喉癌组织及其引流淋巴结中巨噬细胞表达与转移的关系
李巍 辛丁 郭丽娟
摘 要 目的：观察喉癌组织及其引流淋巴结中巨噬细胞(Mphi)表达与转移的关系。方法： 采用免疫组化卵白素-生物素过氧化酶复合物技术(ABC法)，对60例喉癌患者的癌组织及其 引流淋巴结石蜡切片中Mphi数目及形态进行检测。结果：未发生颈淋巴结转移的喉癌组织及 其引流淋巴结中Mphi数目明显多于转移者(P〈0.01);且Mphi数目与临床分期有关,即随着病变范围的扩大,Mphi数目呈减少趋势.Mphi形态在未转移组中以多突形和梭形居多,在转检测对了解喉癌患者机体免疫状态、预测转移及评估喉癌预后有一定义。
关键词：巨噬细胞 喉癌 淋巴结
近年来的研究发现：肿瘤内浸润的巨噬细胞(Mphi)数目可以部分代表机体对肿瘤的免疫 反应能力，且与肿瘤转移有关[1,2]，故探讨Mphi在喉癌组织及其引流淋巴结中的数目与 形态，对于了解喉癌患者的机体免疫状态，预测转移及评估喉癌预后都有重要意义，并为临 床合理实施颈廓清术提供理论依据。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 标本制备
所有石蜡切片标本均来自1995～1998年间在我科确诊为喉鳞状细胞癌并行喉切除伴颈廓清术的患者，共60例。其中病理证实有颈淋 巴结转移(N+组)30例，无颈淋巴结转移(N0组)30例。所有病例均为声门上型，参考UICC198 7年TNM分期标准，其中T16例，T217例，T311例，T426例。
1.2 试剂
抗巨噬细胞单克隆抗体(CD68)、生物素化抗兔鼠IgG及辣根过氧化物酶标记的卵白素均购 自DAKO公司(丹麦)。
1.3 方法
石蜡切片，厚度5μm，常规脱蜡，梯度酒精水化，3%过氧化氢甲醇溶液固定(除去内源 酶)，PBS洗涤，室温下5%小鼠血清保护20分钟，加CD68单抗4℃过夜，次日取出，加生物素 化抗鼠IgG，37℃二氧化碳孵箱内反应60分钟，加辣根过氧化物酶标记的卵白素置37℃，反 应60分钟，加DAB底物显色室温避光20分钟，苏木精复染，中间每一步均经PBS洗3次，每次5 分钟，梯度酒精脱水，二甲苯透明，封片、检查，在高倍镜下随机取10个视野，计数每个视 野内Mphi数，求其平均值，并计数100个Mphi中小圆形细胞数及计算其百分率。
, 百拇医药
2 结果
2.1 转移组与未转移组喉癌组织中Mphi数目的表达(表1)
表1 转移组与未转移组喉癌组织中Mphi数目的比较
分组
例数
X±s
P
转移组
30
4.0±2.1
〈0.01
未转移组
, http://www.100md.com
30
10.1±3.2
结果显示未转移组Mphi数目明显多于转移组，两者差异非常显著(P<0.01)；在光学显微 镜下见Mphi大多位于癌巢周围的间质中，在肿瘤坏死区亦可见到少量Mphi。
2.2 喉癌组织中Mphi数目与喉癌分期的关系(表2)
表2 喉癌组织中Mphi数目与喉癌分期的关系
分组
例数
X±s
P
T1
, 百拇医药
6
11.5±4.3
—
T2
17
9.1±3.5
<0.01
T3
11
6.6±2.9
<0.01
T4
, 百拇医药
26
4.3±2.4
<0.01
经方差分析，癌组织内Mphi数目从T1到T4期呈逐渐下降趋势(F="56.12)；各组间差异均非" 常显著(P<0.01)，即随着肿瘤侵犯范围的扩大，喉癌组织内浸润的Mphi数目减少。
2.3 转移与未转移淋巴结中Mphi数目的表达(表3)
表3 转移与未转移淋巴结中Mphi数目的比较
分组
例数
X±s
P
, http://www.100md.com
转移组
30
5.0±2.4
〈0.01
未转移组
30
10.8±3.4
结果显示：喉癌患者颈部肿大淋巴结内Mphi数目与转移有关，未转移组中Mphi数目明显 多于转移组，两者差异非常显著(P<0.01)。光学显微镜下形态学观察：未转移组中Mphi胞体 较大的居多，且形态多样，梭形和多突形多见，小圆形细胞百分率仅占26.4±3.6；转移组 中Mphi胞体小的居多，且形态规则，小圆形细胞多见，百分率达54.2±6.2。
3 讨论
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巨噬细胞(Mphi)主要来自循环血液中的单核细胞，具有一定程度的向肿瘤细胞的趋化能 力。目前，在动物及人类肿瘤组织中均发现有不同程度的Mphi存在，因而它被认为是机体抗 肿瘤免疫的有效成分之一[3～5]。本实验应用免疫组化ABC法首次对喉癌患者癌组织及颈 部肿大淋巴结石蜡切片中Mphi数目进行检测，结果在癌组织中，转移组(N+组)与未转移组(N0组)癌组织局部均有不同程度的Mphi存在，而N0组Mphi数目明显多于N+组；提示癌组织局 部存在的Mphi数目多少与转移有关，未转移组中Mphi数目多，转移组中少，这与Lapis[1] 通过动物实验所得研究结果一致，他认为肿瘤内浸润的Mphi数目可以部分地代表机体对肿瘤 的免疫反应能力。本实验还发现癌组织局部浸润的Mphi数目与喉癌临床分期有关，从T1期到T4期，随着病变范围的扩大，局部浸润的Mphi有减少趋势，说明Mphi数目与喉癌发展相关。 