急性髓性白血病细胞自分泌造血生长因子水平及其临床意义
作者：樊娟 徐功立 王春霞 徐键 马兰英
单位：樊娟(山东省立医院血液科 ，济南250021)；徐功立(山东省立医院血液科 ，济南250021)；王春霞(山东省立医院中心实验室，济南250021)；徐键(山东省立医院血液科 ，济南250021)；马兰英(山东省立医院血液科 ，济南250021)4
关键词：
中国免疫学杂志000519 中国图书分类号 R733.71
体外细胞培养发现在无外源性HGFs存在情况下，部分AML患者的原始细胞可 自发增殖并形成 集落，而这种自发性增殖可能是由于白血病细胞自身分泌HGFs的结果。我们观察了21例AML 细胞体外自分泌GCSF、GM-CSF的水平，并分析了与临床预后的关系。
1 材料与方法
, http://www.100md.com
1.1 研究对象 AML患者21例，按张之南主编《血液病诊断及 疗效标准》确诊[1] 。按FBA分型，M213例，M34例，M53例，慢粒急粒变1例。男12例，女9例，年龄14～ 74岁，中位年龄为36岁。正常对照组10例，选自非血液系统疾患而行手术治疗的患者，术 中无 菌抽取肋骨或胸骨骨髓液1～2 ml，肝素抗凝。男性7例，女性3例，年龄在16～52岁，中位 年龄为32岁。
1.2 标本采集及细胞培养 21例AML患者，在未经治疗前无菌抽取骨髓液2 ～3 ml(19例)， 或外周血(2例)4～5 ml，肝素抗凝。超净台中用Ficoll Hypaqur分离液梯度离心法，分离 单 个有核细胞(MNC)，调整细胞为1×106 ml-1接种于10%小牛血清RPMI1640液中，在3 7°C、 饱和湿度、5%CO2培养箱中孵育48 h后，2 000 r/min离心10 min，上清分装于EP管中，置 -80°C保存待测。正常对照组细胞以同法制备。每例AML患者分离MNC后，经台盼蓝染色证实细 胞 活性>98%；同时进行Wright-Giemsa染色后，计数400个有核细胞，每例原始细胞比例>90 %。
, 百拇医药
1.3 细胞因子测定 采用双抗体夹心ELISA法，G-CSF及GM-CSF ELISA试 剂盒购自深圳晶美生物工程有限公司，具体方法按检测操作说明进行。
1.4 疗效判定 16例AML患者采用HA(三尖杉酯碱+阿糖胞苷)或DA(柔红霉素+阿糖胞苷)方案，1例采用VM26+米托蒽醌方案，4例M3用维甲酸治疗，按文献[1]标准分为完全缓解(CR)、部分缓解(PR)和未缓解(NR)。
1.5 统计学方法 测定值以表示，采用t 检验和χ2检验。
2 结果
2.1 G-CSF及GM-CSF水平测定结果 正常对照组其G-CSF的测定结果为 (53.36±6.58)ng/L， GM-CSF水平均在10 ng/L以下，其平均值为(6.43±2.82)ng/L。21例AML患者其G-CSF测定 的平均 值为(76.15±24.11)ng/L;10例(47.6%)AML患者其G-CSF平均值为(96.44±19.84)ng/L，明 显高于对照组(P>0.01)。另11例患者其G-CSF水平均与正常对照 无差异[(57.27±6.74)ng/L，P>0.05]。AML患者GM-CSF测定的平均值为(46.61±44 .43)ng/L， 其中12例(57.1%)AML患者其GM-CSF值高于对照组，其平均值为(81.02±79.31)ng/L；余9例AML患者其GM-CSF测定值与正常对照无显著性差异[(4.26±3.58)ng/L，P>0.05]。
, 百拇医药
2.2 AML细胞自分泌性与其临床预后的关系结果见表1。
表1 自分泌HGFs水平与临床疗效的关系
Tab.1 Association between autocrine HGFs
of AML cells and clinical outcomes Groups
n
Levels
CR(%)
PR(%)
NR(%)
G-GSF
, 百拇医药
11
10
Normal
Rise
57.27±6.74
96.44±19.84
8( 72.7)
4(40.0)1)
2(18.2)
3(30.0)
1(9.1)
3(30.0)
, http://www.100md.com
GM-CSF
9
12
Normal
Rise
4.26±3.58
81.02±79.31
8(88 .9)
4(33.3)2)
1(11.1)
4(33.3)
4(33.3)
, http://www.100md.com
Note:1) P<0.01 compared with G-CSF normal; 2)P<0.01 c ompared with GM-CSF normal
