糖尿病患者血清一些细胞因子，C肽和胰岛素变化
作者：刘静 王青
单位：刘静(甘肃省人民医院糖尿病科, 甘肃 兰州 730000 )；王青(兰州解放军473医院特诊科, 甘肃 兰州 730000)
关键词：干扰素；白细胞介素2；白细胞介素6；肿瘤坏死因子；C肽；胰岛素；Ⅰ型糖尿病
第四军医大学学报000648 摘要: 目的 探讨血清干扰素(INF-γ)、白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-α)在Ⅰ型糖尿病患者发病中的作用. 方法 运用放射免疫技术测定 27例Ⅰ型糖尿病患者和19例年龄和性别相匹配的健康志愿者空腹及餐后2 h血清INF-γ，IL-2，IL-6，TNF-α，C肽 (C-P)、胰岛素(Ins)的水平. 结果 对照组与糖尿病组空腹及餐后2 h INF-γ，IL-2，IL-6，TNF-α的水平相比较均无显著性差异. 与对照组相比糖尿病组空腹INF-γ，IL-2 的水平均有不同程度的升高(1.99±0.63 ) ×103 Iu.L-1,(8.82±2.58 )μg.L-1(P<0.01 ), IL-6, TNF-α的水平均有不同程度的降低(0.62±0.26 )μg.L-1,(1.01±0.29 )μg .L-1 (P<0.01 ). 病程延长可引起INF-γ，IL-2，IL-6，TNF-α水平的变化，TNF-α水平在病程 1 a后开始升高(1.27±0.25)μg .L-1；IL-6水平在病程3 a后开始升高(0.86±0.19) μg.L-1; INF-γ，IL-2水平在病程 3 a后开始降低(1.72±0.62)×103 Iu.L-1(7.12±1.63)μg.L-1. 血糖(BG)的变化与INF-γ，IL-2，IL-6，TNF-α均无相关性(P均>0.05)；C-P, Ins的降低与IL-6，TNF-α的降低呈正相关 ； 与INF-γ，IL-2的升高呈负相关(P均<0.05). 结论 血清INF-γ，IL-2，IL-6，TNF-α的变化与Ⅰ型糖尿病的发生发展有一定关系.
, 百拇医药
中图号：R587 文献标识码：A
文章编号：1000-2790(2000)06-S0119-03
The alterations of cytokines, C-peptide and insulin in patients with diabetes mellitus
LIU Jing
(Department of Diabetes, Gansu Provincial Hospital)
WANG Qing
(Department of Special Clinic,473 Hospital of Chinese PLA,Lanzhou 730000)
, 百拇医药
Abstract:AIM To determine whether interferon -γ( INF-γ)，interleukin-2 ( IL-2)，interleukin-6(IL-6)，tumor necrosis factor alpha (TNF-α) could have a role in the development of type Ⅰ diabetes mellitus (DM). METHODS Serum INF-γ，IL-2，IL-6，TNF-α，C-peptide (C-P) and insulin (Ins) levels were measured by immunoradiometric assay in 27 patients with type Ⅰ DM (15 males and 12 females, aged 5～28 years), with 19 age-and sex-matched healthy subjects as controls. RESULTS Serum INF-γ，IL-2，IL-6，TNF-α levels between controls and diabetic groups had no statistic difference in fasting and postprandial. Serum INF-γ，IL-2 levels were higher in patients with type Ⅰ DM than in controls (1.99±0.63) ×103 Iu.L-1,(8.82±2.58) μg.L-1 (P<0.01 ). Serum IL-6，TNF-α levels were lower in patients with type Ⅰ DM than in controls (0.62±0.26 )μg.L-1 (1.01±0.29 )μg .L-1 (P<0.01). With the prolongation of disease duration INF-γ，IL-2，IL-6，TNF-α levels were progressively changed. After 1-year duration, TNF-α levels were increased in Type Ⅰ DM (1.27±0.25) μg .L-1. After 3-year duration , IL-6 levels began to ascend (0.86±0.19) μg.L-1 and INF-γ，while IL-2 levels began to descend in patients with Type Ⅰ-DM (1.72±0.62)×103 Iu.L-1,(7.12±1.63)μg.L-1. No correlation was found between the levels of INF-γ， IL-2，IL-6，TNF-α and blood glucose values in patients with Type Ⅰ DM (P>0.05 for all ). Serum C-P，Ins levels were lower in patients with Type Ⅰ DM than in controls. There was a significant correlation between C-P， Ins and INF-γ，IL-2， IL-6，TNF-α levels in patients with Type Ⅰ DM (P<0.05 for all ). CONCLUSION Serum levels of INF-γ，IL-2， IL-6，TNF-α were changed in patients with type Ⅰ DM. It is possible that INF-γ， lL-2，IL-6，TNF-α influence autoimmunity leading to the specific destruction of pancreatic islet B cells.
