瘤内微血管密度与胃癌临床病理特征相关性研究
作者：王爱东 吕光成
单位：苏州医学院附属一院普外科，苏州，215006
关键词：胃癌；血管生成；转移
苏州医学院学报000617 摘要 目的 探讨肿瘤内血管生成在胃癌生长、侵袭、转移中的作用。方法 采用免疫组织化学SP法，用抗血管内皮CD34 单克隆抗体对40例胃癌及10份正常胃组织标本进行标记分析。结果 肿瘤微血管密度(MVD)较正常胃组织显著增高(P<0.01)；淋巴结转移组MVD显著高于无淋巴结转移组(P<0.01)；肿瘤肝脏转移组MVD较无肝转移组增高(P<0.05)。结论 瘤内血管密度与胃癌的侵袭、转移密切相关，血管生成可能促进胃癌的发展并影响其预后。
中图法分类号 R735.202
The Study of the Relationship between Intratumor Microvessel Density
, http://www.100md.com
and the Clinicopathological Features of Gastric Carcinoma
Wang Aidong, Lu Guangcheng
(Department of General Surgery，The First Hospital Affiliated to Suzhou Medical College,Suzhou,215006)
Abstract Objective To evaluate the role of angiogenesis in growth、invasion and metastasis of gastric carcinoma.Methods The microvessel density(MVD)was determined by immunohistochemical SP method using a monoclonal antibody to CD34 in samples of 40 gastric carcinoma and 10 normal gastric tissue.Results MVD was significantly higher in carcinoma than that in normal gastric samples(P<0.01)and higher in the groups with lymphnode involvement or liver metastases than that without lymphnode involvement or liver metastases(P<0.01 and P<0.05 Respectively).Conclusions Intratumor MVD is strongly related to the invasion and metastasis of gastric carcinoma. Angiogenesis might promote the progression of gastric carcinoma and affect the prognosis of the patients.
, 百拇医药
Key words gastric carcinoma;angiogenesis metastasis
恶性肿瘤的发展需要血管生成来提供营养及排除代谢产物，恶性肿瘤可诱导新生血管生成，血管生成是导致肿瘤远处转移的原因。早在10年前，Folkman[1]等就提出血管发生与肿瘤恶性生物学行为密切相关。大量研究表明，瘤内微血管密度增高与乳癌[2]、卵巢癌[3]及其它多种肿瘤生长、侵袭和转移有关，并可作为上述肿瘤判断预后的独立指标。本研究探讨血管发生在胃癌发展中的作用，并分析其与胃癌临床病理特征间的关系。结果报道于下。
1 资料与方法
1.1 标本采集和临床资料 选取1998年我院手术切除的胃癌40例，其中男29例，女11例，年龄34～73岁，平均53.4岁；按Laurren's分型分为肠型12例，弥漫型28例；病理证实淋巴结转移26例，无淋巴结转移14例；浆膜侵犯25例，无侵犯15例；肝脏转移5例，无肝转移35例。所有标本切取包括肿瘤中心及边缘灶制成蜡块。另选10名正常人胃粘膜组织作对照。
, 百拇医药
1.2 方法 所有标本均经10%中性福尔马林溶液固定、石蜡包埋、5μm切片，进行免疫组织化学染色。免疫组化SP试剂盒及抗CD34单克隆抗体(QBEnd/10)均为Maxin Biotech、Inc产品，具体操作见产品说明书。
1.3 微血管密度计数 按文献[2]方法低倍镜下观察整张切片的血管分布情况后，选择癌灶周围间质血管密集区，在400×视野内计数上述4个不同区域的微血管数，取其平均值为微血管密度(MVD)。计数时管腔直径<50μm者(相当于6个红细胞直径)诊断为微血管，管腔直径>50μm或管壁含有肌层者不作为微血管计数。另单个染色细胞或成群无管腔的染色细胞也作独立微血管计数。
1.4 结果
1.4.1 染色结果 CD34 染色定位于血管内皮上，所有切片的血管内皮细胞均为CD34 染色阳性，呈棕黄色，最密集的染色区域主要位于癌灶边缘，有些新生血管已成管腔样结构，有些只见内皮细胞呈点状或线状分布。40例胃癌MVD平均为30.7±11.4，10份正常胃粘膜组织MVD平均为13.5±5.9，两组差异显著(P<0.01)。
, 百拇医药
