扶正冲剂中黄芪甲苷的薄层扫描法测定
作者：俞建平 杨根元 林燕
单位：俞建平(浙江省药品检验所 杭州 310004)；杨根元(浙江三九邦而康药业有限公司 浦江 322200)；林燕(浙江省儿童保健医院 杭州 310003)
关键词：
中国现代应用药学000608 扶正冲剂为经验方研制而成的中药三类新药，由黄芪、重楼、白花蛇舌草等十几味中药组成。具有扶正祛邪、补气益血等功能，临床上用于胃癌、肠癌等辅助治疗。为了更好地控制该药的生产质量，我们选择黄芪甲苷作为指标，建立薄层扫描法测定扶正冲剂中黄芪甲苷的含量的方法，以进一步完善质量控制体系。
1 仪器与试剂
CAMAG薄层色谱点样仪、CAMAG薄层扫描仪(瑞士CAMAG公司)。黄芪甲苷对照品由中国药品生物制品检定所提供(含量测定用)。所用试剂及药品均为分析纯。
, 百拇医药
2 方法与结果
2.1 色谱条件 硅胶G薄层板(以含1%磷酸二氢钠的0.3%CMC-Na为粘合剂)；展开剂：氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶22∶10)10℃以下放置的下层液；显色剂为10%硫酸乙醇液，107℃烘至斑点清晰；λS=530nm,λR=700nm,狭缝宽度1.2×0.2mm2,双波长直线扫描。
2.2 供试品溶液及对照品溶液的制备 取本品粉末5g,加热水100ml使溶解，用氯仿50ml洗一次，弃去洗液，再用氯仿-正丁醇混合液(2∶1)萃取5次(30,30,30,30,20ml),合并萃取液，蒸干，残渣先用10ml甲醇溶解，再用水50ml微热使溶解，合并甲醇液和水液，加氢氧化钾1g,水浴回流2h,将回流液和10ml水洗液合并转移至分液漏斗中，用氯仿-正丁醇混合液(2∶1)萃取5次(30,30,30,30,20ml),合并萃取液，用1%磷酸二氢钠溶液50ml洗一次，弃去洗液，萃取液蒸干，残渣用2ml甲醇溶解，作为供试品溶液。精密称取黄芪甲苷对照品5.06mg,用甲醇溶解并定容至10ml量瓶中，制成每1ml中含0.506mg的溶液，作为对照品溶液。
, 百拇医药
2.3 线性关系考察 精密吸取黄芪甲苷对照品溶液(0.506mg/ml),在同一薄层板上分别点1,2,4,6,8μl,照上述条件展开，显色，薄层扫描。以点样量为横坐标，以峰面积积分值为纵坐标，得到直线回归方程为A=543.01c+62.79,r=0.9968(n=5)。结果表明；黄芪甲苷在0.506～4.408μg范围内线性关系良好。因线性方程不过原点，故采用外标两点法测定。
2.4 空白试验 取缺黄芪味样品进行测定，结果缺味样品在黄芪甲苷对照品斑点对应处无明显对应斑点，进行薄层扫描，结果缺味样品与样品峰面积积分值之比为5.3%，可忽略不计，认为缺味样品无干扰，结果见图1。
图1 缺黄芪样品薄层扫描图
2.5 斑点稳定性试验 取黄芪甲苷对照品溶液点于薄层板上，依法操作，每隔0.5h测一次，共测2h,五次测定结果表明板内峰面积积分值RSD为1.5%，黄芪甲苷在2h内斑点稳定。
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2.6 同板精密度和异板精密度考察 取同一供试品溶液在同一薄层板上点5个相同量的斑点(8μl)，依法测定，测得板内峰面积积分值的RSD为2.4%；取同一供试品溶液在不同5块薄层板上点相同量的斑点(8μl)，依法测定，测得板内峰面积积分值的RSD为2.2%。
2.7 重复性试验 取扶正冲剂同一批样品五份，依法测定，测得板内峰面积积分值的RSD为5.3%(n=5)。
2.8 回收率试验 取样品2.5g,加入一定量对照品，依法操作，结果见表1。
