双歧杆菌防治鼠伤寒沙门菌感染的实验研究
程 茜 刘作义
摘 要 目的：以小鼠为模型，研究双歧杆菌在体内对鼠伤寒沙门菌(Salmonella typhimurium， STM)感染的防治作用。方法：分别用大剂量悉复欢、B.bifidum、生理盐水(NS)给三组小鼠灌胃，再用STM攻击，观察小鼠经上述不同处理前后肠道双歧杆菌数量和STM攻击后粪便STM培养阳性率，阳性标本STM分离值及小鼠STM感染率；同时用双歧杆菌、悉复欢、双歧杆菌加悉复欢分别治疗STM感染的小鼠，观察并比较疗效。结果：1.大剂量悉复欢使用可使小鼠肠道内双歧杆菌明显降低，而双歧杆菌灌胃则肠道双歧杆菌明显增多。双歧杆菌灌胃的小鼠粪便STM培养阳性率、阳性粪便STM值明显低于用大剂量悉复欢和NS的小鼠，小鼠STM感染发病率也明显较低。2.对于STM感染鼠，双歧杆菌与悉复欢联合治疗效果最好。结论：1.双歧杆菌在体内对STM有拮抗作用；能预防和减少STM感染发生；2.在STM感染时，先用悉复欢，再用双歧杆菌可以达到预期疗效，双歧杆菌对鼠伤寒沙门菌感染有辅助治疗作用。
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关键词：双歧杆菌 鼠伤寒沙门菌
鼠伤寒沙门菌(Salmonella typhimurium STM)感染是一个世界性卫生问题，尤其在发展中国家，STM是小儿腹泻病的重要病原，也是医院内感染的主要原因之一[1，2]。近年来，新生儿室STM感染暴发流行以及免疫低下者中STM严重感染仍然屡见不鲜[3，4]。但其发病机理未完全阐明，防治其感染一直是棘手的问题。双歧杆菌(Bifidobacterium)是革兰氏阳性无芽孢厌氧杆菌，是人和某些哺乳动物肠道内主要正常菌群。有研究[5，6]表明：一些肠道病原致病与双歧杆菌关系密切，临床亦观察到含双歧杆菌的微生态制剂对防治肠道感染有效。但双歧杆菌对STM感染防治的研究少见报道。故本研究欲从小鼠动物模型研究双歧杆菌对STM的防治作用。研究结果将为STM感染的防治提供新思路。
1 材料与方法
, 百拇医药 1.1 动物 NIH小鼠由重庆医科大学实验动物中心提供。符合国家一级动物标准。
1.2 菌种 Bifidobacterium bifidum(B.bifidum菌种号851101)，由重庆医科大学检验系临床微生物教研室提供。STM(菌种50115，购自卫生部中国药品生物制品检定所)。
1.3 培养基 改良BL培养基[7]、BS平板[7]，SS培养基、三糖铁培养基(购自浙江省军区后勤部卫生防疫检验所)。
1.4 沙门菌诊断血清 购自卫生部兰州生物制品研究所。
1.5 悉复欢 广州白云山制药厂生产。按人与动物等效剂量折算公式[8]计算，算出量为小鼠治疗用量2.5mg/10g.d；扩大10倍为灌胃量。
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1.6 预防作用
1.6.1 随机抽取40只小鼠作STM带菌情况调查。
1.6.2 动物分组及处理 100只小鼠随机分成4组，每组25只。A组为空白对照组，自由进食和水7天；B组为生理盐水对照组，用0.9%NS灌胃，0.5ml/只.次，Bid×7天；C组为悉复欢组，用悉复欢灌胃，25mg/10g.d Bid×7天；D组为双歧杆菌组，先用悉复欢灌胃，25mg/10g.d，Bid×3天，再用B.bifidum灌胃0.5ml/只.次，Bid×4天(相当于7.5×107个双歧杆菌)。STM攻击：上述各组小鼠分别用STM菌液灌胃，0.5ml/只，1次(相当于5.0×107)。粪便标本的采集：各组分别于处理前后收集每只鼠粪便做双歧杆菌培养、计数。STM攻击后1、2、3天收集每只鼠粪便做STM培养、计数。
, 百拇医药
1.6.3 双歧杆菌培养方法，见文献[7]。STM培养方法，见文献[9]。
1.6.4 细菌计数 每克大便含双歧杆菌及STM量(CFU/ml)=菌落数×47×相应稀释度，以均值加减标准差(X±S)取Lg对数值表示。
1.6.5 记录STM攻击后各组小鼠发病的临床表现，凡有体重减轻、毛发竖立、食量下降、活动减少、反应不灵活和/或大便性状改变者，均算发病。
1.7 治疗作用