3 讨论
大多数的AML细胞的体外增殖与正常造血祖细胞相似，需要有HGFs的刺激，而部分AM细 胞在体外 具有自发性增殖的能力；有研究发现这种自发性增殖可能是由于AML细胞自分泌HGFs的结果 [2]，其分泌的生长因子不仅能达到一定的浓度且有正常的生物活性且足以刺激A ML细胞的生长。我们检测了AML细胞体外培养48 h后其G-CSF及GM-CSF的自分泌水平，发现 47. 6%及57.1%的AML细胞均有G-CSF及GM-CSF不同程度的分泌，AML细胞可通过自分泌内源性的 HGFs而使其具有自发性生长的能力。AML细胞的自分泌现象与临
床预后有密切关系。本文资料显示具有自分泌现象的AML患者其诱 导化疗的缓解率明显低于无分泌现象的AML患者，这可能与具有自分泌性现象的AML细胞自发 生长速度快[3]、易产生耐药及细胞凋亡受抑[4]等有关。
, 百拇医药
作者简介：樊娟，女，35岁，博士，主治医师，主要从事白血病的诊治与实验室 的研究；
徐功立，男，68岁，博士生导师，教授，主要从事血液病的临床诊冶
参考文献
1，张之南主编.血液病诊断及疗效标准.第3版.北京：科学出版社，1998：168
2，Russell N H. Autocrine growth factors and leukaemic haemopoiesis. Blood Rev， 1992；6：149
3，Hassan H T, Drexler H J. Interlukins and colony stimulating factors in human myeloid leukemia cell lines. Leuk Lymphoma，1995；20：1
4，Lotem K, Sacha L. Control of apoptosis in hematopoiesis and leukemia by cytok ines, tumor suppressor and oncogene. Leukemia，1996；10：925
[收稿1999-08-29 修回1999-12-06], http://www.100md.com
单位：樊娟(山东省立医院血液科 ，济南250021)；徐功立(山东省立医院血液科 ，济南250021)；王春霞(山东省立医院中心实验室，济南250021)；徐键(山东省立医院血液科 ，济南250021)；马兰英(山东省立医院血液科 ，济南250021)4
关键词：
中国免疫学杂志000519 中国图书分类号 R733.71
体外细胞培养发现在无外源性HGFs存在情况下，部分AML患者的原始细胞可 自发增殖并形成 集落，而这种自发性增殖可能是由于白血病细胞自身分泌HGFs的结果。我们观察了21例AML 细胞体外自分泌GCSF、GM-CSF的水平，并分析了与临床预后的关系。
1 材料与方法
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1.1 研究对象 AML患者21例，按张之南主编《血液病诊断及 疗效标准》确诊[1] 。按FBA分型，M213例，M34例，M53例，慢粒急粒变1例。男12例，女9例，年龄14～ 74岁，中位年龄为36岁。正常对照组10例，选自非血液系统疾患而行手术治疗的患者，术 中无 菌抽取肋骨或胸骨骨髓液1～2 ml，肝素抗凝。男性7例，女性3例，年龄在16～52岁，中位 年龄为32岁。
1.2 标本采集及细胞培养 21例AML患者，在未经治疗前无菌抽取骨髓液2 ～3 ml(19例)， 或外周血(2例)4～5 ml，肝素抗凝。超净台中用Ficoll Hypaqur分离液梯度离心法，分离 单 个有核细胞(MNC)，调整细胞为1×106 ml-1接种于10%小牛血清RPMI1640液中，在3 7°C、 饱和湿度、5%CO2培养箱中孵育48 h后，2 000 r/min离心10 min，上清分装于EP管中，置 -80°C保存待测。正常对照组细胞以同法制备。每例AML患者分离MNC后，经台盼蓝染色证实细 胞 活性>98%；同时进行Wright-Giemsa染色后，计数400个有核细胞，每例原始细胞比例>90 %。
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1.3 细胞因子测定 采用双抗体夹心ELISA法，G-CSF及GM-CSF ELISA试 剂盒购自深圳晶美生物工程有限公司，具体方法按检测操作说明进行。
1.4 疗效判定 16例AML患者采用HA(三尖杉酯碱+阿糖胞苷)或DA(柔红霉素+阿糖胞苷)方案，1例采用VM26+米托蒽醌方案，4例M3用维甲酸治疗，按文献[1]标准分为完全缓解(CR)、部分缓解(PR)和未缓解(NR)。
