外敷中药对骨折愈合微血管重建的影响
张建国 陈良金 蒋文跃
摘 要：目的 探讨中药对骨折愈合微血管重建的影响。方法 家兔15只，双侧胫骨制作骨折模型，左侧外敷中药，右侧未用中药为对照组。术后10、20、30天分别处死动物，将中国墨汁注射入腹主动脉，采用组织切片法，观察微血管变化，以评价中药对骨折愈合的影响。结果 中药可促进血管扩张、血管再生，增加骨折区的血供，实验组血管重建快于对照组。结论 中药可加快骨折部位血管演化过程，并保证骨折愈合过程中的血液供应，以促进骨折愈合。
关键词：骨折 血管 外敷中药
中药对骨折愈合具有促进作用[1]。为进一步阐明中药对骨折愈合治疗之机理，有必要探讨中药对骨折愈合局部血运重建的影响，为临床骨科应用提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 动物模型制备 家兔15只，雌雄不限，体重2.5～3kg。戊巴比妥钠(30mg/kg)静脉麻醉，无菌下操作。双侧胫骨内侧切开皮肤、浅筋膜，到达骨膜，于胫骨中段用电钻钻成上、下各两孔，孔直径为2mm，孔间距为1mm。清洗创面，分层缝合软组织及皮肤，制备成骨缺损型骨折模型。
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1.2 分组 于术后第3日，左侧外敷中药，每2日1次，为实验组；右侧不敷中药，为对照组。持续用药，于术后10、20、30天分别处死动物，每次5只。
1.3 血管墨汁灌注切片法 解剖出处死之动物的腹主动脉，插管，生理盐水冲洗，灌注2%墨汁明胶液。甲醛固定7天，取双侧骨缺损区，软石蜡包埋，制作切片，片厚50μm、200μm。显微镜观察、照像。
1.4 中药 中药为自拟药方：乳香、没药、红花、血竭、三七、煅自然铜、赤芍、杜仲、续断、骨碎补、五加皮、煅狗骨、透骨草、当归、沉香、羌活、桂皮、白芷、栀子。将上述药物研成粉末，酒水各半，调成糊状，备用。
2 结果
术后第10天，对照组骨外膜增厚，骨缺损区内的新生血管出现，分布较广，但部分地方仍见未充盈处，说明此处新生血管生长较慢。实验组骨外膜增厚明显，出现丰富的新生血管，缺损区内血管充盈很好，血管互相吻合成网，分别与骨外膜血管、髓内血管吻合，使得缺损区内血管排列垂直于骨皮质，并使骨缺损区得到丰富的血液供应(图1～2)。
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术后20天，对照组血管增多、扩张，微血管互相吻合成网，缺损区内的血管分别与骨外膜、髓内以及周围的骨皮质内的血管沟通，建立血液循环。但实验组的血管则更为丰富，管径粗，数量多，密度高。血管排列仍然按骨缺损区的方向排列：垂直于骨皮质(图3～4)。
术后30天：对照组骨痂内血管开始变细，变稀疏，骨缺损区内的血管排列仍按缺损区的方向排列。在实验组，血管变的更细，更稀疏。尤其需要注意的是：骨缺损区内的血管排列由垂直于骨皮质变为平行于骨皮质。这是由于骨痂改建已十分成熟，哈佛氏管已建立，新生的血管走行在哈佛氏管内，故平行于骨皮质。这种新生的血管分布与正常骨皮质内的微血管分布较为接近。此时对照组微血管演化过程大约处于实验组20～30天之间，显示中药可使微血管演化提前，骨痂改建加快，从而促进骨折愈合(图5～6)。
图1 骨折第10天，实验组骨愈合微血管。P：骨膜，C：骨痂，CB ：骨皮质。200μm×20 图2 骨折第10天，对照组骨愈合微血管。P：骨膜，C：骨痂，CB：骨皮质。200μm×20 图3 骨折第20天，实验组骨愈合微血管。P：骨膜，C：骨痂，CD：骨皮质。200μm×20 图4 骨折第20天，对照组骨愈合微血管。P：骨膜，C：骨痂，CB：骨皮质。200μm×20 图5 骨折第30天，实验组骨愈合微血管。P：骨膜，CD：骨皮质。200μm×20 图6 骨折第30天，对照组骨愈合微血管。P：骨膜，C：骨痂，C：骨痂，CB：骨皮质。200μm×20
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3 讨论