1.7.1 动物分组及处理 将40只雄性有鼠伤寒沙门菌感染的NIH小鼠随机分为4组，每组各10只。各组于治疗开始前分别做粪便鼠伤寒沙门菌培养计数。Ⅰ组为对照组，自由进食进水7天。Ⅱ组为悉复欢治疗组。用悉复欢灌胃2.5mg/10g.d，Bid×7天。Ⅲ组为双歧杆菌治疗组，用双歧杆菌液灌胃Bid×7天。Ⅳ组为悉复欢+双歧杆菌治疗组，先用悉复欢，2hr～3hr后再用B.bifidum灌胃Bid×7天。
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1.7.2 于治疗后1、3、5、7天收集小鼠粪便做鼠伤寒沙门菌分离培养、鉴定和计数。同时记录小鼠临床表现。
1.8 统计学处理 采用t检验、配对t检验，单因素方差分析，两因素方差分析，组间比较用Q检验。率的比较采用行×列表的X2检验。
2 结 果
2.1 预防作用
2.1.1 正常NIH小鼠肠道STM携带情况40只小鼠进行大便培养结果均未发现有STM生长，表明正常状态下，NIH小鼠肠道无STM携带。
2.1.2 各组小鼠处理前后肠道双歧杆菌变化，见表1。
表1 处理前后各组小鼠粪便双歧杆菌变化
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(CFU/g，以Lg表示)
空白对照组
n=25
NS对照组
n=25
悉复欢组
n=25
双歧杆菌组
n=25
处理前
7.33±0.40
7.29±0.28
, 百拇医药 7.15±0.68
7.37±0.30
处理后
7.29±0.32
7.14±0.20
4.22±1.05*
9.31±0.33*
注：表示P<0.001(配对t检验)
2.1.3 各组小鼠被STM攻击后不同时间培养阳性率，如表2所示。
表2 STM攻击后不同时间各组小鼠粪便STM培养阳性率(%)
, 百拇医药
空白对照组
NS对照组
悉复欢组
双歧杆菌组
X2值
P
(动物培养阳性数/实验动物数)
1天
60(15/25)
48(12/25)
100(25/25)a
12(3/25)aab
, 百拇医药
39.88
<0.001
2天
60(15/25)
68(17/25)
100(23/23)a
20(5/25)aab
32.96
<0.001
3天
60(15/25)
, 百拇医药 66.7(16/24)
100(19/19)a
28(7/25)aab
23.99
<0.001
注：与对照组相比较，a表示P<0.005，aa表示P<0.025，与悉复欢组比较，b表示P<0.005。
2.1.4 各组小鼠被STM攻击后不同时间STM分离情况，如表3所示。
表3 STM攻击后双歧杆菌组与悉复欢组粪便STM值比较(CFU/g，以Lg表示)
空白对照组
, 百拇医药
n=25
NS对照组
n=25
悉复欢组
n=25
双歧杆菌组
n=25
F值
P
1GD
8.35±0.47
8.51±0.45
9.16±0.27a
, 百拇医药
7.93±0.36ab
21.52
<0.001
2天
8.59±0.41
8.60±0.49
9.36±0.34a
7.92±0.44ab
25.89
<0.001
3天
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8.29±0.32
8.48±0.36
9.82±0.29a
7.81±0.42ab
88.91
<0.001
注：与对照组比较，a表示P<0.05，与悉复欢组比较b表示P<0.01。
2.1.5 各组被STM攻击后不同时间发病率，从表4可见各组均有发病，以悉复欢组最为明显共死亡6只(6/25，达24%)。双歧杆菌组发病率最低。
表4 STM攻击后不同时间各组发病率(%)
, 百拇医药
空白对照组
NS对照组
悉复欢组
双歧杆菌组
X2值
P
(发病动物数/实验动物数)
1天
60(15/25)
36(9/25)
68(17/25)aa
4(1/25)aab
, 百拇医药
25.45
<0.001
2天
52(13/25)
56(14/25)
87(20/23)a
16(4/25)aab
24.40
<0.001
3天
52(13/25)
, 百拇医药 66.7(16/24)
84.2(16/19)a
20(5/25)aab
20.19
<0.001
注：与对照组比较，a表示P<0.05，aa表示P<0.025，与悉复欢组比较，b表示P<0.005。