表1 回收率试验结果 序号
样品中黄芪
甲苷量/mg
加入黄芪甲
, 百拇医药 苷量/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均值
/%
RSD
/%
1
0.2715
0.267
0.5238
, 百拇医药
94.5
2
0.2718
0.267
0.5243
94.6
3
0.2717
0.267
0.5370
99.4
98.3
3.6
, http://www.100md.com
4
0.2718
0.267
0.5442
102.0
5
0.2718
0.267
0.5421
101.2
2.9 样品测定 精密吸取供试品溶液8μl及对照品溶液2，5μl分别交叉点于同一薄层板上，依法展开和测定。样品和对照品扫描图谱见图2，3，三批样品的结果见表2。
, 百拇医药
图2 扶正冲剂薄层扫描图
图3 黄芪甲苷薄层扫描图
表2 样品测定结果 批号成分
黄芪甲苷(mg/包)
(1)
(2)
平均
990111
1.12
1.14
1.13
990112
, 百拇医药
1.08
1.07
1.08
990113
1.05
1.10
1.08
3 讨 论
扶正冲剂为复方制剂，除黄芪含皂苷类成分外，其他味中药也含皂苷类及其他成份。为提取和分离黄芪甲苷，曾选用正丁醇、甲醇等溶剂提取，通过大孔吸附树脂、中性氧化铝柱等处理，但结果均不理想。后来采用氢氧化钾液皂化后，再经氯仿-正丁醇(2∶1)混合液提取纯化处理，所得提取物薄层斑点清晰，消除了一般皂苷成分薄层扫描法测定时常见的干扰现象，重现性好。所用硅胶G薄层板采用含1%磷酸二氢钠的0.3%CMC-Na为粘合剂，斑点分离更清晰。
收稿日期：1999-07-16, http://www.100md.com
单位：俞建平(浙江省药品检验所 杭州 310004)；杨根元(浙江三九邦而康药业有限公司 浦江 322200)；林燕(浙江省儿童保健医院 杭州 310003)
关键词：
中国现代应用药学000608 扶正冲剂为经验方研制而成的中药三类新药，由黄芪、重楼、白花蛇舌草等十几味中药组成。具有扶正祛邪、补气益血等功能，临床上用于胃癌、肠癌等辅助治疗。为了更好地控制该药的生产质量，我们选择黄芪甲苷作为指标，建立薄层扫描法测定扶正冲剂中黄芪甲苷的含量的方法，以进一步完善质量控制体系。
1 仪器与试剂
CAMAG薄层色谱点样仪、CAMAG薄层扫描仪(瑞士CAMAG公司)。黄芪甲苷对照品由中国药品生物制品检定所提供(含量测定用)。所用试剂及药品均为分析纯。
, 百拇医药
2 方法与结果
2.1 色谱条件 硅胶G薄层板(以含1%磷酸二氢钠的0.3%CMC-Na为粘合剂)；展开剂：氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶22∶10)10℃以下放置的下层液；显色剂为10%硫酸乙醇液，107℃烘至斑点清晰；λS=530nm,λR=700nm,狭缝宽度1.2×0.2mm2,双波长直线扫描。
2.2 供试品溶液及对照品溶液的制备 取本品粉末5g,加热水100ml使溶解，用氯仿50ml洗一次，弃去洗液，再用氯仿-正丁醇混合液(2∶1)萃取5次(30,30,30,30,20ml),合并萃取液，蒸干，残渣先用10ml甲醇溶解，再用水50ml微热使溶解，合并甲醇液和水液，加氢氧化钾1g,水浴回流2h,将回流液和10ml水洗液合并转移至分液漏斗中，用氯仿-正丁醇混合液(2∶1)萃取5次(30,30,30,30,20ml),合并萃取液，用1%磷酸二氢钠溶液50ml洗一次，弃去洗液，萃取液蒸干，残渣用2ml甲醇溶解，作为供试品溶液。精密称取黄芪甲苷对照品5.06mg,用甲醇溶解并定容至10ml量瓶中，制成每1ml中含0.506mg的溶液，作为对照品溶液。