1.5 统计学方法 测定值以表示，采用t 检验和χ2检验。
2 结果
2.1 G-CSF及GM-CSF水平测定结果 正常对照组其G-CSF的测定结果为 (53.36±6.58)ng/L， GM-CSF水平均在10 ng/L以下，其平均值为(6.43±2.82)ng/L。21例AML患者其G-CSF测定 的平均 值为(76.15±24.11)ng/L;10例(47.6%)AML患者其G-CSF平均值为(96.44±19.84)ng/L，明 显高于对照组(P>0.01)。另11例患者其G-CSF水平均与正常对照 无差异[(57.27±6.74)ng/L，P>0.05]。AML患者GM-CSF测定的平均值为(46.61±44 .43)ng/L， 其中12例(57.1%)AML患者其GM-CSF值高于对照组，其平均值为(81.02±79.31)ng/L；余9例AML患者其GM-CSF测定值与正常对照无显著性差异[(4.26±3.58)ng/L，P>0.05]。
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2.2 AML细胞自分泌性与其临床预后的关系结果见表1。
表1 自分泌HGFs水平与临床疗效的关系
Tab.1 Association between autocrine HGFs
of AML cells and clinical outcomes Groups
n
Levels
CR(%)
PR(%)
NR(%)
G-GSF
, 百拇医药
11
10
Normal
Rise
57.27±6.74
96.44±19.84
8( 72.7)
4(40.0)1)
2(18.2)
3(30.0)
1(9.1)
3(30.0)
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GM-CSF
9
12
Normal
Rise
4.26±3.58
81.02±79.31
8(88 .9)
4(33.3)2)
1(11.1)
4(33.3)
4(33.3)
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Note:1) P<0.01 compared with G-CSF normal; 2)P<0.01 c ompared with GM-CSF normal
3 讨论
大多数的AML细胞的体外增殖与正常造血祖细胞相似，需要有HGFs的刺激，而部分AM细 胞在体外 具有自发性增殖的能力；有研究发现这种自发性增殖可能是由于AML细胞自分泌HGFs的结果 [2]，其分泌的生长因子不仅能达到一定的浓度且有正常的生物活性且足以刺激A ML细胞的生长。我们检测了AML细胞体外培养48 h后其G-CSF及GM-CSF的自分泌水平，发现 47. 6%及57.1%的AML细胞均有G-CSF及GM-CSF不同程度的分泌，AML细胞可通过自分泌内源性的 HGFs而使其具有自发性生长的能力。AML细胞的自分泌现象与临
床预后有密切关系。本文资料显示具有自分泌现象的AML患者其诱 导化疗的缓解率明显低于无分泌现象的AML患者，这可能与具有自分泌性现象的AML细胞自发 生长速度快[3]、易产生耐药及细胞凋亡受抑[4]等有关。
, 百拇医药
作者简介：樊娟，女，35岁，博士，主治医师，主要从事白血病的诊治与实验室 的研究；
徐功立，男，68岁，博士生导师，教授，主要从事血液病的临床诊冶
参考文献
1，张之南主编.血液病诊断及疗效标准.第3版.北京：科学出版社，1998：168
2，Russell N H. Autocrine growth factors and leukaemic haemopoiesis. Blood Rev， 1992；6：149
3，Hassan H T, Drexler H J. Interlukins and colony stimulating factors in human myeloid leukemia cell lines. Leuk Lymphoma，1995；20：1
4，Lotem K, Sacha L. Control of apoptosis in hematopoiesis and leukemia by cytok ines, tumor suppressor and oncogene. Leukemia，1996；10：925
[收稿1999-08-29 修回1999-12-06], http://www.100md.com