2.2 治疗作用
2.2.1 各组治疗前粪STM分离值相差不显著(P>0.05)。
2.2.2 治疗后不同时间小鼠粪便鼠伤寒沙门菌分离情况，见表5。
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表5 STM感染小鼠治疗后不同时间粪便STM分离情况(CFU/g，以Lg表示)
对照组
n=10
悉复欢治疗组
n=10
双歧杆菌治疗组
n=10
悉复欢+双歧杆菌治疗组
n=10
F值
P
1天
, 百拇医药
9.45±0.24a
8.41±0.36
9.33±0.26b
8.43±0.43
40.47
<0.001
3天
9.20±0.27
7.24±0.31
8.30±0.27b
7.34±0.32
, 百拇医药
76.64
<0.001
5天
8.62±0.18
7.34±0.30
8.23±0.23
6.21±0.28
179.01
<0.001
7天
8.50±0.15
6.18±0.28
, 百拇医药
8.04±0.28
5.09±0.47
164.47
<0.001
注：组间比较用Q检验。a表示治疗第一天对照组与双歧杆菌治疗组比较，P>0.05，b表示治疗第三天悉复欢治疗组与悉复欢+双歧杆菌治疗组比较，P>0.05，其余P值均小于0.05。
2.2.3 各组治疗后小鼠粪便鼠伤寒沙门菌培养转阴率，见表6。
表6 各组治疗后不同时间小鼠粪便STM转阴率(%)
对照组
悉复欢治疗组
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双歧杆菌治疗组
悉复欢+双歧杆菌治疗组
X2值
P
1天
0
0
0
0
0
>0.05
3天
10
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0
0
20
0.39
>0.05
5天
10
30
20
20
1.24
>0.05
7天
, 百拇医药 10
20
20
40
2.71
>0.05
注：各组N为10。
3 讨 论
STM感染是婴幼儿腹泻和医院内感染的重要原因。我们用小鼠模型体内研究证明，用悉复欢3天清除或破坏肠道双歧杆菌，再加续用B.bifidum液灌胃，小鼠粪便中双歧杆菌数量明显增多(7.37±0.30升至9.31±0.33)，当STM攻击后小鼠粪便STM培养阳性率、阳性大便分离STM值、STM感染发病率明显低于对照组，而用悉复欢7天彻底破坏小鼠肠道正常菌群，则小鼠粪便双歧杆菌数量明显减少(7.15±0.68降至4.22±1.05)，STM攻击后小鼠的STM值、STM培养阳性率、发病率则明显高于对照组。说明在本实验条件下，双歧杆菌的增加可以使大便STM培养阳性率降低，STM定植减少，STM感染发病率下降。提示在体内双歧杆菌有拮抗STM的作用，可以预防或减少STM感染发生。
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双歧杆菌作为正常菌群中的优势菌，在肠道与其它正常菌群一起构成了阻止外来菌入侵的定植抗力。关于双歧杆菌对肠道病原体生物拮抗作用的机理，目前认为有以下几种可能：(1)在肠粘膜表面形成一层生物菌膜，抑制致病菌粘附到肠粘膜上，起到占位性保护作用；(2)代谢过程中产生有机酸如乙酸、乳酸等，降低肠道pH和氧化还原电势(Eh)，抑制致病菌繁殖；(3)调节和协同其他肠道菌群，促进肠蠕动，使致病菌粘附到肠粘膜上的机会减少；(4)产生抗菌物质，直接杀伤致病菌；(5)减少或弱化肠粘膜上皮细胞上致病菌和细菌毒素受体，使其致病作用受阻。
从双歧杆菌对鼠伤寒沙门菌治疗作用的实验可以看出，悉复欢和双歧杆菌对鼠伤寒沙门菌都有抑制作用，但悉复欢与双歧杆菌联合使用抑制鼠伤寒沙门菌的作用更强。并且随着治疗时间的延长，鼠伤寒沙门菌菌量值逐渐减少(治疗前与治疗后第7天比较P<0.05)。不同治疗显示，悉复欢组在第5天时比双歧杆菌组粪便鼠伤寒沙门菌转阴率高，第7天上则两组相似。悉复欢与双歧杆菌联合组粪便鼠伤寒沙门菌转阴率最高。这表明，悉复欢和双歧杆菌在治疗鼠伤寒沙门菌感染时有协同作用。同时，也可能说明，在致病菌已入侵的前提下，双歧杆菌更多是利用产酸降低pH、Eh，调整肠道菌群等作用来发挥生物拮抗作用，而占位性保护失去了效力。特别是治疗刚开始时，外源双歧杆菌要与鼠伤寒沙门菌竞争肠粘膜结合位点，代谢尚不够旺盛。而当抗生素使用先杀灭了鼠伤寒沙门菌，外源双歧杆菌的使用可以重新占据肠粘膜结合位点，并与其他肠道正常菌群一道，发挥拮抗致病菌的综合效应，使鼠伤寒沙门菌部分或全部被清除。因此，应该说双歧杆菌对鼠伤寒沙门菌感染的治疗作用是辅助作用。
