胆囊癌组织癌胚抗原过表达的意义
胆囊癌组织癌胚抗原过表达的意义
李陕区 高平 闫小君
摘 要:目的 探讨癌胚抗原(CEA)表达在胆囊癌的发生、发展中的作用，为该病的临床诊治提供参考指标. 方法 应用免疫组织化学ABC方法, 对30例胆囊癌组织标本进行癌胚抗原及增殖细胞核抗原(PCNA)的检测. 结果 30例胆囊癌组织中，11例(36%)显示CEA过度表达；18例(60%)显示PCNA高表达，其中9例两种标记同时阳性. 半定量分级，spearman秩相关分析两者呈显著相关(P<0.01)； CEA表达的程度与胆囊癌的组织学类型有关. 结论 胆囊癌中CEA的异常表达可能有病因学意义；CEA的表达情况对反映胆囊癌的生物学特性、衡量胆囊癌分化程度及判断患者预后可能有重要价值.
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关键词：胆囊癌；增殖细胞核抗原；癌胚抗原；免疫组织化学
0 引言
CEA的过度表达对某些肿瘤的发生、发展有重要的作用[1,2]. 胆囊癌为中老年人的多发疾病,但目前对该病的基础研究较少. 我们应用免疫组织化学ABC方法, 半定量观察了CEA在胆囊癌中的表达, 并同时以增殖细胞核抗原(PCNA) 的表达判断肿瘤的增殖活性，旨在探讨CEA在胆囊癌的发生、发展中的作用.
1 材料和方法
1.1 材料 胆囊癌组织标本来自西京医院病理科, 均经病理确诊, 其中乳头状癌16例, 粘液腺癌5例, 硬癌9例. 男4例, 女26例, 年龄40～67岁. 标本经100 mL.L-1福尔马林固定,石蜡包埋, 厚5 μm连续切片.
, 百拇医药
1.2 方法 采用免疫组化ABC法染色. 切片脱蜡至水，加5 mL.L-1过氧化氢甲醇液封闭内原酶，并用10 mL.L-1小牛血清白蛋白封闭. 于PCNA染色切片，滴加抗PCNA蛋白的mAb; CEA染色切片滴加抗CEA蛋白的mAb. 然后滴加ABC复合物,DAB显色. 常规脱水、透明、封片. 上述两种mAb均购自北京中山生物技术有限公司. 对照实验分别以PCNA及CEA强阳性的结肠癌标本同步染色作为阳性对照；以PBS液替代抗PCNA及CEA抗体作为阴性对照. 结果判定：阳性对照为阳性, 阴性对照为阴性. PCNA染色以细胞核呈棕黄色，CEA染色以胞质及胞核呈棕黄色为阳性细胞(Fig 1,2). 每例切片均至少观察5个具有代表性的高倍视野, 按阳性细胞所占比例进行半定量分级. 共分为1～4级：1级者为0～25%; 2级者为：26%～50%; 3级者：51%～75%; 4级者：76%～100%.
图 1 胆囊腺癌细胞质及核CEA染色阳性
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Fig 1 Cytoplasmic and nuclear positive staining of
CEA in gallbladder carcinoma ABC ×200
图 2 胆囊腺癌弥漫性细胞核PCNA阳性
Fig 2 PCNA positive cell nuclei in gallbladder carcinoma ABC ×200
2 结果
PCAN及CEA表达与胆囊癌组织学类型明显相关(χ2检验,Tab 1). CEA免疫组织化学染色半定量结果: 1～4级的例数分别为18, 2, 6和4；PCNA染色:1～4级例数分别为10, 3, 7和10. Spearman秩相关检验呈显著性相关(r=0.8696, P<0.01).
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表 1 PCNA及CEA表达与胆囊癌组织学类型的关系
Tab 1 PCNA and CEA overexpression in different
histomorphological gallbladder carcinoma (n,%)
Diagnosis
n
PCNA(+)
CEA
CEA(+)
+PCNA(+)
Papillary carcinoma
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16
6(37)
2(12)
2(12)
Mucinous adnocarcinoma
5
4(80)
3(60)b
2(40)
Scirrhous carcinoma
9
8(80)
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6(66)b
5(55)
Total
30
18(60)
11(36)
9(30)
P<0.01, vs papillary carcinoma.3 讨论
CEA在多种肿瘤中均有表达, 并与肿瘤的生长活性有关[3]，但目前尚未见有关该蛋白在胆囊癌中表达情况的报道. 我们在30例胆囊癌组织中，检出11例CEA阳性，提示CEA在胆囊癌的发生、发展中可能起着重要的作用. CEA 属于胚胎性抗原，随着分化程度而逐渐消失. PCNA是DNA复制时δ聚合酶的辅助物，凡进入增殖周期的细胞均为阳性，故可有效地反应肿瘤细胞的增殖指数[4]，它的出现与细胞周期中的DNA合成期(S期)有着密切的联系. 应用PCNA mAb可显示正处于增殖状态的细胞核，故可用于鉴别癌与正常细胞并判断预后.
