(41.5%)。根据Hp感染的诊断标准，共检出87例Hp感染者。PCR方法与其它3种方法相比(表1、2)，PCR方法与尿素酶试验和细菌培养结果比较差异有显著性(P<0.05)，而与病理学染色差异无显著性(P>0.05)。
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表1 胃粘膜活组织PCR方法、尿素酶试验、病理染色方法检测Hp结果
Table 1 Hp detection results by three different detective
methods in gastric biopsy samples
Rapid urease test
Pathological examination
n
+
-
+
-
, 百拇医药
PCR
+
75
18
89
7
96
-
2
65
0
54
54
Total
, http://www.100md.com
77
73
89
61
150
χ2 =4.09,P<0.05;χ2=3.47,P>0.05表2 胃粘膜活组织PCR方法与细菌培养检测Hp结果
Table 2 The results of PCR and bacterial culture methods
for identification of Hp in gastric biopsy samples
Bacterial culture
, http://www.100md.com
n
+
-
PCR
+
15
8
23
-
0
13
13
Total
15
, 百拇医药
21
36
χ2=4.5,P<0.05
2.2 口腔牙菌斑Hp感染检测评价结果：150例患者应用PCR技术、快速尿素酶试验进行牙菌斑中Hp检测，并随机选取36例进行细菌培养。36例患者3种检测方法结果显示：PCR检测Hp阳性17例(47.2%)；细菌培养阳性13例(36.1%)；快速尿素酶试验阳性17例，其中2例为假阳性，快速尿素酶试验实际检出率为41.6%。13例细菌培养Hp阳性者，PCR方法Hp均为阳性；4例PCR阳性而培养阴性者中3例培养为大量霉菌生长；17例快速尿素酶试验阳性中，15例PCR方法Hp阳性，2例阴性，经培养证实为变形杆菌引起的尿素酶假阳性，而PCR阳性，尿素酶阴性2例。以胃粘膜活检标本为诊断Hp感染标准，对上述3种方法在口腔牙菌斑中Hp感染进行诊断实验的评价(表3)。可见应用PCR技术检测口腔牙菌斑中Hp,其敏感性、特异性、准确度和予测值较细菌培养和快速尿素酶两种方法均优越。表3 三种方法检测口腔牙菌斑中Hp感染诊断实验的评价
, 百拇医药
Table 3 Evaluation of three methods in the detection of
Hp in dental plaque(%)
Sensitivity
Specificity
accuracy
predicted value
negative
positive
PCR
100.0
, 百拇医药
90.5
94.4
88.2
100.0
Urease test
73.3
71.4
72.2
64.7
78.9
BC*
66.7
85.7
, 百拇医药
77.8
76.9
78.3
*BC: Bacterial culture2.3 不同方法检测口腔牙菌斑及胃粘膜Hp感染比较：36例患者细菌培养结果显示,细菌培养检测口腔牙菌斑和胃粘膜中Hp感染，两者差异无显著性(P>0.05)。91例患者尿素酶试验结果显示,尿素酶方法检测口腔牙菌斑和胃粘膜中Hp感染，两者差异无显著性(P>0.05)。71例患者应用PCR技术检测口腔牙菌斑和胃粘膜中Hp感染者差异无显著性(P>0.05)(表4)。
表4 三种方法检测牙菌斑、胃粘膜Hp感染情况比较
Table 4 The comparison of three different methods in the
, http://www.100md.com
detection of Hp in dental plaque and gastric mucosa PCR
bacterial culture
rapid urease test
GM*
DP**
GM*
DP**
GM*
DP**
, http://www.100md.com N
+
-
N
+
-
N
+
-
+
32
7
39
+
, 百拇医药
10
5
15
+
42
11
53
-
12
20
32
-
3
18
, 百拇医药
21
-
20
18
38
Total
44
27
71
Total
13
23
36
Total
, http://www.100md.com
62
29
91
χ2 0.84 0.5 2.06 P>0.05
*GM:gastric mucosa **DP:dental plaque3 讨 论
Hp在人群中感染率很高，迫切需要一种有效、安全、特异性强、灵敏度高、无创伤性的诊断法，但至今没有一种既简便又敏感的诊断方法。目前依取材不同将Hp感染的临床诊断分为两类：①无创伤性检查：包括血清学方法，同位素标记尿素的呼气试验和胃液PCR等.血清学方法由于血清抗体水平的消长需一定时间，Hp感染初期，抗体尚未升高，Hp被根除之后，仍可在体内维持一定时间，所以该法不能反应Hp感染现象；呼气试验需一套贵重仪器，操作复杂，尚不能作为临床常规检查方法，抽取胃液也使患者感到恶心和不适。②创伤性检查均为胃镜依赖方法，为患者带来很大痛苦和不便。