, 百拇医药
作者单位：重庆医科大学儿童医院 400014
参考文献
1 From the centers for disease control and prevention. Multidrugresistant Salmonella serotype typhimurium United States. 1996. JAMA. 1997 May 21;277(19):1513
2 Threlfall EJ,Frost JA,et al.Increasing sectrum of resistance in multiresistant Salmonella typhimurium.Lancet,1996 Apr 13;347(9007):1053-1054
3 Kumar A,Nath G,Bhatia BD,et al.An outbreak of multidrug resistant salmonlla typhimurium in a nursery.Indiam Pediatr.1995 Aug;32(8):881-885
, 百拇医药
4 Solodovnikov Iup,Lytkina IN,Filatov NN,et al.Salmonellosis in Moscow:its epidemiolgical characteristics and the provention tasks Zh Mikrobil Epidemiol Immunobiol.1996 Jul-Aug;(4);46-49
5 Saavedra JM,Bauman NA,Oung I,et al.Feeding of Bifidobacterium bifidum and Streptococcus thermophilus to infants in hospital for prevention diarrhea and shedding of rotavirus.Lancet.1994;344:1046-1049
6 戴立人，龚丽君.急性痢疾肠道菌群变化及双歧杆菌活菌制剂疗效观察.中国微生态学杂志.1991；3(1)：34-36
7 陈敏聪，王文凤.厌氧菌及其感染.上海医科大学出版社.1992.第二版
8 药理学实验.人民, 百拇医药
摘 要 目的：以小鼠为模型，研究双歧杆菌在体内对鼠伤寒沙门菌(Salmonella typhimurium， STM)感染的防治作用。方法：分别用大剂量悉复欢、B.bifidum、生理盐水(NS)给三组小鼠灌胃，再用STM攻击，观察小鼠经上述不同处理前后肠道双歧杆菌数量和STM攻击后粪便STM培养阳性率，阳性标本STM分离值及小鼠STM感染率；同时用双歧杆菌、悉复欢、双歧杆菌加悉复欢分别治疗STM感染的小鼠，观察并比较疗效。结果：1.大剂量悉复欢使用可使小鼠肠道内双歧杆菌明显降低，而双歧杆菌灌胃则肠道双歧杆菌明显增多。双歧杆菌灌胃的小鼠粪便STM培养阳性率、阳性粪便STM值明显低于用大剂量悉复欢和NS的小鼠，小鼠STM感染发病率也明显较低。2.对于STM感染鼠，双歧杆菌与悉复欢联合治疗效果最好。结论：1.双歧杆菌在体内对STM有拮抗作用；能预防和减少STM感染发生；2.在STM感染时，先用悉复欢，再用双歧杆菌可以达到预期疗效，双歧杆菌对鼠伤寒沙门菌感染有辅助治疗作用。
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关键词：双歧杆菌 鼠伤寒沙门菌
鼠伤寒沙门菌(Salmonella typhimurium STM)感染是一个世界性卫生问题，尤其在发展中国家，STM是小儿腹泻病的重要病原，也是医院内感染的主要原因之一[1，2]。近年来，新生儿室STM感染暴发流行以及免疫低下者中STM严重感染仍然屡见不鲜[3，4]。但其发病机理未完全阐明，防治其感染一直是棘手的问题。双歧杆菌(Bifidobacterium)是革兰氏阳性无芽孢厌氧杆菌，是人和某些哺乳动物肠道内主要正常菌群。有研究[5，6]表明：一些肠道病原致病与双歧杆菌关系密切，临床亦观察到含双歧杆菌的微生态制剂对防治肠道感染有效。但双歧杆菌对STM感染防治的研究少见报道。故本研究欲从小鼠动物模型研究双歧杆菌对STM的防治作用。研究结果将为STM感染的防治提供新思路。
