脐血LAK与CIK细胞杀伤活性研究
作者:白艳艳 缪竞诚 郝福荣 苏丽萍 罗俊鹏 张占英 张澜生
单位:苏州医学院细胞免疫中心,苏州,215007
关键词:脐血;LAK;CIK;杀伤活性
苏州医学院学报000605 摘要 目的 寻求一种可用于过继免疫疗法的高效免疫活性细胞。方法 用多种细胞因子诱生CIK细胞,用MTT法测定LAK和CIK细胞杀伤活性。结果 在峰值期CIK细胞杀伤活性均显著高于LAK细胞(P<0.05)。结论 CIK细胞与LAK细胞属不同的细胞毒性细胞,脐血CIK细胞的高杀伤活性提示其可能成为过继免疫疗法的生力军。
中图法分类号 R392.12
Experimetal Study on Lymphokine Activated Killer Cells' and
Cytokine Induced Killer Cells' Activity of Cord Blood
Bai Yanyan, Miao Jingcheng, Hao Furong, et al
(Cellular Immunological Research Center,Suzhou Medical College,Suzhou,215007)
Abstract Objective To search for a kind of efficient and active immunocytes which can be used in transitional immunology therapy.Methods The cytotoxicity of CIK induced by multiple cytokines and LAK invitra was tested by MTT assays.Results During the peak period,the cytotoxicity of CIK is significantly higher than that of LAK.Conclusion CIK and LAK may be different cell populations.Fetal blood CIK may become a vivacions new method of transitional immunology therapy.
Key words fetal blood;LAK;CIK;cytotoxicity
NK细胞(Natural Killer Cells)具有非特异杀伤肿瘤细胞的功能,LAK细胞(Lymphokine Activated Killer Cells)是经IL-2激活的NK细胞,具有广谱、高效溶解和杀伤多种肿瘤细胞的能力,其在过继免疫治疗中,对抗肿瘤具有一定疗效。CIK细胞(Cytokine Induced Killer Cells)是经多种细胞因子如γ-IFN、IL-1、IL-2和CD3单抗等诱导产生的新型、广谱杀瘤的免疫活性细胞。本实验通过对胎儿脐血LAK与CIK细胞在不同时期杀伤活性的比较,旨在寻求可用于过继免疫疗法的高效免疫活性细胞。
1 材料与方法
1.1 标本 脐血取自健康足月临产产妇,肝素50U/ml抗凝,无菌采集,4℃保存<12h。由苏州市二医院提供10例。
1.2 主要试剂和细胞株 重组人IL-1、重组人γ-IFN、CD3单克隆抗体(均由本院免疫学研究室惠赠)、重组人IL-2由本室提供。K562细胞株由本室提供。
1.3 方法
1.3.1 脐血单个核细胞(MNC)分离 取肝素抗凝脐血,经等量Ficoll分离液(比重1.077)密度梯度离心25min,收集中间云雾状液体。用生理盐水洗涤2次,备用。
1.3.2 诱生效应细胞 ①LAK细胞:调备用细胞浓度至1×106/ml,加入IL-2 200U/ml,放37℃、5%CO2温箱中培养,每3d换液加IL-2 200U/ml,分别在第3、7、14及21d收集细胞1×106/ml作细胞杀伤活性测定。②CIK细胞:调备用细胞浓度至1×106/ml,加入γ-IFN 1000U/ml,培养至第2d加入IL-1 10U/ml、CD3单抗50ng/ml,IL-2 200U/ml,每3d换液1次,补加IL-2 200U/ml,每7d补加CD3单抗50ng/ml,分别于第3、7、14、21d收集细胞1×106/ml作细胞杀伤活性测定。
1.3.3 细胞杀伤活性测定[1] 经台盼兰染色分别测定效应细胞和靶细胞拒染率>96%,用效靶比50∶1把效应细胞(LAK或CIK细胞)和靶细胞(K562细胞)放入96孔板,分设单独效应细胞或靶细胞孔,每组设3个复孔,置温箱中培养4h,用MTT法测细胞杀伤活性。
杀伤活性(%)=[1-(实验组OD值-单独效应细胞OD值)/单独靶细胞OD值]×100%
1.4 统计学处理 采用t检验。
2 结果
LAK细胞与CIK细胞对K562细胞杀伤活性随时间变化见附图。LAK细胞在第7d杀伤活性最高,CIK细胞在第14d杀伤活性最高。在峰值期CIK细胞杀伤活性显著高于LAK细胞(附表)。
时间(d)
附图 LAK与CIK杀伤活性(对K562)随时间的变化
附表 两种细胞第3、7、14、21d杀伤活性比较(%,
第3d
第7d
第14d
第21d
LAK
24±
4.5
68±
4.7
56±
4.6
32±
4.3
CIK
25±
4.4
51±
4.6*
79±
4.9*
62±
4.8
*与LAK细胞比较,P<0.05
3 讨论
本文结果证实,脐血CIK细胞是显著优于LAK细胞的一类具有非MHC限制性杀伤活力的新型免疫活性细胞。Chin TW[2]曾证明,脐血LAK细胞杀瘤活性明显高于成人外周血LAK细胞杀伤活性。Montagna等[3]的研究也获得类似结果。由于过继免疫疗法是辅佐治疗恶性肿瘤和严重感染不容忽视的环节,脐血LAK细胞在国内临床应用较广。但目前对CIK细胞研究尚少,CIK细胞与LAK细胞杀伤活性高峰值时间不同,提示二者是不同的细胞毒性细胞。有文献[4,5]报道,外周血MNCS诱生的CIK表型为CD+3、CD+56,而LAK表型为CD-3、CD+56,可能CIK是以T细胞为主的细胞群,LAK则以NK细胞为主。本实验尚未对成人外周血与脐血CIK细胞活性作比较。
多种细胞因子诱生CIK的作用机理,主要是γ-IFN可诱导IL-1等淋巴因子合成,IL-1可协同CD3单抗诱导T细胞活化,并增加IL-2合成及IL-2受体表达,并间接扩大杀伤性T细胞功能。
因脐血来源广泛,输注脐血CIK存在GVHD低反应性等优点,故脐血CIK细胞是较为理想的可用于过继免疫疗法的生力军,其临床应用价值尚有待进一步证实,CIK细胞杀伤活性明显优于LAK细胞的作用机理还将深入研究。
参考文献
[1] 朱慧芬.MTT比色法检测IL-2和杀伤细胞活性的研究.免疫学杂志,1994,10(1)∶48
[2] Chin TW,Ank BT,Murakami D,et al.Cytotoxic studies in human newborns:lessened allogenic cell-induced augmented cytotoxicity but strong lymphokine-activited cytotoxicity of cord mononudear cells.Cell Immunol,1986,103∶241
[3] Montagna D,Maccario R,Ugazio AG,et al.Natural cytotoxicity in the neonate:high levels of lymphokine activited killer (LAK) activity.Clin Exp Immunol,1988,71∶177
[4] Hoyle C,Bangs CD,Chang P,et al.Expansion of Philadelphia chromosome-negative CD3(+) CD56(+) cytotoxic cells from chronic myeloid Leukemia patients:in Vitro and in vivo efficacy in severe combined immunodeficiency disease mice.Blood,1998,92(9)∶3318
[5] 任 欢,邢淑贤,徐红薇,等.CIK的体外增殖及体内外杀瘤活性的实验研究.中国肿瘤生物治疗杂志.1999,6(1)∶17
(2000年1月10日收稿)
微信文章
关注百拇
评论几句
搜索更多
|