, 百拇医药
本组经胃镜下活检胃粘膜诊断Hp感染，应用细菌培养、病理学检查、尿素酶试验、PCR等方法，各种方法的检出率与文献报道相似[2～4]。但均属创伤性诊断方法。
口腔菌斑复杂、特殊的生态环境及Hp复杂的营养要求，使得从菌斑中培养分离Hp较为困难[5]。快速尿素酶试验依赖Hp产生的尿素酶分解产生氨气，使反应试剂pH值升高。通过指示剂显示出来，达到检测Hp的目的，尽管快，但特异性不高，因口腔有350多种微生物，有多种细菌能产生分解CO2、氨气，敏感性受标本Hp数量多少及存活情况限制，易出现假阳性、假阴性。本研究在检测口腔牙菌斑中2例尿素酶阳性，其PCR及培养均无Hp，系因产生尿素酶的兼性需氧菌产生的尿素酶假阳性。2例PCR阳性，培养及尿素酶均阴性者，可能为Hp数量太少；以胃粘膜细菌培养为诊断Hp感染标准，应用细菌培养检测得到3例口腔牙菌斑Hp阳性，而胃内Hp阴性，可能与患者用药有关，这3名患者自述有短暂用消炎药物史，由此可见，胃内Hp无感染时，口腔中仍可能有Hp存在；5例胃粘膜Hp阳性，而口腔牙菌斑Hp阴性者，可能与菌斑取材量不足有关。应用PCR检测口腔牙菌斑Hp感染，2例口腔牙菌斑Hp阳性者，而胃内Hp阴性；15例口腔牙菌斑Hp阳性者，胃内Hp均为阳性。尿素酶试验检测口腔牙菌斑Hp感染时，6例口腔牙菌斑Hp阳性，而胃内Hp阴性；4例胃内Hp阳性，而口腔牙菌斑Hp出现假阴性。由此可见PCR不受细菌存活情况限制，可使10～100个Hp被检出，远较快速尿素酶试验、细菌培养方法敏感、特异。
, 百拇医药
本研究应用胃粘膜为诊断Hp感染诊断标准，评价口腔牙菌斑中Hp感染情况，可以看出应用PCR技术检测牙菌斑中Hp，敏感性为100%，特异性为90.5%，高于尿素酶试验和细菌培养，表明其阳性时，该患者目前胃内可能有Hp感染，如果仅为了观察胃内目前有无Hp感染，筛选抗Hp药物及监测抗Hp治疗后Hp复发或再感染，可先选用PCR方法检测口腔牙菌斑中Hp，该法具有简便、可靠、安全、无痛的优点，适用于大规模流行病学调查和临床应用。
参考文献
1，Serrano N,Carvajal Z,Pinero R,et al.Evaluation of Method for the diagnosis of Helicobacter pylori infection.GEN,1995,49(4)：292
2，胡伏莲主编.幽门螺杆菌感染的基础与临床.北京:中国科学出版社出版,1997.276
, 百拇医药
3，Zwet AA,Thus JC,Kooistra-Smicl AMD,et al.Sensitivity of culture compared with that of polymerase chain reaction for detection of Helicobacter pylori from antral biopsy sample.J Clin Microbiol.1993,31(7):1918
4，刘志田,刘士林,马俊文,主编.中国幽门螺杆菌研究.北京:科学技术文献出版社,1997.259
5，Nguyen Am,Zaatari FA,Graban Dy,et al.Helicobacter pylori in the oral cavity：a critical review of the literature.Oral surg oral Med Oral Pathol oral Radiol Endod.1995,79(6):705
收稿日期：1999-06-22, 百拇医药
单位：赵然(白求恩国际和平医院口腔科 石家庄 050082)；许彦枝 张立伟 韩丽(河北医科大学第四医院口腔科)；黄杰(武汉市军工总医院口腔科)
关键词：牙科学；牙菌斑；诊断；胃粘膜；微生物学；螺杆菌,幽门
河北医科大学学报000511
摘 要 目的 寻求一种简便、准确的非创伤性检测方法检测幽门螺杆菌(Hp)感染。方法 应用PCR技术、细菌培养、快速尿素酶试验、病理学检查等方法对150例胃、十二指肠疾病患者胃粘膜、口腔牙菌斑进行Hp检测。结果 上述4种方法胃粘膜Hp检出率分别为64%、41.5%、51.3%、59.3%。PCR技术检测口腔牙菌斑中Hp感染，特异性、敏感性、预测值、精确度均优于细菌培养和尿素酶试验；且每种方法对患者自身的胃粘膜与牙菌斑两者间Hp检出率无显著性差异(P>0.05)。结论 应用PCR技术检测口腔牙菌斑Hp感染，是一种无痛性非创伤性手段，其特异性强，灵敏度高，不受标本条件和时间限制，值得临床应用。
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中图号 R781.2 R573
EXPLORATION AND EVALUATION OF METHODS FOR DETECTION OF HELICOBACTER PYLORI IN DENTAL PLAQUE AND GASTRIC MUCOSA
Zhao Ran Xu Yanzhi Zhang Liwei Han Li Huang Jie
(Department of Stomatology,Bethune International Peace Hospital Shijiazhuang 050082)