, 百拇医药
为探讨该CEA的表达与细胞增殖之间的关系，我们同时对上述标本进行了PCNA染色. Tab 1显示11例CEA阳性标本中9例PCNA阳性；Spearman秩相关检验两者显著相关. 由此可见，CEA阳性的细胞多具有较高的增殖活性, 进一步说明CEA的异常表达与肿瘤的恶性增生密切相关, 有可能成为临床诊治胆囊癌的有用指标. 此外，Tab 1显示CEA及PCNA的表达均与胆囊癌组织病理分型有关. 统计学分析结果, 分化程度较高的乳头状腺癌与分化较低的粘液腺癌及硬癌之间有显著差异，表明CEA具有促增殖作用, 以及该基因产物的自分泌作用. PCNA不仅反应了肿瘤细胞的增殖活性, 同时也与肿瘤细胞的分化程度及患者预后有关[5]. 本组30例胆囊癌组织中，18例(60%)PCNA阳性,反映了胆囊癌组织细胞较高的增殖指数, 同时与多数胆囊癌患者的预后较差相一致.
作者简介：李陕区(1960-), 男(汉族), 陕西省兴平县人. 硕士, 主治医师, 发表论文7篇. Tel.(029)3374772 Email. Yanxj@igd.edu.cn
, 百拇医药
李陕区(第四军医大学全军基因诊断技术研究所，陕西 西安 710033)
高平(第四军医大学唐都医院妇产科)
闫小君(第四军医大学全军基因诊断技术研究所，陕西 西安 710033)
参考文献：
[1]杨 波，王 萍，宗安民 et al. 癌胚抗原定量研究在胃癌早期诊断中的作用[J]. 中国肿瘤临床，1996；23(9)：647-649.
[2]李新英，焦书竹. 宫颈腺癌癌胚抗原表达及意义[J]. 中国肿瘤临床,1996;23(5):315-318.
[3]Kjorstad KE, Orjasaeter H. The prognostic significance of carcinoembryonic antigen deternination in patients with adenocarcinoma of the cervix[J]. Gynecol Oncol, 1984;19(1):284-288.
[4]Mathews MB, Bernstein RM, Fransa BRJr et al. Identity of the proliferating cell nuclear antigen and cydlin[J]. Nature, 1984; 309(1):374-379.
[5]Ng IO, Lai EC, Fan ST et al. Prognostic significance of proliferating cell nuclear antigen expression in hepatocellular carcinoma[J]. Cancer, 1994; 73(9): 2268-2272., 百拇医药
李陕区 高平 闫小君
摘 要:目的 探讨癌胚抗原(CEA)表达在胆囊癌的发生、发展中的作用，为该病的临床诊治提供参考指标. 方法 应用免疫组织化学ABC方法, 对30例胆囊癌组织标本进行癌胚抗原及增殖细胞核抗原(PCNA)的检测. 结果 30例胆囊癌组织中，11例(36%)显示CEA过度表达；18例(60%)显示PCNA高表达，其中9例两种标记同时阳性. 半定量分级，spearman秩相关分析两者呈显著相关(P<0.01)； CEA表达的程度与胆囊癌的组织学类型有关. 结论 胆囊癌中CEA的异常表达可能有病因学意义；CEA的表达情况对反映胆囊癌的生物学特性、衡量胆囊癌分化程度及判断患者预后可能有重要价值.
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关键词：胆囊癌；增殖细胞核抗原；癌胚抗原；免疫组织化学
0 引言
CEA的过度表达对某些肿瘤的发生、发展有重要的作用[1,2]. 胆囊癌为中老年人的多发疾病,但目前对该病的基础研究较少. 我们应用免疫组织化学ABC方法, 半定量观察了CEA在胆囊癌中的表达, 并同时以增殖细胞核抗原(PCNA) 的表达判断肿瘤的增殖活性，旨在探讨CEA在胆囊癌的发生、发展中的作用.
1 材料和方法
1.1 材料 胆囊癌组织标本来自西京医院病理科, 均经病理确诊, 其中乳头状癌16例, 粘液腺癌5例, 硬癌9例. 男4例, 女26例, 年龄40～67岁. 标本经100 mL.L-1福尔马林固定,石蜡包埋, 厚5 μm连续切片.
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1.2 方法 采用免疫组化ABC法染色. 切片脱蜡至水，加5 mL.L-1过氧化氢甲醇液封闭内原酶，并用10 mL.L-1小牛血清白蛋白封闭. 于PCNA染色切片，滴加抗PCNA蛋白的mAb; CEA染色切片滴加抗CEA蛋白的mAb. 然后滴加ABC复合物,DAB显色. 常规脱水、透明、封片. 上述两种mAb均购自北京中山生物技术有限公司. 对照实验分别以PCNA及CEA强阳性的结肠癌标本同步染色作为阳性对照；以PBS液替代抗PCNA及CEA抗体作为阴性对照. 结果判定：阳性对照为阳性, 阴性对照为阴性. PCNA染色以细胞核呈棕黄色，CEA染色以胞质及胞核呈棕黄色为阳性细胞(Fig 1,2). 每例切片均至少观察5个具有代表性的高倍视野, 按阳性细胞所占比例进行半定量分级. 共分为1～4级：1级者为0～25%; 2级者为：26%～50%; 3级者：51%～75%; 4级者：76%～100%.