祖国医学认为骨折后脉络必受损伤，而致经血瘀积不散，形成局部肿痛。采用活血化瘀理论，行气活血，通脉散瘀，消肿止痛，以利于骨折治疗[1]。因此，本研究按活血化瘀(乳香、没药、红花、血竭、三七、煅自然铜、赤芍)，止痛(沉香、羌活、桂枝、白芷、栀子)和接骨续筋(杜仲、续断、骨碎补、五加皮、煅狗骨、透骨草)之原则组方，进行骨折后外敷用药，观察到中药对骨折后微血管重建的规律。在骨折早期，促进新生血管生长、增多，管径变粗，加速骨折部位局部血液循环的重建；在晚期，随着骨痂改建，血管数量迅速减少，直径变小，并最终转为正常血管分布形态。从形态上证明了中药对骨折愈合微血管形成的促进和改善作用，进一步补充了中药对骨折愈合促进作用的资料。
活血化瘀、消肿止痛对损伤组织的作用机理：早期可控制和减缓炎症反应，增加吸收，从而减少充血、水肿，并修复组织及血管壁，降低致痛物质浓度；在晚期，可使毛细血管扩张，减轻毛细血管静脉段的压力，减少白细胞及其它有形成份的渗出[2]。此外，煅狗骨可通过促进血肿吸收，促进骨基质中胶元纤维的合成，促进骨细胞中的“酶活性”而促进骨折愈合[3]。而煅自然铜亦能影响胶元纤维合成中关键酶的活性，从而促进骨折愈合[4]。我们认为，中药对骨折愈合微血管重建的促进作用是通过两个方面进行的：一方面是直接刺激微血管生长；另一方面是通过组织、细胞、酶、分子等多层次促进骨折愈合，增加对营养物质的需要，增强对代谢产物的排出，间接刺激微血管重建，二者互相影响，互为因果。
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作者单位：张建国(三峡学院医学院，湖北 宜昌 443003)
陈良金(北京医科大学，北京 100083)
蒋文跃(北京医科大学，北京 100083)
参考文献：
[1]顾云伍，韩慧，尚天裕，等.中西医结合治疗骨折研究进展.中国骨伤，1993，6(1)：5.
[2]侯伟，马斌，胡兴山.损伤液化膜的研制及动物实验研究.中国中医骨伤科，1995，3(5)：1.
[3]林燕萍，王和鸣，陈奕权，等.煅狗骨对实验性骨折愈合作用的组织学和组织化学研究.中医骨伤科，1991，7(6)：4.
[4]王智兴.自然铜在骨折愈合过程中对总胶原、不溶性胶原、钙、磷和生物力学影响.中华外科杂志，1986，6(4)：305., 百拇医药
摘 要：目的 探讨中药对骨折愈合微血管重建的影响。方法 家兔15只，双侧胫骨制作骨折模型，左侧外敷中药，右侧未用中药为对照组。术后10、20、30天分别处死动物，将中国墨汁注射入腹主动脉，采用组织切片法，观察微血管变化，以评价中药对骨折愈合的影响。结果 中药可促进血管扩张、血管再生，增加骨折区的血供，实验组血管重建快于对照组。结论 中药可加快骨折部位血管演化过程，并保证骨折愈合过程中的血液供应，以促进骨折愈合。
关键词：骨折 血管 外敷中药
中药对骨折愈合具有促进作用[1]。为进一步阐明中药对骨折愈合治疗之机理，有必要探讨中药对骨折愈合局部血运重建的影响，为临床骨科应用提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 动物模型制备 家兔15只，雌雄不限，体重2.5～3kg。戊巴比妥钠(30mg/kg)静脉麻醉，无菌下操作。双侧胫骨内侧切开皮肤、浅筋膜，到达骨膜，于胫骨中段用电钻钻成上、下各两孔，孔直径为2mm，孔间距为1mm。清洗创面，分层缝合软组织及皮肤，制备成骨缺损型骨折模型。
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1.2 分组 于术后第3日，左侧外敷中药，每2日1次，为实验组；右侧不敷中药，为对照组。持续用药，于术后10、20、30天分别处死动物，每次5只。
1.3 血管墨汁灌注切片法 解剖出处死之动物的腹主动脉，插管，生理盐水冲洗，灌注2%墨汁明胶液。甲醛固定7天，取双侧骨缺损区，软石蜡包埋，制作切片，片厚50μm、200μm。显微镜观察、照像。
1.4 中药 中药为自拟药方：乳香、没药、红花、血竭、三七、煅自然铜、赤芍、杜仲、续断、骨碎补、五加皮、煅狗骨、透骨草、当归、沉香、羌活、桂皮、白芷、栀子。将上述药物研成粉末，酒水各半，调成糊状，备用。
2 结果
术后第10天，对照组骨外膜增厚，骨缺损区内的新生血管出现，分布较广，但部分地方仍见未充盈处，说明此处新生血管生长较慢。实验组骨外膜增厚明显，出现丰富的新生血管，缺损区内血管充盈很好，血管互相吻合成网，分别与骨外膜血管、髓内血管吻合，使得缺损区内血管排列垂直于骨皮质，并使骨缺损区得到丰富的血液供应(图1～2)。