1.4.2 临床病理特征与微血管密度的关系 见表1、2。表1示MVD增高与肿瘤肝脏转移相关(P<0.05)，与淋巴结转移密切相关(P<0.01)，与胃癌病理分型及浆膜侵犯无关(P>0.05)。表2示随着胃癌分期的增高，血管密度增加，其中Ⅲ、Ⅳ期与Ⅰ期相比，MVD有统计学差异(P<0.05)。
表1 胃癌临床病理特征与胃癌MVD的关系(
±s) MVD
淋巴结
病理分型
浆膜侵犯
肝转移
阳性
阴性
, 百拇医药
弥漫性
肠型
阳性
阴性
阳性
阴性
n
26
14
28
12
25
15
5
, 百拇医药
35
MVD
35.4±10.2
24.6±11.9
31.2±10.6
28.1±9.2
31.9±9.8
29.4±10.5
40.3±12.8
30.2±10.7
P值
<0.01
, 百拇医药
>0.05
>0.05
<0.05
表2 MVD与胃癌病理分期之间的关系(±s) 分期
n
MVD
Ⅰ
7
25.5±9.2
Ⅱ
8
, 百拇医药 28.8±7.9
Ⅲ
15
35.9±11.2△
Ⅳ
10
36.5±11.5△
△与Ⅰ期相比，P<0.05
2 讨论
实体肿瘤的生长需要血管来提供营养和排泄自身代谢产物。当肿瘤不足1mm3时这一过程可通过组织渗透来完成。当肿瘤直径>2mm3时，其发展必需依赖新生血管的形成。一方面，新生血管为癌组织运送必需的营养物质和氧，并清除代谢废物；另一方面，新生血管内皮细胞可释放生长因子，刺激原发癌的分裂增殖。恶性肿瘤的发展由无血管期过渡到血管期后，其有诱导血管生成的能力，随着血管生成，肿瘤本身随之迅速生长。由于肿瘤新生血管本身结构上的缺陷，稳定性差，渗透性大，生长调节异于正常组织，客观上为肿瘤的转移提供了条件。1992年Weidner等[2]首先报道了瘤内微血管密度增高与乳癌的淋巴结转移及预后密切相关。尔后，其它包括大肠癌等一些肿瘤的研究得到相似的结论。
, http://www.100md.com
CD34 最早被发现于骨髓造血干细胞，近年研究证实，CD34 还存在于正常及肿瘤血管内皮细胞，是一种新的较Ⅷ因子相关抗原及CD31 更可靠、灵敏的血管标记抗原。本研究利用抗CD34 单克隆抗体对胃癌原发灶组织内血管进行标记，使在光学显微镜下常规染色无法辨认的微血管经CD34 抗原标记，从而可准确地计数癌组织内微血管密度。结果发现，胃癌组织内MVD较正常组织明显增高，且肿瘤边缘密度大于中心密度，表明肿瘤在向外浸润性生长过程中；新生血管化是同步进行的。Weidner认为，肿瘤血管内皮细胞正象肿瘤细胞本身一样，可分泌胶原酶(如明胶酶A、B)来降解周围基质，使得自身血管芽形成并得以树状向前延伸。这过程中，肿瘤细胞极易进入新生血管。研究表明，进入血管的癌细胞数与血管密度呈正比[4]。本实验同时发现淋巴结及肝脏转移组MVD明显增高且有显著差异，这与国外同类研究[5]结果基本一致。微血管密度越高，肿瘤细胞进入血循环及淋巴循环的机会越多，淋巴结及邻近脏器转移机率也越大。其预后可能越差。许多肿瘤研究发现，MVD可作为独立的预后指标。Gasparini等[6]人发现在判断早期乳癌无瘤生存及总存活期方面，MVD较P53，C-erbB-2、DNA倍体数及表皮生长因子受体等指标有更高的价值。
, 百拇医药
因此，临床上可将瘤内微血管密度作为判断胃癌分期、转移及判断预后的重要参考指标。另外，抗血管生成类药物的开发和应用将会成为胃癌新的辅助治疗手段。
参考文献
[1] Folkman J. What is the evidence that tumors are angiogenesis dependent. J Natl Cancer Inst.1990,82∶4
[2] Weidner N, Folkman J, Pozza F, et al. Tumor angiogenesis: a new significant and independent prognostic indicator in early-stage breast carcinoma.J Natl Cancer Inst,1992,84∶1875
, 百拇医药 [3] Hollingsworth HC, Kohn EC, Steinberg SM, et al. Tumor angiogenesis in advanced stage ovarian carcinoma. Am J Pathol,1995,147∶33
[4] Fockman J.Tumor angiogenesis. Adv Cancer Res 1985,43∶175
[5] Araya M,Terashima M, Takagane A, et al. Microvessel count predicts metastasis and prognosis in patients with gastric cancer. J Surg Oncol,1997,65∶232
[6] Gasparini G,Bevilacqua P,Boracchi P,et al.Prognostic value of P53 expression in early-stage breast carcinoma compared with tumor angiogenesis, epidermal growth factor receptor,c-erbB2、cathepsin D, DNA Ploidy, parameters of cell kinetics and conventional features. Int J Oncol，1994,4∶155
(2000年1月19日收稿), http://www.100md.com