, 百拇医药
Keywords:interferon-γ； interleukin-2； interleukin-6； c-peptide； insulin； tumor necrosis factor alpha； patients with type Ⅰ DM
0 引言
Ⅰ型糖尿病胰岛β细胞的病理损伤过程实际上是自体免疫性的炎症反应. Ⅰ型糖尿病的发生与细胞因子关系的研究表明，细胞因子参与了Ⅰ型糖尿病自体免疫发病机制和胰岛β细胞损害. 但亦有证据表明摄入外源性细胞因子后能保护胰岛β细胞的功能和预防糖尿病的发生. 我们对Ⅰ型糖尿病患者进行了血清γ-干扰素(INF-γ)、白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子(TNF-α)的测定，旨在探讨上述细胞因子在Ⅰ型糖尿病发病中的作用及其临床意义. 1 对象和方法
1.1 对象 据WHO糖尿病诊断标准，从本院专科门诊及外院选择了Ⅰ型糖尿病患者共27(男15，女12)例. 年龄5 ～ 28(平均18.6)岁. 病程1 mo ～ 7 a, 其中，1 a 以内的11例，1 ～ 3 a的8例，3 a以上的8例. 27例患者均采用胰岛素治疗. 在受检期间无感染、酮症酸中毒等急性并发症. 正常对照组19(男11，女8)例，年龄6 ～ 29(平均 19.7)岁，体检健康，受检期间6 mo内无急慢性疾病史，亦无其他自身免疫性疾病或遗传病家族史.
, 百拇医药
1. 2 方法 全部受检者均在检测当日清晨空腹和进食100 g 面粉制作的馒头餐后2 h, 分别采静脉血7 ～ 8 mL，其中1 mL血立即送检测定血糖(葡萄糖氧化酶法). 其余标本低温离心后取血清按实验程序分装置于-30℃冰箱冻存备测. INF-γ，IL-2，IL-6，TNF-α，C-肽(C-P)和胰岛素( Ins )均用RIA测定. IL-2，TNF-α放免药盒由北京东亚免疫技术研究所提供. IL-6放免药盒由北方生物技术研究所提供. INF-γ放免药盒由比利时Biosonrce Europe S.A公司提供. C-P， Ins 放免药盒由华西糖尿病科技开发研究所提供. 检测仪为微电脑全自动γ计数仪.
统计学处理: 实验数据均以均数±标准差(±s)表示，并采用t检验进行统计学分析，两指标相互关系用直线相关分析.
2 结果
2.1 糖尿病组血清细胞因子水平 糖尿病组空腹和进餐后2 h INF-γ，IL-2，IL-6，TNF-α水平与正常对照组比有明显变化(Tab 1). 而正常对照组和糖尿病组空腹及餐后2 h INF-γ，IL-2，IL-6，TNF-α水平, 各自进行比较表明，各组值均无显著性差异.
, 百拇医药
表 1 糖尿病组血清INF-γ，IL-2，IL-6，TNF-α测定值
Tab 1 The values of INF-γ，IL-2，IL-6，TNF-α measured in diabetic group(±s) Group
n
t/h
ρ(C-P)/
(μg .L-1)
Ins/
mU.L-1
INF-γ/
, http://www.100md.com
×103 Uu.L-1
ρ(IL-2) /
(μg .L-1)
ρ( IL-6 )/
(μg .L-1)
ρ(TNF-α)/
(μg .L-1)
Control
19
0
, 百拇医药
1.22±0.18
10.24±3.83
1.59±0.38
5.12±0.86
0.92±0.18
1.42±0.14
1.37±0.13
2
2.52±0.23
28.98±8.12
1.55±0.43
5.36±0.94
, 百拇医药
0.95±0.17
Diabetics
27
0
0.84±0.22b
4.65±2.17b
1.99±0.63b
8.82±2.58b
0.62±0.26b
1.01±0.29b
, http://www.100md.com
1.02±0.26b
2
0.99±0.34b
9.91±4.36b
1.98±0.68b
8.79±2.51b
0.63±0.24b
bP<0.01 vs control.2.2 不同病程糖尿病患者血清细胞因子水平 TNF-α在病程<1 a时降低明显， 在病程1 a后略有升高，比INF-γ,IL-2,IL-6的水平变化早；IL-6在病程<1 a时明显降低,在病程3 a后开始升高; INF-γ,IL-2在病程<1 a时明显升高，在病程3 a后有下降(Tab 2).