ABSTRACT Objective To screen for a simple,accurate and no-traumatic detecting method of Helicobacter Pylori(Hp).Methods Hp in gastric mucosa and dental plaque was detected with PCR,bacterial culture,rapid urease test and pathological examination at the same time in 150 cases of gastroenterpathy patients.Results The detective rates of Hp in gastric mucosa by PCR,bacterial culture,rapid urease test and pathological examination were 64%,41.5%,51.3%,59.3% respectively.As for detection of Hp in dental plaque,the results showed that PCR was more sensitive and simple than those of bacterial culture and urease test.While the predict value and accuracy of PCR were much higher than the latter two methods.No significant differences in the Hp detective rate were found among the those different detection methods in gastric mucosa and dental plaque.Conclusion PCR detection of Hp in dental plaque is specific，sensitive and without trauma.Thus,it is suggested to be used clinically.
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MeSH dentistry;dental plaque/diagnosis;gastric mucosa/microbiology;helicobacter pylori
目前，检测Hp的方法很多[1]，为了寻求一种简便易行的非侵入性检测方法，本文采用PCR技术、细菌培养、快速尿素酶试验、病理学检查4种方法，检测消化性疾病患者胃粘膜及口腔牙菌斑中的Hp，以探讨和比较这几种方法检测Hp感染的实用性和敏感性，为临床诊断Hp感染提供可靠的简便易行的检测手段。
1 材 料 和 方 法
1.1 临床资料：研究选取河北医科大学第四医院1997年10月～1998年5月，经胃镜检查确诊为慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌患者共150例，其中男性88例，女性62例，年龄最大73岁，最小20岁，平均52.4岁。
1.2 检测方法[2]
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1.2.1 标本采集：每位患者均同时采取牙菌斑和胃粘膜标本。
1.2.1.1 口腔牙菌斑：刷牙后至少8 h以上，在作胃镜前用无菌牙科刮治器在患者前磨牙和磨牙的龈上、龈下以及邻间隙内取牙菌斑(也可用牙线在患者牙齿的邻间隙中取)，无牙颌患者采集义齿表面菌斑，用过的刮治器彻底清洗严格消毒，防止交叉感染。
1.2.1.2 胃粘膜：使用Olympus GIF-230电子胃镜在距幽门口5 cm内采集胃窦部活检标本2～4块，取出的组织用无菌小镊或消毒针移出。活检钳每次用后用2%戊二醛或75%酒精浸泡，使用前用无菌水或自来水冲洗干净，若活检钳沾有戊二醛则影响Hp检出率。
1.2.2标本处理
1.2.2.1 牙菌斑标本：分别将其1份立即放入快速尿素酶试纸中试验；1份放入细菌培养运输液中充分搅拌后，室温2 h内送至实验室培养；1份放入-4℃冰箱准备行PCR。
, 百拇医药
1.2.2.2 胃粘膜标本：1份立即行快速尿素酶试验；1份在室温下不超过2 h，将活检组织用无菌研磨器磨碎后，接种于布氏琼脂培养基中；1份标本送病理学检查；1份标本置-4℃冰箱内进行PCR试验。
1.2.3 检测Hp感染的实验方法与诊断标准
1.2.3.1 快速尿素酶试验(产品为珠海珠信生物制品开发有限公司出品)：将患者牙菌斑、胃粘膜标本直接分别放在试纸上，根据指示标准，颜色变红，为Hp感染阳性，无变化则为阴性。
1.2.3.2 病理学检查：胃粘膜标本用10%的福尔马林液固定，连续切片嗜银染色辩认Hp，镜下见细胞核和Hp着棕黑色，Hp呈小的短杆菌者，为Hp感染阳性，否则为阴性。
1.2.3.3 细菌培养：将牙菌斑、胃粘膜组织分别放置于小牛血清布氏肉汤运送培养基中送检，以布氏琼脂培养基为基础，加入脱纤维蛋白羊血及联合抗生素，3天后观察结果，选具有透明针尖样(直径1～2 mm)菌落涂片，革兰染色呈阴性，并做生化鉴定。