1 材料与方法
, 百拇医药 1.1 动物 NIH小鼠由重庆医科大学实验动物中心提供。符合国家一级动物标准。
1.2 菌种 Bifidobacterium bifidum(B.bifidum菌种号851101)，由重庆医科大学检验系临床微生物教研室提供。STM(菌种50115，购自卫生部中国药品生物制品检定所)。
1.3 培养基 改良BL培养基[7]、BS平板[7]，SS培养基、三糖铁培养基(购自浙江省军区后勤部卫生防疫检验所)。
1.4 沙门菌诊断血清 购自卫生部兰州生物制品研究所。
1.5 悉复欢 广州白云山制药厂生产。按人与动物等效剂量折算公式[8]计算，算出量为小鼠治疗用量2.5mg/10g.d；扩大10倍为灌胃量。
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1.6 预防作用
1.6.1 随机抽取40只小鼠作STM带菌情况调查。
1.6.2 动物分组及处理 100只小鼠随机分成4组，每组25只。A组为空白对照组，自由进食和水7天；B组为生理盐水对照组，用0.9%NS灌胃，0.5ml/只.次，Bid×7天；C组为悉复欢组，用悉复欢灌胃，25mg/10g.d Bid×7天；D组为双歧杆菌组，先用悉复欢灌胃，25mg/10g.d，Bid×3天，再用B.bifidum灌胃0.5ml/只.次，Bid×4天(相当于7.5×107个双歧杆菌)。STM攻击：上述各组小鼠分别用STM菌液灌胃，0.5ml/只，1次(相当于5.0×107)。粪便标本的采集：各组分别于处理前后收集每只鼠粪便做双歧杆菌培养、计数。STM攻击后1、2、3天收集每只鼠粪便做STM培养、计数。
, 百拇医药
1.6.3 双歧杆菌培养方法，见文献[7]。STM培养方法，见文献[9]。
1.6.4 细菌计数 每克大便含双歧杆菌及STM量(CFU/ml)=菌落数×47×相应稀释度，以均值加减标准差(X±S)取Lg对数值表示。
1.6.5 记录STM攻击后各组小鼠发病的临床表现，凡有体重减轻、毛发竖立、食量下降、活动减少、反应不灵活和/或大便性状改变者，均算发病。
1.7 治疗作用
1.7.1 动物分组及处理 将40只雄性有鼠伤寒沙门菌感染的NIH小鼠随机分为4组，每组各10只。各组于治疗开始前分别做粪便鼠伤寒沙门菌培养计数。Ⅰ组为对照组，自由进食进水7天。Ⅱ组为悉复欢治疗组。用悉复欢灌胃2.5mg/10g.d，Bid×7天。Ⅲ组为双歧杆菌治疗组，用双歧杆菌液灌胃Bid×7天。Ⅳ组为悉复欢+双歧杆菌治疗组，先用悉复欢，2hr～3hr后再用B.bifidum灌胃Bid×7天。
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1.7.2 于治疗后1、3、5、7天收集小鼠粪便做鼠伤寒沙门菌分离培养、鉴定和计数。同时记录小鼠临床表现。
1.8 统计学处理 采用t检验、配对t检验，单因素方差分析，两因素方差分析，组间比较用Q检验。率的比较采用行×列表的X2检验。
2 结 果
2.1 预防作用
2.1.1 正常NIH小鼠肠道STM携带情况40只小鼠进行大便培养结果均未发现有STM生长，表明正常状态下，NIH小鼠肠道无STM携带。
2.1.2 各组小鼠处理前后肠道双歧杆菌变化，见表1。
表1 处理前后各组小鼠粪便双歧杆菌变化
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(CFU/g，以Lg表示)
空白对照组
n=25
NS对照组
n=25
悉复欢组
n=25
双歧杆菌组
n=25
处理前
7.33±0.40
7.29±0.28
, 百拇医药 7.15±0.68
7.37±0.30
处理后
7.29±0.32
7.14±0.20
4.22±1.05*
9.31±0.33*
注：表示P<0.001(配对t检验)
2.1.3 各组小鼠被STM攻击后不同时间培养阳性率，如表2所示。