, 百拇医药
2.3 C-P,Ins,BG与INF-γ，IL-2，IL-6，TNF-α的关系 IL-6，TNF-α水平下降，C-P，Ins水平亦下降，IL-6，TNF-α水平的下降与C-P，Ins水平的下降呈正相关；INF-γ，IL-2水平升高，而C-P，Ins的水平下降，INF-γ，IL-2水平的升高与C-P，Ins 水平的下降呈负相关；BG水平的变化与INF-γ，IL-2，IL-6，TNF-α水平的变化均无明显相关(Tab 3).
表 2 不同病程糖尿病患者血清INF-γ，IL-2，IL-6，TNF-α的变化
Tab 2 Changes of different course of diseases INF-γ，IL-2，IL-6，TNF-α in type 1 diabetic patients(±s) Group
n
, http://www.100md.com INF-γ/×103 Uu.L-1
ρ(IL-2) /(μg .L-1)
ρ( IL-6 )/(μg .L-1)
ρ(TNF-α)/(μg .L-1)
Control
19
1.59±0.38
5.12±0.86
0.92±0.18
, 百拇医药
1.42±0.14
Diabetics
27
1.99±0.63b
8.82±2.58b
0.62±0.26b
1.01±0.29b
<1 a
11
2.11±0.67b
9.22±2.51b
, http://www.100md.com
0.48±0.23b
0.98±0.23b
1～3 a
8
1.98±0.51b
8.99±2.58b
0.59±0.22b
1.27±0.25a
>3 a
8
1.72±0.62a
, 百拇医药
7.12 ±1.63a
0.86±0.19a
1.23±0.26a
aP<0.05，bP<0.01 vs control.3 讨论
本结果表明1型糖尿病患者血清INF-γ，IL-2 水平明显升高；IL-6, TNF-α水平明显降低；提示1型糖尿病患者细胞免疫功能异常. 在正常情况下INF-γ，IL-2，IL-6，TNF-α单独或与其他细胞因子结合，与内分泌激素，神经递质及某些效应物质等组成重要的网络系统[1]，广泛而精细地调节着胰岛β细胞的分化、生长和分泌功能. 在Ⅰ型糖尿病患者存在着免疫调节缺陷或遗传变异[2,3]，当受到某种外界因素的刺激时，诱发上述细胞因子发生平衡紊乱. 这种异常可影响调节胰岛β细胞功能网络系统的活动，胰岛β细胞的功能受到破坏，胰岛素分泌受到抑制而促使Ⅰ型糖尿病发生发展[4].