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1.2.3.4 PCR检测方法：Hp-PCR试剂盒购于上海复星生物制品有限公司。PCR扩增仪为PERKINE ELMER DNA热循环仪。标本处理、PCR扩增与检测均按试剂盒说明操作。为减少污染机会，DNA提取、PCR扩增及电泳分析分别在3个房间进行。
1.3 Hp感染诊断标准：胃粘膜经细菌培养、快速尿素酶试验、PCR技术、病理染色4种方法检测Hp，以细菌培养一项阳性和病理切片染色见到大量细菌者为Hp感染；病理切片染色(未见到大量细菌)快速尿素酶试验、PCR技术任两项阳性者为Hp感染。以胃粘膜Hp感染为标准，分别统计PCR、尿素酶试验和细菌培养3种检测方法在口腔牙菌斑中对Hp感染的敏感性、特异性、预测值和准确度作出评价。
1.4 统计学分析：采用配对四格表资料的χ2检验。
2 结 果
2.1 胃粘膜Hp感染检测结果：150例患者经PCR扩增阳性96例(64.0%)；病理染色阳性89例(59.3%)；快速尿素酶试验阳性77例(51.3%)；随机选取36例患者行细菌培养，阳性15例(41.5%)。根据Hp感染的诊断标准，共检出87例Hp感染者。PCR方法与其它3种方法相比(表1、2)，PCR方法与尿素酶试验和细菌培养结果比较差异有显著性(P<0.05)，而与病理学染色差异无显著性(P>0.05)。
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表1 胃粘膜活组织PCR方法、尿素酶试验、病理染色方法检测Hp结果
Table 1 Hp detection results by three different detective
methods in gastric biopsy samples
Rapid urease test
Pathological examination
n
+
-
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PCR
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75
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Total
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77
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150
χ2 =4.09,P<0.05;χ2=3.47,P>0.05表2 胃粘膜活组织PCR方法与细菌培养检测Hp结果
Table 2 The results of PCR and bacterial culture methods
for identification of Hp in gastric biopsy samples
Bacterial culture
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2.2 口腔牙菌斑Hp感染检测评价结果：150例患者应用PCR技术、快速尿素酶试验进行牙菌斑中Hp检测，并随机选取36例进行细菌培养。36例患者3种检测方法结果显示：PCR检测Hp阳性17例(47.2%)；细菌培养阳性13例(36.1%)；快速尿素酶试验阳性17例，其中2例为假阳性，快速尿素酶试验实际检出率为41.6%。13例细菌培养Hp阳性者，PCR方法Hp均为阳性；4例PCR阳性而培养阴性者中3例培养为大量霉菌生长；17例快速尿素酶试验阳性中，15例PCR方法Hp阳性，2例阴性，经培养证实为变形杆菌引起的尿素酶假阳性，而PCR阳性，尿素酶阴性2例。以胃粘膜活检标本为诊断Hp感染标准，对上述3种方法在口腔牙菌斑中Hp感染进行诊断实验的评价(表3)。可见应用PCR技术检测口腔牙菌斑中Hp,其敏感性、特异性、准确度和予测值较细菌培养和快速尿素酶两种方法均优越。表3 三种方法检测口腔牙菌斑中Hp感染诊断实验的评价
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Table 3 Evaluation of three methods in the detection of
Hp in dental plaque(%)
Sensitivity
Specificity
accuracy
predicted value
negative
positive
PCR
100.0
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90.5
94.4
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Urease test
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78.9
BC*
66.7
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*BC: Bacterial culture2.3 不同方法检测口腔牙菌斑及胃粘膜Hp感染比较：36例患者细菌培养结果显示,细菌培养检测口腔牙菌斑和胃粘膜中Hp感染，两者差异无显著性(P>0.05)。91例患者尿素酶试验结果显示,尿素酶方法检测口腔牙菌斑和胃粘膜中Hp感染，两者差异无显著性(P>0.05)。71例患者应用PCR技术检测口腔牙菌斑和胃粘膜中Hp感染者差异无显著性(P>0.05)(表4)。