Russell通过动物实验也得到类似结果；在人类乳腺肿瘤及恶性淋巴瘤中浸润的Mphi数目随 着肿瘤病变范围的扩大而减少的报道亦见于文献[6，7]。因此，肿瘤局部浸润Mphi数目多 少与肿瘤的发展、转移密切相关，检测Mphi数目可以了解肿瘤患者机体免疫状态。在淋巴结 中，未转移组淋巴结内Mphi数目明显多于转移淋巴结，且未转移组中Mphi胞体较大，形态不 规则，以多突形和梭形居多；转移组内Mphi胞体较小，形态规则，以小圆形居多。William 发现：Mphi吞噬能力与细胞直径有关，随着细胞变大其吞噬活性逐渐增强；还有许多学者通 过实验证实当Mphi被激活后，形态由静止时的小圆形变为较大的多突形或梭形[8，9]。结果提示：未转移淋巴结内Mphi不仅数目多，而且多处于功能活跃状态 。转移淋巴结内Mphi不仅数目少，而且多处于功能静止状态，故未转移喉癌患者颈部肿大淋 巴结内尚存在着免疫活性细胞，具有抗肿瘤免疫潜能，适当保存这种淋巴结可能有利于提高 喉癌患者的抗肿瘤免疫功能，有利于预后。本实验结果提示临床应合理实施颈廓清术。
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本文课题受卫生部科研中标基金资助
作者单位：李巍 白求恩医科大学第二临床学院耳鼻喉科(长春市 130041)
辛丁 白求恩医科大学第二临床学院耳鼻喉科(长春市 130041)
郭丽娟 白求恩医科大学第二临床学院耳鼻喉科(长春市 130041)
参考文献
[1]Lapis K,Zalatnai A,Tiamar F,et al. Quantitative evaluation of Lysozyme and CD68- Positive Kupffer cells in diethylni- trosamine- induced hepatocellular carcinomas in monkeys. Carcinogenesis,1995;16(12):3083～ 5
, 百拇医药
[2]Quinn Jm,MIGee Jo,Athanason NA. Human tumor- associated macrophages differentiate into osteoclastic bone- resorbing cells. J Pathol,1988;184(1):31～ 4
[3]Bucana CD,Fabra A,Sanchez R,et al. Different Patterns of macrophage infiltration into allogeneic- murine and xenogeneic- human neoplasms growing in nude mice. Am J Pathol,1992;141(5):1225～ 36
[4]Kerrebijn JD,Balm AJ,Meeuwis CA,et al. Macrophage and dendritic cell infiltration in head and neck squamous cell carcinoma;an immunohistochemical study. Cancer Immunol Immumother,1994;38(1):31～ 7
, 百拇医药
[5]Owen MR,Sherratt JA,Pattern formation and spatiotemporal irregularity in a model for macrophage- tumor interactions. J Theor Biol,1997;189(1):63～ 80
[6]Visscher DW,Tabaczka P,Long D,et al.Clinicopathologic analysis of macrophage infiltrates in breast carcinoma. Pathol Res Pract,1995;191(11):1133～ 9
[7]Hermann M,Niemitz C,Marafioti T,et al. Reduced phagocytosis of apoptotic cells in malignant lymphoma. Int J Cancer,1998;75(5):675～ 9
[8]于一,郭艳茹,孟繁菁,等.巨噬细胞在激活过程中形态和功能的改变.解剖学杂志,1988;11(2):85～ 8
[9]Wu HH,Tao LC,Cramer HM. Vimentin- positivie spider- shaped Kupffer cells. A new clue to cytologic diagnosis of primary and metastatic hepatocellular carcinoma by fine needle aspiration biopsy. Am J Clin Pathol,1996;106(4):517～ 21, 百拇医药