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表 3 C-P， Ins，BG 与INF-γ，IL-2，IL-6，TNF-α的相关性
Tab 3 Correlation among C-P， Ins，BG and INF-γ，IL-2，IL-6，TNF-α (r) Item
t/h
INF-γ
ρ(IL-2)
ρ( IL-6 )
ρ(TNF-α)
C-P
0
-0.415a
, 百拇医药
-0.452a
0.498a
0.568a
2
-0.413a
-0.497a
0.493a
0.583a
Ins
0
-0.448a
, http://www.100md.com
-0.571a
0.489a
0.582a
2
-0.421a
-0.511a
0.501a
0.579a
BG
0
0.275
, 百拇医药
0.247
0.301
0.289
2
0.261
0.257
0.287
0.302
a P<0.05. INF-γ具有强大的免疫调节作用，Ⅰ型糖尿病患者体内INF-γ分泌增高可影响淋巴B细胞增殖分化成为浆细胞，使免疫球蛋白增加，并使NK细胞增殖，加强和维持胰岛β细胞MHC Ⅱ抗原的异常表达，促发了自身免疫反应，使胰岛β细胞的功能遭到破坏[1]. 有研究证实在胰岛炎发生的部位测到INF-γ[5]. IL-2在免疫调节中起着重要的作用，在Ⅰ型糖尿病患者，IL-2水平升高，可直接作用与细胞毒T淋巴细胞；使B淋巴细胞增值、分化产生自身抗体；增加NK细胞的活性，引起自身组织损害[6]. 胰岛组织学显示，重组IL-2处理糖尿病鼠，其胰岛出现单个核细胞侵润的胰岛炎，胰岛β细胞被破坏，由纤维组织代替[7]. IL-6作用于B淋巴细胞的分化阶段，促进B淋巴细胞分泌免疫球蛋白. 在正常情况下，IL-6可以保护胰岛β细胞的功能，可以促进胰岛素的分泌来拮抗胰升血糖素的升高，参与维持血糖平衡的生理活动. 当Ⅰ型糖尿病患者体内IL-6分泌减少时，胰岛β细胞功能受损, 胰岛素分泌量减少. TNF-α主要由单核巨噬细胞产生，能促进或抑制T淋巴细胞和NK细胞的功能，调节机体的细胞免疫和体液免疫. Ⅰ型糖尿病患者体内TNF-α分泌受到抑制[2]. 有研究表明，在有糖尿病遗传倾向的小鼠，体内缺乏内源性的TNF-α，在给予外源性TNF-α 后，能调节自体免疫反应和预防糖尿病的发生[8]. Jacob等[9]观察发现在糖尿病鼠自体免疫疾病的发生发展与巨噬细胞产生 TNF-α 不足有关， 推测 TNF-α 可能对预防糖尿病的发生发展，保护胰岛β细胞的功能起到了重要的调节作用. 我们还观察到，随着病程延长，INF-γ，IL-2， IL-6，TNF-α水平均略有不同程度的变化，尤以TNF-α的变化为明显. 这可能与长期高血糖所引起的体内各种蛋白质糖基化. 特别是进行缓慢地、不可逆地形成高级糖基化终末产物(AGEP)有关[10], AGEP可被体内单核巨噬细胞表面AGEP受体识别而被吞噬. 这一过程可能使血清TNF-α水平增高. 在胰岛素治疗过程中，胰岛β细胞功能受到保护，有些受损的胰岛β细胞可发生逆转而恢复功能. 这一过程可能与TNF-α，IL-6水平的上升；IL-2，INF-γ水平的下降有关.
, 百拇医药
上述结果表明，Ⅰ型糖尿病患者 血清C-P，Ins水平越降低， IL-6，TNF-α水平越降低，而INF-γ，IL-2水平越升高，提示Ⅰ型糖尿病患者血清INF-γ，IL-6，TNF-α，IL-2水平的异常改变不仅能反映自体免疫反应的动态，同时也能反映胰岛β细胞的功能. INF-γ，IL-6，TNF-α，IL-2均参予了Ⅰ型糖尿病的发病过程. 其详细作用机制目前尚未明了，有待进一步研究.
作者简介：刘 静 (1955-)，女(汉族)，河北省保定市人. 硕士，副教授，副主任医师，糖尿病科主任. Tel.(0931)8281676
参考文献：
[1] Espersen GT, Mathiesen O, Grunnet N, Jensen S et al. Cytokine plasma levels and lymphocyte subsets in patient withnewly diagnosed insulin-dependent (type 1)diabetes mellitus before and following initial insulin treatment[J]. APMIS, 1997; 101(6):703-706.
, 百拇医药
[2] Thomas MP, Hemming P, Jens M et al. Monokine antagonism is reduced in patients with IDDM[J]. Diabetes, 1994； 43(10):1242-1247.
[3] Molvig， Bak L，Christensen P et al. Endotoxin-stimulated human monocyte secretion of interleukin-1, tumur necrosis factor alpha, and prostaglandin E2 shows stable interindividual difference[J]. Scand J Immunol, 1988; 27(6):705-716.
[4] Harrsion LC, Honeyman MC, De Aizpurua HJ et al. Inverse relation between humoral and cellular immunity to glutamic acid decarboxylase in subject at risk of insulin-dependent diabetes[J]. Lancet, 1993; 341(5):1365-1369.
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[5] Foulis AK, McGill M,Farquharson MA. Insulitis in type 1 (insulin-γ dependent)diabetes mellitus in man: Macrophages,lymphocytes,and interferon-γ containing cells[J]. J Pathol, 1991;165(2):97-103.
