紫杉醇诱导兔晶体上皮细胞凋亡的实验研究
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中国病理生理杂志 2000年第10期第16卷 第六届受体和信
作者：罗莉霞 李平华 彭惠 骆云鹏 汤为学
单位：罗莉霞 李平华 彭惠(重庆医科大学临床学院眼科，重庆 400016)；骆云鹏 汤为学(重庆医科大学病理生理教研室，重庆 400046)
关键词：
中国病理生理杂志0010333
目的：从诱导兔晶体上皮细胞(rabbit lens epithelial cells, RLECs)凋亡的角度观察紫杉醇(Taxol)对体外培养的兔晶体上皮细胞抑制的作用。方法：2～3月龄家兔40只；DMEM/F12培养基；胎牛血清；MTT；TUNEL试剂；24孔酶标板；细胞培养瓶；全自动酶标光度仪；倒置显微镜；透射电子显微镜；离心机。(1)取2～3代的对数生长期RLECs于96孔板中，放进CO2孵箱内培养24 h后，将不同浓度的Taxol分别作用24及72 h，用MTT测定法观察其对RLECs增殖的作用。(2)将传代RLECs培养在盖玻片上24 h后，加入一定浓度的Taxol，作用72 h后，用多聚甲醛固定，行苏木精-伊红染色，光镜下观察RLECs的形态变化。(3)将一定浓度的Taxol作用于2～3代的RLECs 24 h，用0.25%胰蛋白酶消化，PBS洗两次，戊二醛固定，行超微结构观察(同时设未加药标本为正常对照)。(4)将传代的RLECs培养在盖玻片上24 h后，加入一定浓度的Taxol，作用72 h，固定后行TUNEL染色并在光镜下观察(另将未加药标本为阴性对照。)。结果：本研究发现Taxol对体外培养的RLECs有抑制作用，其24 h的半效抑制量(ID50)为6μg/mL,72 h的ID50为4μg/mL。光镜下，正常对照的RLECs呈多边形上皮样，胞浆丰富、粉红色、胞核呈紫蓝色。部分用药组细胞体积缩小、呈圆形、包浆浓染，可见染色质边集、胞核固缩、碎裂等多种形态改变。电镜下观察用药组细胞见典型的凋亡细胞及凋亡小体的形成。TUNEL染色见部分用药组细胞胞核呈深棕黄色，提示细胞凋亡。结论：本研究通过光镜、电镜以及免疫组化等多方面的证实：Taxol主要是通过诱发细胞凋亡的机制而抑制RLECs生长的。, http://www.100md.com
单位：罗莉霞 李平华 彭惠(重庆医科大学临床学院眼科，重庆 400016)；骆云鹏 汤为学(重庆医科大学病理生理教研室，重庆 400046)
关键词：
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目的：从诱导兔晶体上皮细胞(rabbit lens epithelial cells, RLECs)凋亡的角度观察紫杉醇(Taxol)对体外培养的兔晶体上皮细胞抑制的作用。方法：2～3月龄家兔40只；DMEM/F12培养基；胎牛血清；MTT；TUNEL试剂；24孔酶标板；细胞培养瓶；全自动酶标光度仪；倒置显微镜；透射电子显微镜；离心机。(1)取2～3代的对数生长期RLECs于96孔板中，放进CO2孵箱内培养24 h后，将不同浓度的Taxol分别作用24及72 h，用MTT测定法观察其对RLECs增殖的作用。(2)将传代RLECs培养在盖玻片上24 h后，加入一定浓度的Taxol，作用72 h后，用多聚甲醛固定，行苏木精-伊红染色，光镜下观察RLECs的形态变化。(3)将一定浓度的Taxol作用于2～3代的RLECs 24 h，用0.25%胰蛋白酶消化，PBS洗两次，戊二醛固定，行超微结构观察(同时设未加药标本为正常对照)。(4)将传代的RLECs培养在盖玻片上24 h后，加入一定浓度的Taxol，作用72 h，固定后行TUNEL染色并在光镜下观察(另将未加药标本为阴性对照。)。结果：本研究发现Taxol对体外培养的RLECs有抑制作用，其24 h的半效抑制量(ID50)为6μg/mL,72 h的ID50为4μg/mL。光镜下，正常对照的RLECs呈多边形上皮样，胞浆丰富、粉红色、胞核呈紫蓝色。部分用药组细胞体积缩小、呈圆形、包浆浓染，可见染色质边集、胞核固缩、碎裂等多种形态改变。电镜下观察用药组细胞见典型的凋亡细胞及凋亡小体的形成。TUNEL染色见部分用药组细胞胞核呈深棕黄色，提示细胞凋亡。结论：本研究通过光镜、电镜以及免疫组化等多方面的证实：Taxol主要是通过诱发细胞凋亡的机制而抑制RLECs生长的。, http://www.100md.com