摘 要 目的：观察喉癌组织及其引流淋巴结中巨噬细胞(Mphi)表达与转移的关系。方法： 采用免疫组化卵白素-生物素过氧化酶复合物技术(ABC法)，对60例喉癌患者的癌组织及其 引流淋巴结石蜡切片中Mphi数目及形态进行检测。结果：未发生颈淋巴结转移的喉癌组织及 其引流淋巴结中Mphi数目明显多于转移者(P〈0.01);且Mphi数目与临床分期有关,即随着病变范围的扩大,Mphi数目呈减少趋势.Mphi形态在未转移组中以多突形和梭形居多,在转检测对了解喉癌患者机体免疫状态、预测转移及评估喉癌预后有一定义。
关键词：巨噬细胞 喉癌 淋巴结
近年来的研究发现：肿瘤内浸润的巨噬细胞(Mphi)数目可以部分代表机体对肿瘤的免疫 反应能力，且与肿瘤转移有关[1,2]，故探讨Mphi在喉癌组织及其引流淋巴结中的数目与 形态，对于了解喉癌患者的机体免疫状态，预测转移及评估喉癌预后都有重要意义，并为临 床合理实施颈廓清术提供理论依据。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 标本制备
所有石蜡切片标本均来自1995～1998年间在我科确诊为喉鳞状细胞癌并行喉切除伴颈廓清术的患者，共60例。其中病理证实有颈淋 巴结转移(N+组)30例，无颈淋巴结转移(N0组)30例。所有病例均为声门上型，参考UICC198 7年TNM分期标准，其中T16例，T217例，T311例，T426例。
1.2 试剂
抗巨噬细胞单克隆抗体(CD68)、生物素化抗兔鼠IgG及辣根过氧化物酶标记的卵白素均购 自DAKO公司(丹麦)。
1.3 方法
石蜡切片，厚度5μm，常规脱蜡，梯度酒精水化，3%过氧化氢甲醇溶液固定(除去内源 酶)，PBS洗涤，室温下5%小鼠血清保护20分钟，加CD68单抗4℃过夜，次日取出，加生物素 化抗鼠IgG，37℃二氧化碳孵箱内反应60分钟，加辣根过氧化物酶标记的卵白素置37℃，反 应60分钟，加DAB底物显色室温避光20分钟，苏木精复染，中间每一步均经PBS洗3次，每次5 分钟，梯度酒精脱水，二甲苯透明，封片、检查，在高倍镜下随机取10个视野，计数每个视 野内Mphi数，求其平均值，并计数100个Mphi中小圆形细胞数及计算其百分率。
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2 结果
2.1 转移组与未转移组喉癌组织中Mphi数目的表达(表1)
表1 转移组与未转移组喉癌组织中Mphi数目的比较
分组
例数
X±s
P
转移组
30
4.0±2.1
〈0.01
未转移组
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30
10.1±3.2
结果显示未转移组Mphi数目明显多于转移组，两者差异非常显著(P<0.01)；在光学显微 镜下见Mphi大多位于癌巢周围的间质中，在肿瘤坏死区亦可见到少量Mphi。
2.2 喉癌组织中Mphi数目与喉癌分期的关系(表2)
表2 喉癌组织中Mphi数目与喉癌分期的关系
分组
例数
X±s
P
T1
, 百拇医药
6
11.5±4.3
—
T2
17
9.1±3.5
<0.01
T3
11
6.6±2.9
<0.01
T4
, 百拇医药
26
4.3±2.4
<0.01
经方差分析，癌组织内Mphi数目从T1到T4期呈逐渐下降趋势(F="56.12)；各组间差异均非" 常显著(P<0.01)，即随着肿瘤侵犯范围的扩大，喉癌组织内浸润的Mphi数目减少。
2.3 转移与未转移淋巴结中Mphi数目的表达(表3)
表3 转移与未转移淋巴结中Mphi数目的比较
分组
例数
X±s
P
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转移组
30
5.0±2.4
〈0.01
未转移组
30
10.8±3.4
结果显示：喉癌患者颈部肿大淋巴结内Mphi数目与转移有关，未转移组中Mphi数目明显 多于转移组，两者差异非常显著(P<0.01)。光学显微镜下形态学观察：未转移组中Mphi胞体 较大的居多，且形态多样，梭形和多突形多见，小圆形细胞百分率仅占26.4±3.6；转移组 中Mphi胞体小的居多，且形态规则，小圆形细胞多见，百分率达54.2±6.2。
3 讨论
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巨噬细胞(Mphi)主要来自循环血液中的单核细胞，具有一定程度的向肿瘤细胞的趋化能 力。目前，在动物及人类肿瘤组织中均发现有不同程度的Mphi存在，因而它被认为是机体抗 肿瘤免疫的有效成分之一[3～5]。本实验应用免疫组化ABC法首次对喉癌患者癌组织及颈 部肿大淋巴结石蜡切片中Mphi数目进行检测，结果在癌组织中，转移组(N+组)与未转移组(N0组)癌组织局部均有不同程度的Mphi存在，而N0组Mphi数目明显多于N+组；提示癌组织局 部存在的Mphi数目多少与转移有关，未转移组中Mphi数目多，转移组中少，这与Lapis[1] 通过动物实验所得研究结果一致，他认为肿瘤内浸润的Mphi数目可以部分地代表机体对肿瘤 的免疫反应能力。