[6] Kroemer G, Wick G. The role of interleukin-2 in autoimmunity [J]. Immunol Today, 1989; 10(2):245-251.
[7] Kolb H, Zielasek J, Treichel U et al. Recombinant interleukin-2 enchanced spontaneous diabetes in BB rat[J]. Eur J Immunol, 1986; 16(2):209-212.
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[8] Seino H, Takahashi K, Satoh J et al. Prevention of autoimmune diabetes with lymphotoxin in NOD mice[J]. Diabetes, 1993; 42(3):398-404.
[9] Jacob CO, Sadakazu A, Michie SA et al. Prevention of diabetes in nonobese diabetic mice by tumor necrosis factor (TNF): Similarities between TNF-α and interleukin-1[J]. Proc Natl Acad Sci USA, 1992;87(6): 968-973.
[10] Ie J，Vilcek J. Tumor necrosis factor and interleukin-1：Cytokines with multiple overlapping biological activities[J]. Lab Invest, 1987; 56(3):234-248.
收稿日期：2000-03-01
修回日期：2000-03-20, 百拇医药
单位：刘静(甘肃省人民医院糖尿病科, 甘肃 兰州 730000 )；王青(兰州解放军473医院特诊科, 甘肃 兰州 730000)
关键词：干扰素；白细胞介素2；白细胞介素6；肿瘤坏死因子；C肽；胰岛素；Ⅰ型糖尿病
第四军医大学学报000648 摘要: 目的 探讨血清干扰素(INF-γ)、白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-α)在Ⅰ型糖尿病患者发病中的作用. 方法 运用放射免疫技术测定 27例Ⅰ型糖尿病患者和19例年龄和性别相匹配的健康志愿者空腹及餐后2 h血清INF-γ，IL-2，IL-6，TNF-α，C肽 (C-P)、胰岛素(Ins)的水平. 结果 对照组与糖尿病组空腹及餐后2 h INF-γ，IL-2，IL-6，TNF-α的水平相比较均无显著性差异. 与对照组相比糖尿病组空腹INF-γ，IL-2 的水平均有不同程度的升高(1.99±0.63 ) ×103 Iu.L-1,(8.82±2.58 )μg.L-1(P<0.01 ), IL-6, TNF-α的水平均有不同程度的降低(0.62±0.26 )μg.L-1,(1.01±0.29 )μg .L-1 (P<0.01 ). 病程延长可引起INF-γ，IL-2，IL-6，TNF-α水平的变化，TNF-α水平在病程 1 a后开始升高(1.27±0.25)μg .L-1；IL-6水平在病程3 a后开始升高(0.86±0.19) μg.L-1; INF-γ，IL-2水平在病程 3 a后开始降低(1.72±0.62)×103 Iu.L-1(7.12±1.63)μg.L-1. 血糖(BG)的变化与INF-γ，IL-2，IL-6，TNF-α均无相关性(P均>0.05)；C-P, Ins的降低与IL-6，TNF-α的降低呈正相关 ； 与INF-γ，IL-2的升高呈负相关(P均<0.05). 结论 血清INF-γ，IL-2，IL-6，TNF-α的变化与Ⅰ型糖尿病的发生发展有一定关系.
