克林霉素磷酸酯葡萄糖注射液细菌内毒素检查试验
作者：周荔 王志斌
单位：北京市药品检验所 100035
关键词：
首都医药000821 细菌内毒素检查法是利用鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反应的机理，以判定供试品中的细菌内毒素的限值是否符合规定的一种方法。细菌内毒素检查法与热原检查法(家兔法)相比，具有操作简单、灵敏度高、重现性好的特点。随着对细菌内毒素检查法的深入研究，检查品种也逐步增加，为此，我们对克林霉素磷酸酯葡萄糖注射液细菌内毒素检查的可行性进行验证，认为鲎试验法检测本品中的细菌内毒素是可行的。
1 试验材料
克林霉素磷酸酯葡萄糖注射液，批号：19991005，19991011，19991018，由广州南鸿医药技术有限公司提供；鲎试剂，标示灵敏度0.125Eu/ml，批号：990504，厦门鲎试剂厂，标示灵敏度0.06Eu/ml，批号：990817，湛江安度斯生物有限公司生产；细菌内毒素国家标准品，9000Eu/支，批号：981，中国药品生物制品检定所生产；细菌内毒素检查用水，10ml/支，批号：990131，大同市惠达制药厂生产；电热恒温水浴箱，湖北省黄石市医疗器械厂生产；H-1微型混合器，上海沪西仪器厂生产。
, http://www.100md.com
试验所用玻璃器皿均250℃烘干1小时。
2 方法与结果
2.1 供试品内毒素限值(L)的确定：
供试品细菌内毒素限值按以下公式计算：，式中L为供试品的细菌内毒素限值；K为按规定的给药途径，临床无任何不良反应的内毒素阈剂量，注射剂的内毒阈剂量为5Eu/(Kg.h)；m为热原剂量。克林霉素磷酸酯葡萄糖注射液的细菌内毒素限值为每1ml不得过0.5Eu。
2.2 鲎试剂灵敏度复核
按细菌内毒素检查法项下要求，进行鲎试剂灵敏度复核，结果鲎试剂灵敏度的测定值λc在0.5λ～2λ之间。结果见表1。
表1 鲎试剂灵敏度复核试验结果 批号
, 百拇医药
标示灵敏度
(λ)
细菌内毒素浓度(Eu/ml)
阴性
测定灵敏度
(λc)
0.25
0.125
0.06
0.03
0.015
990504
0.125
, http://www.100md.com
++++
++--------------
0.18
990817
0.06
++++
++++------------
0.06
2.3 干扰试验
按细菌内毒素检查法的要求，进行供试品干扰试验，干扰试验的浓度为供试品原液。试验表明：供试品为原液时，细菌内毒素在两个系列中反应终点浓度的几何平均值(Es、Et)均在0.5λ～2λ范围内，且Et值均在0.5Es～2.0Es范围内，表明供试品对鲎试剂与细菌内毒素的凝集反应没有干扰作用。使用两个鲎试剂厂家的两种灵敏度的鲎试剂对3个批号供试品进行干扰试验，验证了方法的可行性。结果见表2、表3。表2 干扰试验结果(鲎试剂灵敏度λ＝0.125；批号990504) 供试品批号
, 百拇医药
细菌内毒素浓度(Eu/ml)
阴性
0.25
0.125
0.06
0.03
水
++++
++------------
Es：0.18
19991005
++++
, http://www.100md.com +++-----------
Et：0.15
19991011
++++--------------
Et：0.25
19991018
++++
++------------
Et：0.18
注：Es内毒素标准品水溶液反应终点浓度的几何平均值
Et内毒素标准品供试品溶液反应终点浓度的几何平均值表3 干扰试验结果(鲎试剂灵敏度λ＝0.06；批号990817) 供试品批号
, http://www.100md.com
细菌内毒素浓度(Eu/ml)
阴性
0.125
0.06
0.03
0.015
水
++++
++++----------
Es：0.06
19991005
++++
, 百拇医药 ++++----------
Et：0.06
19991011
++++
++------------
Et：0.09
19991018
++++
++++----------
Et：0.06
注：Es内毒素标准品水溶液反应终点浓度的几何平均值
Et内毒素标准品供试品溶液反应终点浓度的几何平均值
3 讨论
鲎试剂用于细菌内毒素的检测，具有操作简便，灵敏度高，重现性好的特点，试验表明：克林霉素磷酸酯葡萄糖注射液对鲎试验无干扰作用，可以采用细菌内毒素检查法进行质量控制，其内毒素限值可定为每1ml不得过0.5Eu。 (2000-06-22收稿), 百拇医药
单位：北京市药品检验所 100035
关键词：
首都医药000821 细菌内毒素检查法是利用鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反应的机理，以判定供试品中的细菌内毒素的限值是否符合规定的一种方法。细菌内毒素检查法与热原检查法(家兔法)相比，具有操作简单、灵敏度高、重现性好的特点。随着对细菌内毒素检查法的深入研究，检查品种也逐步增加，为此，我们对克林霉素磷酸酯葡萄糖注射液细菌内毒素检查的可行性进行验证，认为鲎试验法检测本品中的细菌内毒素是可行的。