单位：苏州医学院附属一院普外科，苏州，215006
关键词：胃癌；血管生成；转移
苏州医学院学报000617 摘要 目的 探讨肿瘤内血管生成在胃癌生长、侵袭、转移中的作用。方法 采用免疫组织化学SP法，用抗血管内皮CD34 单克隆抗体对40例胃癌及10份正常胃组织标本进行标记分析。结果 肿瘤微血管密度(MVD)较正常胃组织显著增高(P<0.01)；淋巴结转移组MVD显著高于无淋巴结转移组(P<0.01)；肿瘤肝脏转移组MVD较无肝转移组增高(P<0.05)。结论 瘤内血管密度与胃癌的侵袭、转移密切相关，血管生成可能促进胃癌的发展并影响其预后。
中图法分类号 R735.202
The Study of the Relationship between Intratumor Microvessel Density
, http://www.100md.com
and the Clinicopathological Features of Gastric Carcinoma
Wang Aidong, Lu Guangcheng
(Department of General Surgery，The First Hospital Affiliated to Suzhou Medical College,Suzhou,215006)
Abstract Objective To evaluate the role of angiogenesis in growth、invasion and metastasis of gastric carcinoma.Methods The microvessel density(MVD)was determined by immunohistochemical SP method using a monoclonal antibody to CD34 in samples of 40 gastric carcinoma and 10 normal gastric tissue.Results MVD was significantly higher in carcinoma than that in normal gastric samples(P<0.01)and higher in the groups with lymphnode involvement or liver metastases than that without lymphnode involvement or liver metastases(P<0.01 and P<0.05 Respectively).Conclusions Intratumor MVD is strongly related to the invasion and metastasis of gastric carcinoma. Angiogenesis might promote the progression of gastric carcinoma and affect the prognosis of the patients.
, 百拇医药
Key words gastric carcinoma;angiogenesis metastasis
恶性肿瘤的发展需要血管生成来提供营养及排除代谢产物，恶性肿瘤可诱导新生血管生成，血管生成是导致肿瘤远处转移的原因。早在10年前，Folkman[1]等就提出血管发生与肿瘤恶性生物学行为密切相关。大量研究表明，瘤内微血管密度增高与乳癌[2]、卵巢癌[3]及其它多种肿瘤生长、侵袭和转移有关，并可作为上述肿瘤判断预后的独立指标。本研究探讨血管发生在胃癌发展中的作用，并分析其与胃癌临床病理特征间的关系。结果报道于下。
1 资料与方法
1.1 标本采集和临床资料 选取1998年我院手术切除的胃癌40例，其中男29例，女11例，年龄34～73岁，平均53.4岁；按Laurren's分型分为肠型12例，弥漫型28例；病理证实淋巴结转移26例，无淋巴结转移14例；浆膜侵犯25例，无侵犯15例；肝脏转移5例，无肝转移35例。所有标本切取包括肿瘤中心及边缘灶制成蜡块。另选10名正常人胃粘膜组织作对照。
, 百拇医药
1.2 方法 所有标本均经10%中性福尔马林溶液固定、石蜡包埋、5μm切片，进行免疫组织化学染色。免疫组化SP试剂盒及抗CD34单克隆抗体(QBEnd/10)均为Maxin Biotech、Inc产品，具体操作见产品说明书。
1.3 微血管密度计数 按文献[2]方法低倍镜下观察整张切片的血管分布情况后，选择癌灶周围间质血管密集区，在400×视野内计数上述4个不同区域的微血管数，取其平均值为微血管密度(MVD)。计数时管腔直径<50μm者(相当于6个红细胞直径)诊断为微血管，管腔直径>50μm或管壁含有肌层者不作为微血管计数。另单个染色细胞或成群无管腔的染色细胞也作独立微血管计数。
1.4 结果
1.4.1 染色结果 CD34 染色定位于血管内皮上，所有切片的血管内皮细胞均为CD34 染色阳性，呈棕黄色，最密集的染色区域主要位于癌灶边缘，有些新生血管已成管腔样结构，有些只见内皮细胞呈点状或线状分布。40例胃癌MVD平均为30.7±11.4，10份正常胃粘膜组织MVD平均为13.5±5.9，两组差异显著(P<0.01)。
, 百拇医药