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中图号：R587 文献标识码：A
文章编号：1000-2790(2000)06-S0119-03
The alterations of cytokines, C-peptide and insulin in patients with diabetes mellitus
LIU Jing
(Department of Diabetes, Gansu Provincial Hospital)
WANG Qing
(Department of Special Clinic,473 Hospital of Chinese PLA,Lanzhou 730000)
, 百拇医药
Abstract:AIM To determine whether interferon -γ( INF-γ)，interleukin-2 ( IL-2)，interleukin-6(IL-6)，tumor necrosis factor alpha (TNF-α) could have a role in the development of type Ⅰ diabetes mellitus (DM). METHODS Serum INF-γ，IL-2，IL-6，TNF-α，C-peptide (C-P) and insulin (Ins) levels were measured by immunoradiometric assay in 27 patients with type Ⅰ DM (15 males and 12 females, aged 5～28 years), with 19 age-and sex-matched healthy subjects as controls. RESULTS Serum INF-γ，IL-2，IL-6，TNF-α levels between controls and diabetic groups had no statistic difference in fasting and postprandial. Serum INF-γ，IL-2 levels were higher in patients with type Ⅰ DM than in controls (1.99±0.63) ×103 Iu.L-1,(8.82±2.58) μg.L-1 (P<0.01 ). Serum IL-6，TNF-α levels were lower in patients with type Ⅰ DM than in controls (0.62±0.26 )μg.L-1 (1.01±0.29 )μg .L-1 (P<0.01). With the prolongation of disease duration INF-γ，IL-2，IL-6，TNF-α levels were progressively changed. After 1-year duration, TNF-α levels were increased in Type Ⅰ DM (1.27±0.25) μg .L-1. After 3-year duration , IL-6 levels began to ascend (0.86±0.19) μg.L-1 and INF-γ，while IL-2 levels began to descend in patients with Type Ⅰ-DM (1.72±0.62)×103 Iu.L-1,(7.12±1.63)μg.L-1. No correlation was found between the levels of INF-γ， IL-2，IL-6，TNF-α and blood glucose values in patients with Type Ⅰ DM (P>0.05 for all ). Serum C-P，Ins levels were lower in patients with Type Ⅰ DM than in controls. There was a significant correlation between C-P， Ins and INF-γ，IL-2， IL-6，TNF-α levels in patients with Type Ⅰ DM (P<0.05 for all ). CONCLUSION Serum levels of INF-γ，IL-2， IL-6，TNF-α were changed in patients with type Ⅰ DM. It is possible that INF-γ， lL-2，IL-6，TNF-α influence autoimmunity leading to the specific destruction of pancreatic islet B cells.
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Keywords:interferon-γ； interleukin-2； interleukin-6； c-peptide； insulin； tumor necrosis factor alpha； patients with type Ⅰ DM
0 引言
Ⅰ型糖尿病胰岛β细胞的病理损伤过程实际上是自体免疫性的炎症反应. Ⅰ型糖尿病的发生与细胞因子关系的研究表明，细胞因子参与了Ⅰ型糖尿病自体免疫发病机制和胰岛β细胞损害. 但亦有证据表明摄入外源性细胞因子后能保护胰岛β细胞的功能和预防糖尿病的发生. 我们对Ⅰ型糖尿病患者进行了血清γ-干扰素(INF-γ)、白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子(TNF-α)的测定，旨在探讨上述细胞因子在Ⅰ型糖尿病发病中的作用及其临床意义. 1 对象和方法
1.1 对象 据WHO糖尿病诊断标准，从本院专科门诊及外院选择了Ⅰ型糖尿病患者共27(男15，女12)例. 年龄5 ～ 28(平均18.6)岁. 病程1 mo ～ 7 a, 其中，1 a 以内的11例，1 ～ 3 a的8例，3 a以上的8例. 27例患者均采用胰岛素治疗. 在受检期间无感染、酮症酸中毒等急性并发症. 正常对照组19(男11，女8)例，年龄6 ～ 29(平均 19.7)岁，体检健康，受检期间6 mo内无急慢性疾病史，亦无其他自身免疫性疾病或遗传病家族史.
, 百拇医药
1. 2 方法 全部受检者均在检测当日清晨空腹和进食100 g 面粉制作的馒头餐后2 h, 分别采静脉血7 ～ 8 mL，其中1 mL血立即送检测定血糖(葡萄糖氧化酶法). 其余标本低温离心后取血清按实验程序分装置于-30℃冰箱冻存备测. INF-γ，IL-2，IL-6，TNF-α，C-肽(C-P)和胰岛素( Ins )均用RIA测定. IL-2，TNF-α放免药盒由北京东亚免疫技术研究所提供. IL-6放免药盒由北方生物技术研究所提供. INF-γ放免药盒由比利时Biosonrce Europe S.A公司提供. C-P， Ins 放免药盒由华西糖尿病科技开发研究所提供. 检测仪为微电脑全自动γ计数仪.
统计学处理: 实验数据均以均数±标准差(±s)表示，并采用t检验进行统计学分析，两指标相互关系用直线相关分析.
2 结果
2.1 糖尿病组血清细胞因子水平 糖尿病组空腹和进餐后2 h INF-γ，IL-2，IL-6，TNF-α水平与正常对照组比有明显变化(Tab 1). 而正常对照组和糖尿病组空腹及餐后2 h INF-γ，IL-2，IL-6，TNF-α水平, 各自进行比较表明，各组值均无显著性差异.
