临床口腔器械灭菌方法比较
武迎宏 邓小虹 罗薇 高承志 李盈洁
摘 要： 目的 比较压力蒸汽灭菌与化学灭菌剂两种灭菌方法对临床口腔器械的灭菌效果。方法 采用悬液定性法进行灭菌实验，采用无菌检查法检查口腔器械灭菌效果。结果 有效氯含量2 000 mg/L的含氯灭菌剂，作用40 min，2%碱性戊二醛，作用4 h均不能使手机、吸唾器全部达到无菌；压力蒸汽灭菌135℃ 10 min可使手机、吸唾器全部达到无菌、TT型肝炎病毒(TTV)、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)抗原性全部灭活。结论 压力蒸汽灭菌及灭活TTV，HBsAg效果可靠。
关键词：口腔器械；手机；压力蒸汽灭菌
手机、车针、扩大针、吸唾器等口腔器械直接与口腔疾病患者唾液、血液接触，用后污染极为严重。本实验研究的目的是通过压力蒸汽灭菌、化学灭菌剂等灭菌方法及灭菌效果的比较，探讨适用于口腔科临床工作需要的手机、车针等口腔科器械的可靠的、快速的灭菌方式。结果报告如下。
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1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验菌 金黄色葡萄球菌(ATCC6538)、白色念珠菌(ATCC10231)、TTV、HBsAg。
1.1.2 实验用临床口腔器械 NSK MCH-QDJ-M4高速手机；IS-25低速手机；车针；扩大针；吸唾器。
1.1.3 化学灭菌剂 戊二醛、含氯灭菌剂。
1.1.4 压力蒸汽灭菌器 EAC-2200型压力蒸汽灭菌器由北京同心行科贸有限公司提供。
1.1.5 压力蒸汽灭菌指示器材 化学指示器材：化学指示胶带、化学指示卡均为3M公司的产品。生物指示器材：嗜热脂肪杆菌芽胞(ATCC7953)。
, 百拇医药
1.2 方法
1.2.1 菌悬液的制备 分别取金黄色葡萄球菌、白色念珠菌种第3～14代营养琼脂斜面18～24 h新鲜培养物，用磷酸盐缓冲液制备成含菌量为107～108 CFU/ml的菌悬液备用。
1.2.2 器械染菌、染病毒方法 分别将手机远端5 cm、吸唾器远端5 cm、车针、扩大针全部浸入试验菌液、TTV及HBsAg悬液中，沥干，置37℃恒温干燥30 min后进行实验。
1.2.3 灭菌剂灭菌实验
1.2.3.1 中和剂鉴定试验 以金黄色葡萄球菌、白色念珠菌为试验菌进行试验。试验分：灭菌剂+菌液；(灭菌剂+菌液)+中和剂；(灭菌剂+中和剂)+菌液；磷酸盐缓冲液(PBS，0.03 mol/L，pH7.2)+菌液；中和剂+菌液；PBS、中和剂、培养基直接培养。试验结果，当第1组不长菌或菌数远少于第2组；第6，7，8组不长菌；第3，4，5组组间菌数误差率不超过10%时，表明所用中和剂及使用浓度适宜。
, 百拇医药
1.2.3.2 染菌器械的灭菌实验 实验分两组，实验组：分别将染菌后手机及吸唾器远端10 cm、车针、扩大针全部浸入灭菌剂中，作用至预定时间取出，立即放入相应10 ml中和剂中，中和10 min，超声洗涤振荡，取洗脱液接种培养，进行定性观察，记录培养结果。对照组：以PBS代替灭菌剂进行实验，洗脱液定量培养，回收菌量作为实验阳性对照；中和剂、培养基直接培养作为实验阴性对照。
1.2.4 器械灭菌效果检查 分别将灭菌后器械放入真菌培养基、流体硫乙醇酸盐培养基中直接培养。观察记录实验结果。
2 结 果
2.1 染菌器械灭菌效果 压力蒸汽对器械上污染的白色念珠菌的杀灭效果明显优于化学灭菌剂。化学灭菌剂对车针、扩大针上污染的白色念珠菌金黄色葡萄球菌杀灭作用较手机、吸唾器彻底(表1)。
表1 不同方法对指示菌的杀灭率(%)
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器械
名称
氯制剂
戊二醛
压力蒸汽灭菌
白
念
金
葡
TT
V
HBs
Ag
白
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念
金
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吸唾器