1.4.2 临床病理特征与微血管密度的关系 见表1、2。表1示MVD增高与肿瘤肝脏转移相关(P<0.05)，与淋巴结转移密切相关(P<0.01)，与胃癌病理分型及浆膜侵犯无关(P>0.05)。表2示随着胃癌分期的增高，血管密度增加，其中Ⅲ、Ⅳ期与Ⅰ期相比，MVD有统计学差异(P<0.05)。
表1 胃癌临床病理特征与胃癌MVD的关系(
±s) MVD淋巴结
病理分型
浆膜侵犯
肝转移
阳性
阴性
, 百拇医药
弥漫性
肠型
阳性
阴性
阳性
阴性
n
26
14
28
12
25
15
5
, 百拇医药
35
MVD
35.4±10.2
24.6±11.9
31.2±10.6
28.1±9.2
31.9±9.8
29.4±10.5
40.3±12.8
30.2±10.7
P值
<0.01
, 百拇医药
>0.05
>0.05
<0.05
表2 MVD与胃癌病理分期之间的关系(
±s) 分期n
MVD
Ⅰ
7
25.5±9.2
Ⅱ
8
, 百拇医药 28.8±7.9
Ⅲ
15
35.9±11.2△
Ⅳ
10
36.5±11.5△
△与Ⅰ期相比，P<0.05
2 讨论
实体肿瘤的生长需要血管来提供营养和排泄自身代谢产物。当肿瘤不足1mm3时这一过程可通过组织渗透来完成。当肿瘤直径>2mm3时，其发展必需依赖新生血管的形成。一方面，新生血管为癌组织运送必需的营养物质和氧，并清除代谢废物；另一方面，新生血管内皮细胞可释放生长因子，刺激原发癌的分裂增殖。恶性肿瘤的发展由无血管期过渡到血管期后，其有诱导血管生成的能力，随着血管生成，肿瘤本身随之迅速生长。由于肿瘤新生血管本身结构上的缺陷，稳定性差，渗透性大，生长调节异于正常组织，客观上为肿瘤的转移提供了条件。1992年Weidner等[2]首先报道了瘤内微血管密度增高与乳癌的淋巴结转移及预后密切相关。尔后，其它包括大肠癌等一些肿瘤的研究得到相似的结论。
, http://www.100md.com
CD34 最早被发现于骨髓造血干细胞，近年研究证实，CD34 还存在于正常及肿瘤血管内皮细胞，是一种新的较Ⅷ因子相关抗原及CD31 更可靠、灵敏的血管标记抗原。本研究利用抗CD34 单克隆抗体对胃癌原发灶组织内血管进行标记，使在光学显微镜下常规染色无法辨认的微血管经CD34 抗原标记，从而可准确地计数癌组织内微血管密度。结果发现，胃癌组织内MVD较正常组织明显增高，且肿瘤边缘密度大于中心密度，表明肿瘤在向外浸润性生长过程中；新生血管化是同步进行的。Weidner认为，肿瘤血管内皮细胞正象肿瘤细胞本身一样，可分泌胶原酶(如明胶酶A、B)来降解周围基质，使得自身血管芽形成并得以树状向前延伸。这过程中，肿瘤细胞极易进入新生血管。研究表明，进入血管的癌细胞数与血管密度呈正比[4]。本实验同时发现淋巴结及肝脏转移组MVD明显增高且有显著差异，这与国外同类研究[5]结果基本一致。微血管密度越高，肿瘤细胞进入血循环及淋巴循环的机会越多，淋巴结及邻近脏器转移机率也越大。其预后可能越差。许多肿瘤研究发现，MVD可作为独立的预后指标。Gasparini等[6]人发现在判断早期乳癌无瘤生存及总存活期方面，MVD较P53，C-erbB-2、DNA倍体数及表皮生长因子受体等指标有更高的价值。
, 百拇医药
因此，临床上可将瘤内微血管密度作为判断胃癌分期、转移及判断预后的重要参考指标。另外，抗血管生成类药物的开发和应用将会成为胃癌新的辅助治疗手段。
参考文献
[1] Folkman J. What is the evidence that tumors are angiogenesis dependent. J Natl Cancer Inst.1990,82∶4
[2] Weidner N, Folkman J, Pozza F, et al. Tumor angiogenesis: a new significant and independent prognostic indicator in early-stage breast carcinoma.J Natl Cancer Inst,1992,84∶1875
, 百拇医药 [3] Hollingsworth HC, Kohn EC, Steinberg SM, et al. Tumor angiogenesis in advanced stage ovarian carcinoma. Am J Pathol,1995,147∶33
[4] Fockman J.Tumor angiogenesis. Adv Cancer Res 1985,43∶175
[5] Araya M,Terashima M, Takagane A, et al. Microvessel count predicts metastasis and prognosis in patients with gastric cancer. J Surg Oncol,1997,65∶232
[6] Gasparini G,Bevilacqua P,Boracchi P,et al.Prognostic value of P53 expression in early-stage breast carcinoma compared with tumor angiogenesis, epidermal growth factor receptor,c-erbB2、cathepsin D, DNA Ploidy, parameters of cell kinetics and conventional features. Int J Oncol，1994,4∶155
(2000年1月19日收稿), http://www.100md.com