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表 1 糖尿病组血清INF-γ，IL-2，IL-6，TNF-α测定值
Tab 1 The values of INF-γ，IL-2，IL-6，TNF-α measured in diabetic group(±s) Group
n
t/h
ρ(C-P)/
(μg .L-1)
Ins/
mU.L-1
INF-γ/
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×103 Uu.L-1
ρ(IL-2) /
(μg .L-1)
ρ( IL-6 )/
(μg .L-1)
ρ(TNF-α)/
(μg .L-1)
Control
19
0
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1.22±0.18
10.24±3.83
1.59±0.38
5.12±0.86
0.92±0.18
1.42±0.14
1.37±0.13
2
2.52±0.23
28.98±8.12
1.55±0.43
5.36±0.94
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0.95±0.17
Diabetics
27
0
0.84±0.22b
4.65±2.17b
1.99±0.63b
8.82±2.58b
0.62±0.26b
1.01±0.29b
, http://www.100md.com
1.02±0.26b
2
0.99±0.34b
9.91±4.36b
1.98±0.68b
8.79±2.51b
0.63±0.24b
bP<0.01 vs control.2.2 不同病程糖尿病患者血清细胞因子水平 TNF-α在病程<1 a时降低明显， 在病程1 a后略有升高，比INF-γ,IL-2,IL-6的水平变化早；IL-6在病程<1 a时明显降低,在病程3 a后开始升高; INF-γ,IL-2在病程<1 a时明显升高，在病程3 a后有下降(Tab 2).
, 百拇医药
2.3 C-P,Ins,BG与INF-γ，IL-2，IL-6，TNF-α的关系 IL-6，TNF-α水平下降，C-P，Ins水平亦下降，IL-6，TNF-α水平的下降与C-P，Ins水平的下降呈正相关；INF-γ，IL-2水平升高，而C-P，Ins的水平下降，INF-γ，IL-2水平的升高与C-P，Ins 水平的下降呈负相关；BG水平的变化与INF-γ，IL-2，IL-6，TNF-α水平的变化均无明显相关(Tab 3).
表 2 不同病程糖尿病患者血清INF-γ，IL-2，IL-6，TNF-α的变化
Tab 2 Changes of different course of diseases INF-γ，IL-2，IL-6，TNF-α in type 1 diabetic patients(±s) Group
n
, http://www.100md.com INF-γ/×103 Uu.L-1
ρ(IL-2) /(μg .L-1)
ρ( IL-6 )/(μg .L-1)
ρ(TNF-α)/(μg .L-1)
Control
19
1.59±0.38
5.12±0.86
0.92±0.18
, 百拇医药
1.42±0.14
Diabetics
27
1.99±0.63b
8.82±2.58b
0.62±0.26b
1.01±0.29b
<1 a
11
2.11±0.67b
9.22±2.51b
, http://www.100md.com
0.48±0.23b
0.98±0.23b
1～3 a
8
1.98±0.51b
8.99±2.58b
0.59±0.22b
1.27±0.25a
>3 a
8
1.72±0.62a
, 百拇医药
7.12 ±1.63a
0.86±0.19a
1.23±0.26a
aP<0.05，bP<0.01 vs control.3 讨论
本结果表明1型糖尿病患者血清INF-γ，IL-2 水平明显升高；IL-6, TNF-α水平明显降低；提示1型糖尿病患者细胞免疫功能异常. 在正常情况下INF-γ，IL-2，IL-6，TNF-α单独或与其他细胞因子结合，与内分泌激素，神经递质及某些效应物质等组成重要的网络系统[1]，广泛而精细地调节着胰岛β细胞的分化、生长和分泌功能. 在Ⅰ型糖尿病患者存在着免疫调节缺陷或遗传变异[2,3]，当受到某种外界因素的刺激时，诱发上述细胞因子发生平衡紊乱. 这种异常可影响调节胰岛β细胞功能网络系统的活动，胰岛β细胞的功能受到破坏，胰岛素分泌受到抑制而促使Ⅰ型糖尿病发生发展[4].