表2 STM攻击后不同时间各组小鼠粪便STM培养阳性率(%)
, 百拇医药
空白对照组
NS对照组
悉复欢组
双歧杆菌组
X2值
P
(动物培养阳性数/实验动物数)
1天
60(15/25)
48(12/25)
100(25/25)a
12(3/25)aab
, 百拇医药
39.88
<0.001
2天
60(15/25)
68(17/25)
100(23/23)a
20(5/25)aab
32.96
<0.001
3天
60(15/25)
, 百拇医药 66.7(16/24)
100(19/19)a
28(7/25)aab
23.99
<0.001
注：与对照组相比较，a表示P<0.005，aa表示P<0.025，与悉复欢组比较，b表示P<0.005。
2.1.4 各组小鼠被STM攻击后不同时间STM分离情况，如表3所示。
表3 STM攻击后双歧杆菌组与悉复欢组粪便STM值比较(CFU/g，以Lg表示)
空白对照组
, 百拇医药
n=25
NS对照组
n=25
悉复欢组
n=25
双歧杆菌组
n=25
F值
P
1GD
8.35±0.47
8.51±0.45
9.16±0.27a
, 百拇医药
7.93±0.36ab
21.52
<0.001
2天
8.59±0.41
8.60±0.49
9.36±0.34a
7.92±0.44ab
25.89
<0.001
3天
, http://www.100md.com
8.29±0.32
8.48±0.36
9.82±0.29a
7.81±0.42ab
88.91
<0.001
注：与对照组比较，a表示P<0.05，与悉复欢组比较b表示P<0.01。
2.1.5 各组被STM攻击后不同时间发病率，从表4可见各组均有发病，以悉复欢组最为明显共死亡6只(6/25，达24%)。双歧杆菌组发病率最低。
表4 STM攻击后不同时间各组发病率(%)
, 百拇医药
空白对照组
NS对照组
悉复欢组
双歧杆菌组
X2值
P
(发病动物数/实验动物数)
1天
60(15/25)
36(9/25)
68(17/25)aa
4(1/25)aab
, 百拇医药
25.45
<0.001
2天
52(13/25)
56(14/25)
87(20/23)a
16(4/25)aab
24.40
<0.001
3天
52(13/25)
, 百拇医药 66.7(16/24)
84.2(16/19)a
20(5/25)aab
20.19
<0.001
注：与对照组比较，a表示P<0.05，aa表示P<0.025，与悉复欢组比较，b表示P<0.005。
2.2 治疗作用
2.2.1 各组治疗前粪STM分离值相差不显著(P>0.05)。
2.2.2 治疗后不同时间小鼠粪便鼠伤寒沙门菌分离情况，见表5。
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表5 STM感染小鼠治疗后不同时间粪便STM分离情况(CFU/g，以Lg表示)
对照组
n=10
悉复欢治疗组
n=10
双歧杆菌治疗组
n=10
悉复欢+双歧杆菌治疗组
n=10
F值
P
1天
, 百拇医药
9.45±0.24a
8.41±0.36
9.33±0.26b
8.43±0.43
40.47
<0.001
3天
9.20±0.27
7.24±0.31
8.30±0.27b
7.34±0.32
, 百拇医药
76.64
<0.001
5天
8.62±0.18
7.34±0.30
8.23±0.23
6.21±0.28
179.01
<0.001
7天
8.50±0.15
6.18±0.28
, 百拇医药
8.04±0.28
5.09±0.47
164.47
<0.001
注：组间比较用Q检验。a表示治疗第一天对照组与双歧杆菌治疗组比较，P>0.05，b表示治疗第三天悉复欢治疗组与悉复欢+双歧杆菌治疗组比较，P>0.05，其余P值均小于0.05。
2.2.3 各组治疗后小鼠粪便鼠伤寒沙门菌培养转阴率，见表6。
表6 各组治疗后不同时间小鼠粪便STM转阴率(%)
对照组
悉复欢治疗组
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双歧杆菌治疗组
悉复欢+双歧杆菌治疗组
X2值
P
1天
0
0
0
0
0
>0.05
3天
10