表4 三种方法检测牙菌斑、胃粘膜Hp感染情况比较
Table 4 The comparison of three different methods in the
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detection of Hp in dental plaque and gastric mucosa PCR
bacterial culture
rapid urease test
GM*
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χ2 0.84 0.5 2.06 P>0.05
*GM:gastric mucosa **DP:dental plaque3 讨 论
Hp在人群中感染率很高，迫切需要一种有效、安全、特异性强、灵敏度高、无创伤性的诊断法，但至今没有一种既简便又敏感的诊断方法。目前依取材不同将Hp感染的临床诊断分为两类：①无创伤性检查：包括血清学方法，同位素标记尿素的呼气试验和胃液PCR等.血清学方法由于血清抗体水平的消长需一定时间，Hp感染初期，抗体尚未升高，Hp被根除之后，仍可在体内维持一定时间，所以该法不能反应Hp感染现象；呼气试验需一套贵重仪器，操作复杂，尚不能作为临床常规检查方法，抽取胃液也使患者感到恶心和不适。②创伤性检查均为胃镜依赖方法，为患者带来很大痛苦和不便。
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本组经胃镜下活检胃粘膜诊断Hp感染，应用细菌培养、病理学检查、尿素酶试验、PCR等方法，各种方法的检出率与文献报道相似[2～4]。但均属创伤性诊断方法。
口腔菌斑复杂、特殊的生态环境及Hp复杂的营养要求，使得从菌斑中培养分离Hp较为困难[5]。快速尿素酶试验依赖Hp产生的尿素酶分解产生氨气，使反应试剂pH值升高。通过指示剂显示出来，达到检测Hp的目的，尽管快，但特异性不高，因口腔有350多种微生物，有多种细菌能产生分解CO2、氨气，敏感性受标本Hp数量多少及存活情况限制，易出现假阳性、假阴性。本研究在检测口腔牙菌斑中2例尿素酶阳性，其PCR及培养均无Hp，系因产生尿素酶的兼性需氧菌产生的尿素酶假阳性。2例PCR阳性，培养及尿素酶均阴性者，可能为Hp数量太少；以胃粘膜细菌培养为诊断Hp感染标准，应用细菌培养检测得到3例口腔牙菌斑Hp阳性，而胃内Hp阴性，可能与患者用药有关，这3名患者自述有短暂用消炎药物史，由此可见，胃内Hp无感染时，口腔中仍可能有Hp存在；5例胃粘膜Hp阳性，而口腔牙菌斑Hp阴性者，可能与菌斑取材量不足有关。应用PCR检测口腔牙菌斑Hp感染，2例口腔牙菌斑Hp阳性者，而胃内Hp阴性；15例口腔牙菌斑Hp阳性者，胃内Hp均为阳性。尿素酶试验检测口腔牙菌斑Hp感染时，6例口腔牙菌斑Hp阳性，而胃内Hp阴性；4例胃内Hp阳性，而口腔牙菌斑Hp出现假阴性。由此可见PCR不受细菌存活情况限制，可使10～100个Hp被检出，远较快速尿素酶试验、细菌培养方法敏感、特异。
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本研究应用胃粘膜为诊断Hp感染诊断标准，评价口腔牙菌斑中Hp感染情况，可以看出应用PCR技术检测牙菌斑中Hp，敏感性为100%，特异性为90.5%，高于尿素酶试验和细菌培养，表明其阳性时，该患者目前胃内可能有Hp感染，如果仅为了观察胃内目前有无Hp感染，筛选抗Hp药物及监测抗Hp治疗后Hp复发或再感染，可先选用PCR方法检测口腔牙菌斑中Hp，该法具有简便、可靠、安全、无痛的优点，适用于大规模流行病学调查和临床应用。
参考文献
1，Serrano N,Carvajal Z,Pinero R,et al.Evaluation of Method for the diagnosis of Helicobacter pylori infection.GEN,1995,49(4)：292
2，胡伏莲主编.幽门螺杆菌感染的基础与临床.北京:中国科学出版社出版,1997.276
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3，Zwet AA,Thus JC,Kooistra-Smicl AMD,et al.Sensitivity of culture compared with that of polymerase chain reaction for detection of Helicobacter pylori from antral biopsy sample.J Clin Microbiol.1993,31(7):1918
4，刘志田,刘士林,马俊文,主编.中国幽门螺杆菌研究.北京:科学技术文献出版社,1997.259
5，Nguyen Am,Zaatari FA,Graban Dy,et al.Helicobacter pylori in the oral cavity：a critical review of the literature.Oral surg oral Med Oral Pathol oral Radiol Endod.1995,79(6):705
收稿日期：1999-06-22, 百拇医药