本实验还发现癌组织局部浸润的Mphi数目与喉癌临床分期有关，从T1期到T4期，随着病变范围的扩大，局部浸润的Mphi有减少趋势，说明Mphi数目与喉癌发展相关。 Russell通过动物实验也得到类似结果；在人类乳腺肿瘤及恶性淋巴瘤中浸润的Mphi数目随 着肿瘤病变范围的扩大而减少的报道亦见于文献[6，7]。因此，肿瘤局部浸润Mphi数目多 少与肿瘤的发展、转移密切相关，检测Mphi数目可以了解肿瘤患者机体免疫状态。在淋巴结 中，未转移组淋巴结内Mphi数目明显多于转移淋巴结，且未转移组中Mphi胞体较大，形态不 规则，以多突形和梭形居多；转移组内Mphi胞体较小，形态规则，以小圆形居多。William 发现：Mphi吞噬能力与细胞直径有关，随着细胞变大其吞噬活性逐渐增强；还有许多学者通 过实验证实当Mphi被激活后，形态由静止时的小圆形变为较大的多突形或梭形[8，9]。结果提示：未转移淋巴结内Mphi不仅数目多，而且多处于功能活跃状态 。转移淋巴结内Mphi不仅数目少，而且多处于功能静止状态，故未转移喉癌患者颈部肿大淋 巴结内尚存在着免疫活性细胞，具有抗肿瘤免疫潜能，适当保存这种淋巴结可能有利于提高 喉癌患者的抗肿瘤免疫功能，有利于预后。本实验结果提示临床应合理实施颈廓清术。
, http://www.100md.com
本文课题受卫生部科研中标基金资助
作者单位：李巍 白求恩医科大学第二临床学院耳鼻喉科(长春市 130041)
辛丁 白求恩医科大学第二临床学院耳鼻喉科(长春市 130041)
郭丽娟 白求恩医科大学第二临床学院耳鼻喉科(长春市 130041)
参考文献
[1]Lapis K,Zalatnai A,Tiamar F,et al. Quantitative evaluation of Lysozyme and CD68- Positive Kupffer cells in diethylni- trosamine- induced hepatocellular carcinomas in monkeys. Carcinogenesis,1995;16(12):3083～ 5
, 百拇医药
[2]Quinn Jm,MIGee Jo,Athanason NA. Human tumor- associated macrophages differentiate into osteoclastic bone- resorbing cells. J Pathol,1988;184(1):31～ 4
[3]Bucana CD,Fabra A,Sanchez R,et al. Different Patterns of macrophage infiltration into allogeneic- murine and xenogeneic- human neoplasms growing in nude mice. Am J Pathol,1992;141(5):1225～ 36
[4]Kerrebijn JD,Balm AJ,Meeuwis CA,et al. Macrophage and dendritic cell infiltration in head and neck squamous cell carcinoma;an immunohistochemical study. Cancer Immunol Immumother,1994;38(1):31～ 7
, 百拇医药
[5]Owen MR,Sherratt JA,Pattern formation and spatiotemporal irregularity in a model for macrophage- tumor interactions. J Theor Biol,1997;189(1):63～ 80
[6]Visscher DW,Tabaczka P,Long D,et al.Clinicopathologic analysis of macrophage infiltrates in breast carcinoma. Pathol Res Pract,1995;191(11):1133～ 9
[7]Hermann M,Niemitz C,Marafioti T,et al. Reduced phagocytosis of apoptotic cells in malignant lymphoma. Int J Cancer,1998;75(5):675～ 9
[8]于一,郭艳茹,孟繁菁,等.巨噬细胞在激活过程中形态和功能的改变.解剖学杂志,1988;11(2):85～ 8
[9]Wu HH,Tao LC,Cramer HM. Vimentin- positivie spider- shaped Kupffer cells. A new clue to cytologic diagnosis of primary and metastatic hepatocellular carcinoma by fine needle aspiration biopsy. Am J Clin Pathol,1996;106(4):517～ 21, 百拇医药