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2.3 线性关系考察 精密吸取黄芪甲苷对照品溶液(0.506mg/ml),在同一薄层板上分别点1,2,4,6,8μl,照上述条件展开，显色，薄层扫描。以点样量为横坐标，以峰面积积分值为纵坐标，得到直线回归方程为A=543.01c+62.79,r=0.9968(n=5)。结果表明；黄芪甲苷在0.506～4.408μg范围内线性关系良好。因线性方程不过原点，故采用外标两点法测定。
2.4 空白试验 取缺黄芪味样品进行测定，结果缺味样品在黄芪甲苷对照品斑点对应处无明显对应斑点，进行薄层扫描，结果缺味样品与样品峰面积积分值之比为5.3%，可忽略不计，认为缺味样品无干扰，结果见图1。
图1 缺黄芪样品薄层扫描图
2.5 斑点稳定性试验 取黄芪甲苷对照品溶液点于薄层板上，依法操作，每隔0.5h测一次，共测2h,五次测定结果表明板内峰面积积分值RSD为1.5%，黄芪甲苷在2h内斑点稳定。
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2.6 同板精密度和异板精密度考察 取同一供试品溶液在同一薄层板上点5个相同量的斑点(8μl)，依法测定，测得板内峰面积积分值的RSD为2.4%；取同一供试品溶液在不同5块薄层板上点相同量的斑点(8μl)，依法测定，测得板内峰面积积分值的RSD为2.2%。
2.7 重复性试验 取扶正冲剂同一批样品五份，依法测定，测得板内峰面积积分值的RSD为5.3%(n=5)。
2.8 回收率试验 取样品2.5g,加入一定量对照品，依法操作，结果见表1。
表1 回收率试验结果 序号
样品中黄芪
甲苷量/mg
加入黄芪甲
, 百拇医药 苷量/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均值
/%
RSD
/%
1
0.2715
0.267
0.5238
, 百拇医药
94.5
2
0.2718
0.267
0.5243
94.6
3
0.2717
0.267
0.5370
99.4
98.3
3.6
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4
0.2718
0.267
0.5442
102.0
5
0.2718
0.267
0.5421
101.2
2.9 样品测定 精密吸取供试品溶液8μl及对照品溶液2，5μl分别交叉点于同一薄层板上，依法展开和测定。样品和对照品扫描图谱见图2，3，三批样品的结果见表2。
, 百拇医药
图2 扶正冲剂薄层扫描图
图3 黄芪甲苷薄层扫描图
表2 样品测定结果 批号成分
黄芪甲苷(mg/包)
(1)
(2)
平均
990111
1.12
1.14
1.13
990112
, 百拇医药
1.08
1.07
1.08
990113
1.05
1.10
1.08
3 讨 论
扶正冲剂为复方制剂，除黄芪含皂苷类成分外，其他味中药也含皂苷类及其他成份。为提取和分离黄芪甲苷，曾选用正丁醇、甲醇等溶剂提取，通过大孔吸附树脂、中性氧化铝柱等处理，但结果均不理想。后来采用氢氧化钾液皂化后，再经氯仿-正丁醇(2∶1)混合液提取纯化处理，所得提取物薄层斑点清晰，消除了一般皂苷成分薄层扫描法测定时常见的干扰现象，重现性好。所用硅胶G薄层板采用含1%磷酸二氢钠的0.3%CMC-Na为粘合剂，斑点分离更清晰。
收稿日期：1999-07-16, http://www.100md.com