1 试验材料
克林霉素磷酸酯葡萄糖注射液，批号：19991005，19991011，19991018，由广州南鸿医药技术有限公司提供；鲎试剂，标示灵敏度0.125Eu/ml，批号：990504，厦门鲎试剂厂，标示灵敏度0.06Eu/ml，批号：990817，湛江安度斯生物有限公司生产；细菌内毒素国家标准品，9000Eu/支，批号：981，中国药品生物制品检定所生产；细菌内毒素检查用水，10ml/支，批号：990131，大同市惠达制药厂生产；电热恒温水浴箱，湖北省黄石市医疗器械厂生产；H-1微型混合器，上海沪西仪器厂生产。
, http://www.100md.com
试验所用玻璃器皿均250℃烘干1小时。
2 方法与结果
2.1 供试品内毒素限值(L)的确定：
供试品细菌内毒素限值按以下公式计算：，式中L为供试品的细菌内毒素限值；K为按规定的给药途径，临床无任何不良反应的内毒素阈剂量，注射剂的内毒阈剂量为5Eu/(Kg.h)；m为热原剂量。克林霉素磷酸酯葡萄糖注射液的细菌内毒素限值为每1ml不得过0.5Eu。
2.2 鲎试剂灵敏度复核
按细菌内毒素检查法项下要求，进行鲎试剂灵敏度复核，结果鲎试剂灵敏度的测定值λc在0.5λ～2λ之间。结果见表1。
表1 鲎试剂灵敏度复核试验结果 批号
, 百拇医药
标示灵敏度
(λ)
细菌内毒素浓度(Eu/ml)
阴性
测定灵敏度
(λc)
0.25
0.125
0.06
0.03
0.015
990504
0.125
, http://www.100md.com
++++
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0.18
990817
0.06
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0.06
2.3 干扰试验
按细菌内毒素检查法的要求，进行供试品干扰试验，干扰试验的浓度为供试品原液。试验表明：供试品为原液时，细菌内毒素在两个系列中反应终点浓度的几何平均值(Es、Et)均在0.5λ～2λ范围内，且Et值均在0.5Es～2.0Es范围内，表明供试品对鲎试剂与细菌内毒素的凝集反应没有干扰作用。使用两个鲎试剂厂家的两种灵敏度的鲎试剂对3个批号供试品进行干扰试验，验证了方法的可行性。结果见表2、表3。表2 干扰试验结果(鲎试剂灵敏度λ＝0.125；批号990504) 供试品批号
, 百拇医药
细菌内毒素浓度(Eu/ml)
阴性
0.25
0.125
0.06
0.03
水
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Es：0.18
19991005
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, http://www.100md.com +++-----------
Et：0.15
19991011
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Et：0.25
19991018
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Et：0.18
注：Es内毒素标准品水溶液反应终点浓度的几何平均值
Et内毒素标准品供试品溶液反应终点浓度的几何平均值表3 干扰试验结果(鲎试剂灵敏度λ＝0.06；批号990817) 供试品批号
, http://www.100md.com
细菌内毒素浓度(Eu/ml)
阴性
0.125
0.06
0.03
0.015
水
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Es：0.06
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, 百拇医药 ++++----------
Et：0.06
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Et：0.09
19991018
++++
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Et：0.06
注：Es内毒素标准品水溶液反应终点浓度的几何平均值
Et内毒素标准品供试品溶液反应终点浓度的几何平均值
3 讨论
鲎试剂用于细菌内毒素的检测，具有操作简便，灵敏度高，重现性好的特点，试验表明：克林霉素磷酸酯葡萄糖注射液对鲎试验无干扰作用，可以采用细菌内毒素检查法进行质量控制，其内毒素限值可定为每1ml不得过0.5Eu。 (2000-06-22收稿), 百拇医药