图 1 胆囊腺癌细胞质及核CEA染色阳性
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Fig 1 Cytoplasmic and nuclear positive staining of
CEA in gallbladder carcinoma ABC ×200
图 2 胆囊腺癌弥漫性细胞核PCNA阳性
Fig 2 PCNA positive cell nuclei in gallbladder carcinoma ABC ×200
2 结果
PCAN及CEA表达与胆囊癌组织学类型明显相关(χ2检验,Tab 1). CEA免疫组织化学染色半定量结果: 1～4级的例数分别为18, 2, 6和4；PCNA染色:1～4级例数分别为10, 3, 7和10. Spearman秩相关检验呈显著性相关(r=0.8696, P<0.01).
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表 1 PCNA及CEA表达与胆囊癌组织学类型的关系
Tab 1 PCNA and CEA overexpression in different
histomorphological gallbladder carcinoma (n,%)
Diagnosis
n
PCNA(+)
CEA
CEA(+)
+PCNA(+)
Papillary carcinoma
, http://www.100md.com
16
6(37)
2(12)
2(12)
Mucinous adnocarcinoma
5
4(80)
3(60)b
2(40)
Scirrhous carcinoma
9
8(80)
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6(66)b
5(55)
Total
30
18(60)
11(36)
9(30)
P<0.01, vs papillary carcinoma.3 讨论
CEA在多种肿瘤中均有表达, 并与肿瘤的生长活性有关[3]，但目前尚未见有关该蛋白在胆囊癌中表达情况的报道. 我们在30例胆囊癌组织中，检出11例CEA阳性，提示CEA在胆囊癌的发生、发展中可能起着重要的作用. CEA 属于胚胎性抗原，随着分化程度而逐渐消失. PCNA是DNA复制时δ聚合酶的辅助物，凡进入增殖周期的细胞均为阳性，故可有效地反应肿瘤细胞的增殖指数[4]，它的出现与细胞周期中的DNA合成期(S期)有着密切的联系. 应用PCNA mAb可显示正处于增殖状态的细胞核，故可用于鉴别癌与正常细胞并判断预后.
, 百拇医药
为探讨该CEA的表达与细胞增殖之间的关系，我们同时对上述标本进行了PCNA染色. Tab 1显示11例CEA阳性标本中9例PCNA阳性；Spearman秩相关检验两者显著相关. 由此可见，CEA阳性的细胞多具有较高的增殖活性, 进一步说明CEA的异常表达与肿瘤的恶性增生密切相关, 有可能成为临床诊治胆囊癌的有用指标. 此外，Tab 1显示CEA及PCNA的表达均与胆囊癌组织病理分型有关. 统计学分析结果, 分化程度较高的乳头状腺癌与分化较低的粘液腺癌及硬癌之间有显著差异，表明CEA具有促增殖作用, 以及该基因产物的自分泌作用. PCNA不仅反应了肿瘤细胞的增殖活性, 同时也与肿瘤细胞的分化程度及患者预后有关[5]. 本组30例胆囊癌组织中，18例(60%)PCNA阳性,反映了胆囊癌组织细胞较高的增殖指数, 同时与多数胆囊癌患者的预后较差相一致.
作者简介：李陕区(1960-), 男(汉族), 陕西省兴平县人. 硕士, 主治医师, 发表论文7篇. Tel.(029)3374772 Email. Yanxj@igd.edu.cn
, 百拇医药
李陕区(第四军医大学全军基因诊断技术研究所，陕西 西安 710033)
高平(第四军医大学唐都医院妇产科)
闫小君(第四军医大学全军基因诊断技术研究所，陕西 西安 710033)
参考文献：
[1]杨 波，王 萍，宗安民 et al. 癌胚抗原定量研究在胃癌早期诊断中的作用[J]. 中国肿瘤临床，1996；23(9)：647-649.
[2]李新英，焦书竹. 宫颈腺癌癌胚抗原表达及意义[J]. 中国肿瘤临床,1996;23(5):315-318.
[3]Kjorstad KE, Orjasaeter H. The prognostic significance of carcinoembryonic antigen deternination in patients with adenocarcinoma of the cervix[J]. Gynecol Oncol, 1984;19(1):284-288.
[4]Mathews MB, Bernstein RM, Fransa BRJr et al. Identity of the proliferating cell nuclear antigen and cydlin[J]. Nature, 1984; 309(1):374-379.
[5]Ng IO, Lai EC, Fan ST et al. Prognostic significance of proliferating cell nuclear antigen expression in hepatocellular carcinoma[J]. Cancer, 1994; 73(9): 2268-2272., 百拇医药