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0
0
20
0.39
>0.05
5天
10
30
20
20
1.24
>0.05
7天
, 百拇医药 10
20
20
40
2.71
>0.05
注：各组N为10。
3 讨 论
STM感染是婴幼儿腹泻和医院内感染的重要原因。我们用小鼠模型体内研究证明，用悉复欢3天清除或破坏肠道双歧杆菌，再加续用B.bifidum液灌胃，小鼠粪便中双歧杆菌数量明显增多(7.37±0.30升至9.31±0.33)，当STM攻击后小鼠粪便STM培养阳性率、阳性大便分离STM值、STM感染发病率明显低于对照组，而用悉复欢7天彻底破坏小鼠肠道正常菌群，则小鼠粪便双歧杆菌数量明显减少(7.15±0.68降至4.22±1.05)，STM攻击后小鼠的STM值、STM培养阳性率、发病率则明显高于对照组。说明在本实验条件下，双歧杆菌的增加可以使大便STM培养阳性率降低，STM定植减少，STM感染发病率下降。提示在体内双歧杆菌有拮抗STM的作用，可以预防或减少STM感染发生。
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双歧杆菌作为正常菌群中的优势菌，在肠道与其它正常菌群一起构成了阻止外来菌入侵的定植抗力。关于双歧杆菌对肠道病原体生物拮抗作用的机理，目前认为有以下几种可能：(1)在肠粘膜表面形成一层生物菌膜，抑制致病菌粘附到肠粘膜上，起到占位性保护作用；(2)代谢过程中产生有机酸如乙酸、乳酸等，降低肠道pH和氧化还原电势(Eh)，抑制致病菌繁殖；(3)调节和协同其他肠道菌群，促进肠蠕动，使致病菌粘附到肠粘膜上的机会减少；(4)产生抗菌物质，直接杀伤致病菌；(5)减少或弱化肠粘膜上皮细胞上致病菌和细菌毒素受体，使其致病作用受阻。
从双歧杆菌对鼠伤寒沙门菌治疗作用的实验可以看出，悉复欢和双歧杆菌对鼠伤寒沙门菌都有抑制作用，但悉复欢与双歧杆菌联合使用抑制鼠伤寒沙门菌的作用更强。并且随着治疗时间的延长，鼠伤寒沙门菌菌量值逐渐减少(治疗前与治疗后第7天比较P<0.05)。不同治疗显示，悉复欢组在第5天时比双歧杆菌组粪便鼠伤寒沙门菌转阴率高，第7天上则两组相似。悉复欢与双歧杆菌联合组粪便鼠伤寒沙门菌转阴率最高。这表明，悉复欢和双歧杆菌在治疗鼠伤寒沙门菌感染时有协同作用。同时，也可能说明，在致病菌已入侵的前提下，双歧杆菌更多是利用产酸降低pH、Eh，调整肠道菌群等作用来发挥生物拮抗作用，而占位性保护失去了效力。特别是治疗刚开始时，外源双歧杆菌要与鼠伤寒沙门菌竞争肠粘膜结合位点，代谢尚不够旺盛。而当抗生素使用先杀灭了鼠伤寒沙门菌，外源双歧杆菌的使用可以重新占据肠粘膜结合位点，并与其他肠道正常菌群一道，发挥拮抗致病菌的综合效应，使鼠伤寒沙门菌部分或全部被清除。因此，应该说双歧杆菌对鼠伤寒沙门菌感染的治疗作用是辅助作用。
, 百拇医药
作者单位：重庆医科大学儿童医院 400014
参考文献
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3 Kumar A,Nath G,Bhatia BD,et al.An outbreak of multidrug resistant salmonlla typhimurium in a nursery.Indiam Pediatr.1995 Aug;32(8):881-885
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5 Saavedra JM,Bauman NA,Oung I,et al.Feeding of Bifidobacterium bifidum and Streptococcus thermophilus to infants in hospital for prevention diarrhea and shedding of rotavirus.Lancet.1994;344:1046-1049
6 戴立人，龚丽君.急性痢疾肠道菌群变化及双歧杆菌活菌制剂疗效观察.中国微生态学杂志.1991；3(1)：34-36
7 陈敏聪，王文凤.厌氧菌及其感染.上海医科大学出版社.1992.第二版
8 药理学实验.人民, 百拇医药