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表 3 C-P， Ins，BG 与INF-γ，IL-2，IL-6，TNF-α的相关性
Tab 3 Correlation among C-P， Ins，BG and INF-γ，IL-2，IL-6，TNF-α (r) Item
t/h
INF-γ
ρ(IL-2)
ρ( IL-6 )
ρ(TNF-α)
C-P
0
-0.415a
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-0.452a
0.498a
0.568a
2
-0.413a
-0.497a
0.493a
0.583a
Ins
0
-0.448a
, http://www.100md.com
-0.571a
0.489a
0.582a
2
-0.421a
-0.511a
0.501a
0.579a
BG
0
0.275
, 百拇医药
0.247
0.301
0.289
2
0.261
0.257
0.287
0.302
a P<0.05. INF-γ具有强大的免疫调节作用，Ⅰ型糖尿病患者体内INF-γ分泌增高可影响淋巴B细胞增殖分化成为浆细胞，使免疫球蛋白增加，并使NK细胞增殖，加强和维持胰岛β细胞MHC Ⅱ抗原的异常表达，促发了自身免疫反应，使胰岛β细胞的功能遭到破坏[1]. 有研究证实在胰岛炎发生的部位测到INF-γ[5]. IL-2在免疫调节中起着重要的作用，在Ⅰ型糖尿病患者，IL-2水平升高，可直接作用与细胞毒T淋巴细胞；使B淋巴细胞增值、分化产生自身抗体；增加NK细胞的活性，引起自身组织损害[6]. 胰岛组织学显示，重组IL-2处理糖尿病鼠，其胰岛出现单个核细胞侵润的胰岛炎，胰岛β细胞被破坏，由纤维组织代替[7]. IL-6作用于B淋巴细胞的分化阶段，促进B淋巴细胞分泌免疫球蛋白. 在正常情况下，IL-6可以保护胰岛β细胞的功能，可以促进胰岛素的分泌来拮抗胰升血糖素的升高，参与维持血糖平衡的生理活动. 当Ⅰ型糖尿病患者体内IL-6分泌减少时，胰岛β细胞功能受损, 胰岛素分泌量减少. TNF-α主要由单核巨噬细胞产生，能促进或抑制T淋巴细胞和NK细胞的功能，调节机体的细胞免疫和体液免疫. Ⅰ型糖尿病患者体内TNF-α分泌受到抑制[2]. 有研究表明，在有糖尿病遗传倾向的小鼠，体内缺乏内源性的TNF-α，在给予外源性TNF-α 后，能调节自体免疫反应和预防糖尿病的发生[8]. Jacob等[9]观察发现在糖尿病鼠自体免疫疾病的发生发展与巨噬细胞产生 TNF-α 不足有关， 推测 TNF-α 可能对预防糖尿病的发生发展，保护胰岛β细胞的功能起到了重要的调节作用. 我们还观察到，随着病程延长，INF-γ，IL-2， IL-6，TNF-α水平均略有不同程度的变化，尤以TNF-α的变化为明显. 这可能与长期高血糖所引起的体内各种蛋白质糖基化. 特别是进行缓慢地、不可逆地形成高级糖基化终末产物(AGEP)有关[10], AGEP可被体内单核巨噬细胞表面AGEP受体识别而被吞噬. 这一过程可能使血清TNF-α水平增高. 在胰岛素治疗过程中，胰岛β细胞功能受到保护，有些受损的胰岛β细胞可发生逆转而恢复功能. 这一过程可能与TNF-α，IL-6水平的上升；IL-2，INF-γ水平的下降有关.
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上述结果表明，Ⅰ型糖尿病患者 血清C-P，Ins水平越降低， IL-6，TNF-α水平越降低，而INF-γ，IL-2水平越升高，提示Ⅰ型糖尿病患者血清INF-γ，IL-6，TNF-α，IL-2水平的异常改变不仅能反映自体免疫反应的动态，同时也能反映胰岛β细胞的功能. INF-γ，IL-6，TNF-α，IL-2均参予了Ⅰ型糖尿病的发病过程. 其详细作用机制目前尚未明了，有待进一步研究.
作者简介：刘 静 (1955-)，女(汉族)，河北省保定市人. 硕士，副教授，副主任医师，糖尿病科主任. Tel.(0931)8281676
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[4] Harrsion LC, Honeyman MC, De Aizpurua HJ et al. Inverse relation between humoral and cellular immunity to glutamic acid decarboxylase in subject at risk of insulin-dependent diabetes[J]. Lancet, 1993; 341(5):1365-1369.
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收稿日期：2000-03-01
修回日期：2000-03-20, 百拇医药