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术后20天，对照组血管增多、扩张，微血管互相吻合成网，缺损区内的血管分别与骨外膜、髓内以及周围的骨皮质内的血管沟通，建立血液循环。但实验组的血管则更为丰富，管径粗，数量多，密度高。血管排列仍然按骨缺损区的方向排列：垂直于骨皮质(图3～4)。
术后30天：对照组骨痂内血管开始变细，变稀疏，骨缺损区内的血管排列仍按缺损区的方向排列。在实验组，血管变的更细，更稀疏。尤其需要注意的是：骨缺损区内的血管排列由垂直于骨皮质变为平行于骨皮质。这是由于骨痂改建已十分成熟，哈佛氏管已建立，新生的血管走行在哈佛氏管内，故平行于骨皮质。这种新生的血管分布与正常骨皮质内的微血管分布较为接近。此时对照组微血管演化过程大约处于实验组20～30天之间，显示中药可使微血管演化提前，骨痂改建加快，从而促进骨折愈合(图5～6)。
图1 骨折第10天，实验组骨愈合微血管。P：骨膜，C：骨痂，CB ：骨皮质。200μm×20 图2 骨折第10天，对照组骨愈合微血管。P：骨膜，C：骨痂，CB：骨皮质。200μm×20 图3 骨折第20天，实验组骨愈合微血管。P：骨膜，C：骨痂，CD：骨皮质。200μm×20 图4 骨折第20天，对照组骨愈合微血管。P：骨膜，C：骨痂，CB：骨皮质。200μm×20 图5 骨折第30天，实验组骨愈合微血管。P：骨膜，CD：骨皮质。200μm×20 图6 骨折第30天，对照组骨愈合微血管。P：骨膜，C：骨痂，C：骨痂，CB：骨皮质。200μm×20
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3 讨论
祖国医学认为骨折后脉络必受损伤，而致经血瘀积不散，形成局部肿痛。采用活血化瘀理论，行气活血，通脉散瘀，消肿止痛，以利于骨折治疗[1]。因此，本研究按活血化瘀(乳香、没药、红花、血竭、三七、煅自然铜、赤芍)，止痛(沉香、羌活、桂枝、白芷、栀子)和接骨续筋(杜仲、续断、骨碎补、五加皮、煅狗骨、透骨草)之原则组方，进行骨折后外敷用药，观察到中药对骨折后微血管重建的规律。在骨折早期，促进新生血管生长、增多，管径变粗，加速骨折部位局部血液循环的重建；在晚期，随着骨痂改建，血管数量迅速减少，直径变小，并最终转为正常血管分布形态。从形态上证明了中药对骨折愈合微血管形成的促进和改善作用，进一步补充了中药对骨折愈合促进作用的资料。
活血化瘀、消肿止痛对损伤组织的作用机理：早期可控制和减缓炎症反应，增加吸收，从而减少充血、水肿，并修复组织及血管壁，降低致痛物质浓度；在晚期，可使毛细血管扩张，减轻毛细血管静脉段的压力，减少白细胞及其它有形成份的渗出[2]。此外，煅狗骨可通过促进血肿吸收，促进骨基质中胶元纤维的合成，促进骨细胞中的“酶活性”而促进骨折愈合[3]。而煅自然铜亦能影响胶元纤维合成中关键酶的活性，从而促进骨折愈合[4]。我们认为，中药对骨折愈合微血管重建的促进作用是通过两个方面进行的：一方面是直接刺激微血管生长；另一方面是通过组织、细胞、酶、分子等多层次促进骨折愈合，增加对营养物质的需要，增强对代谢产物的排出，间接刺激微血管重建，二者互相影响，互为因果。
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作者单位：张建国(三峡学院医学院，湖北 宜昌 443003)
陈良金(北京医科大学，北京 100083)
蒋文跃(北京医科大学，北京 100083)
参考文献：
[1]顾云伍，韩慧，尚天裕，等.中西医结合治疗骨折研究进展.中国骨伤，1993，6(1)：5.
[2]侯伟，马斌，胡兴山.损伤液化膜的研制及动物实验研究.中国中医骨伤科，1995，3(5)：1.
[3]林燕萍，王和鸣，陈奕权，等.煅狗骨对实验性骨折愈合作用的组织学和组织化学研究.中医骨伤科，1991，7(6)：4.
[4]王智兴.自然铜在骨折愈合过程中对总胶原、不溶性胶原、钙、磷和生物力学影响.中华外科杂志，1986，6(4)：305., 百拇医药