人胚胎心血管褪黑素受体的鉴定及其生物学特性
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中国病理生理杂志 2000年第10期第16卷 第六届受体和信
作者：石勇铨 陆祖谦 何金 刘会敏 赵瑛 刘志民 彭树勋
单位：石勇铨 陆祖谦 何金 刘会敏 赵瑛 刘志民(第二军医大学长征医院内分泌科，上海 200003)；彭树勋(香港大学医学院生理系)
关键词：
中国病理生理杂志0010264
目的：应用免疫组织化学法和核酸分子原位杂交技术检测心脏和血管MEL受体蛋白及其mRNA的表达。方法：1.研究对象：中期引产人胎儿心脏和动脉血管，4%多聚甲醛+0.1%DEPC固定，石蜡包埋组织，置4℃冰箱贮存待检测。2.MEL控针制备：在LB培养基中分别培养含有MEL1A或MEL1B受体质粒的大肠杆菌，过液培养，离心，回收大肠杆菌。按照华舜公司质粒抽提纯化试剂盒说明抽提纯化质粒，酶切质粒(Xho内切酶和HindⅢ内切酶)地高辛标记探针(宝灵曼公司)。3.核酸分子原位杂交：原位杂交检测试剂盒、Poly-L-Lysin(多聚赖氨酸)和专用盖玻片均购自武汉博士德生物工程公司。实验设不加探针为阴性对照。4.免疫组织化学染色：一抗为鼠抗人MEL1A和MEL1B受体单克隆抗体，由香港大学生彭树勋教授馈赠。免疫组化试剂盒购自福建迈新公司。微波修复抗原，MEL1A或MEL1B受体单克隆抗体稀释度为1∶75，以缓冲液代替第一抗体作为阴性对照，下丘脑组织作为阳性对照。结果：1.心脏和主动脉MEL1A和MEL1B受体蛋白的检测：免疫组织化学染色显示，心脏内皮细胞和心肌细胞均存在MEL1A和MEL1B受体，分布于细胞膜和胞核，但以胞膜为主；主动脉内皮细胞和平滑肌细胞MEL1A和MEL1B受体，见于细胞膜和细胞核，但以细胞膜为主。2.心脏和主动脉MEL1A和MEL1B受体mRNA的检测：心脏内皮细胞和肌细胞上均存在MEL1A和MEL1B受体mRNA的表达，分布于细胞浆和胞核，但以细胞核为主；主动脉内皮细胞和平滑肌细胞均有MEL1A和MEL1B受体mRNA的表达，见于细胞浆和胞核，但以细胞核为主。结论：心脏和主动脉血管存在MEL1A和MEL1B受体蛋白及其mRNA的表达，说明心脏和主动脉血管是MEL作用的靶器官，MEL通过位于心脏和主动脉血管的MEL1A和MEL1B受体发挥着对心脏和血管功能的直接调节作用，调节的具体机制尚需进一步阐明。, 百拇医药
单位：石勇铨 陆祖谦 何金 刘会敏 赵瑛 刘志民(第二军医大学长征医院内分泌科，上海 200003)；彭树勋(香港大学医学院生理系)
关键词：
中国病理生理杂志0010264
目的：应用免疫组织化学法和核酸分子原位杂交技术检测心脏和血管MEL受体蛋白及其mRNA的表达。方法：1.研究对象：中期引产人胎儿心脏和动脉血管，4%多聚甲醛+0.1%DEPC固定，石蜡包埋组织，置4℃冰箱贮存待检测。2.MEL控针制备：在LB培养基中分别培养含有MEL1A或MEL1B受体质粒的大肠杆菌，过液培养，离心，回收大肠杆菌。按照华舜公司质粒抽提纯化试剂盒说明抽提纯化质粒，酶切质粒(Xho内切酶和HindⅢ内切酶)地高辛标记探针(宝灵曼公司)。3.核酸分子原位杂交：原位杂交检测试剂盒、Poly-L-Lysin(多聚赖氨酸)和专用盖玻片均购自武汉博士德生物工程公司。实验设不加探针为阴性对照。4.免疫组织化学染色：一抗为鼠抗人MEL1A和MEL1B受体单克隆抗体，由香港大学生彭树勋教授馈赠。免疫组化试剂盒购自福建迈新公司。微波修复抗原，MEL1A或MEL1B受体单克隆抗体稀释度为1∶75，以缓冲液代替第一抗体作为阴性对照，下丘脑组织作为阳性对照。结果：1.心脏和主动脉MEL1A和MEL1B受体蛋白的检测：免疫组织化学染色显示，心脏内皮细胞和心肌细胞均存在MEL1A和MEL1B受体，分布于细胞膜和胞核，但以胞膜为主；主动脉内皮细胞和平滑肌细胞MEL1A和MEL1B受体，见于细胞膜和细胞核，但以细胞膜为主。2.心脏和主动脉MEL1A和MEL1B受体mRNA的检测：心脏内皮细胞和肌细胞上均存在MEL1A和MEL1B受体mRNA的表达，分布于细胞浆和胞核，但以细胞核为主；主动脉内皮细胞和平滑肌细胞均有MEL1A和MEL1B受体mRNA的表达，见于细胞浆和胞核，但以细胞核为主。结论：心脏和主动脉血管存在MEL1A和MEL1B受体蛋白及其mRNA的表达，说明心脏和主动脉血管是MEL作用的靶器官，MEL通过位于心脏和主动脉血管的MEL1A和MEL1B受体发挥着对心脏和血管功能的直接调节作用，调节的具体机制尚需进一步阐明。, 百拇医药