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2.2 污染TTV，HBsAg器械灭活效果 压力蒸汽能够彻底灭活器械上污染的TTV，HBsAg抗原性。化学灭菌剂不能将所有器械污染的TTV，HBsAg抗原性灭活。
2.3 临床使用后器械灭菌效果 压力蒸汽灭菌对临床使用后器械灭菌效果明显优于化学灭菌剂。经灭菌剂处理的临床使用后器械仍有6件检菌阳性。
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2.4 临床使用后器械病毒污染灭活效果 压力蒸汽灭菌处理能够彻底灭活临床使用后器械上污染的TTV，HBsAg抗原性。化学灭菌剂灭菌处理后器械TTV仍保持阳性、HBsAg抗原性阳性的占11.25%(表2)。表2 不同方法对临床使用后器械灭菌效果(%)
器械
名称
氯制剂
戊二醛
压力蒸汽灭菌
指示菌
TTV
HBsAg
指示菌
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TTV
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2.5 压力蒸汽灭活HBsAg抗原性、TTV所需时间 HBsAg抗原性、TTV对135℃压力蒸汽灭菌耐受性均较强，完全灭活需要10 min。
2.6 器械无菌检查结果 对灭菌后细菌及TTV，HBsAg抗原性检测阴性的器械进行无菌检查。经压力蒸汽灭菌及TTV，HBsAg抗原性灭活的器械，无菌检查均合格；经化学灭菌剂灭菌及HBsAg抗原性灭活的器械有2.69%无菌检查不合格。
, 百拇医药
3 讨 论
本次实验研究结果表明，口腔科器械中手机的污染是十分严重的。临床使用后手机污染的细菌平均菌量为900 CFU/件、HBsAg污染明确存在。近年来国外报道的TTV，国内同样发现有感染病例存在，在本次临床检验中检出2件器械有TTV病毒污染。对于车针、扩大针等能够充分暴露于灭菌剂中的器械，即使污染严重，采用戊二醛、含氯灭菌剂灭菌处理，灭菌质量仍可以保证。而对于结构复杂、缝隙较多的口腔器械如污染的手机、吸唾器等，即使将这些器械污染部分全部放入2%碱性戊二醛连续浸泡4 h后，手机检测件数中仍有13.33%检菌阳性、30.00% HBsAg检测阳性；吸唾器检测件数中仍有3.33%检菌阳性、5% HBsAg检测阳性。含氯灭菌剂对手机及吸唾器浸泡灭菌处理结果与戊二醛接近。均难以全部达到应有的灭菌质量。说明化学灭菌剂对手机、吸唾器的浸泡灭菌效果不可靠，并进一步证明，局部擦拭手机及吸唾器表面，由于无法清除因负压回吸到机头内部的粘液、血液以及螺旋凹槽内的附着物，灭菌效果更加无法保证。
, 百拇医药
压力蒸汽灭菌法是临床医疗器械传统的灭菌方式。尤其是近年来为适应临床需要而研制生产的新型小型速效压力蒸汽灭菌器为临床器械及时灭菌带来极大方便。这类设备在135℃条件下，作用10 min，即可彻底杀灭器械上附着的各种微生物。本次实验结果证明，人工污染及临床使用后污染的手机、吸唾器、车针、扩大针经压力蒸汽灭菌135℃，作用6 min、8 min后，器械上附着的细菌均被100%杀灭、化学指示卡完全变色、生物指示菌片培养全部阴性，但HBsAg抗原性、TTV则需135℃，作用10 min后全部灭活。根据化学灭菌剂灭菌及压力蒸汽灭菌实验结果说明，TTV不仅对化学灭菌剂抗性较强，对压力蒸汽灭菌亦具有一定的耐受能力。为确保口腔器械灭菌质量，压力蒸汽灭菌在135℃条件下，灭菌时间应保持10 min。
对灭菌后检菌及TTV，HBsAg抗原性检测阴性的器械进行无菌检查。经压力蒸汽灭菌135℃、作用10 min后的器械无菌检查均达到合格标准；经戊二醛及含氯灭菌剂灭菌处理后检菌及HBsAg抗原性检测阴性的器械，无菌检查仍有1.33%及4.07%未达到合格标准。检测结果进一步证明，压力蒸汽灭菌较化学灭菌剂对口腔器械灭菌效果可靠。
, 百拇医药
压力蒸汽灭菌效果可靠、操作简便、对环境无污染，是目前口腔科器械灭菌切实可行的方法之一。车针、扩大针经压力蒸汽灭菌处理对与戊二醛及含氯灭菌剂灭菌处理比较，未发现临床使用寿命上的差异；手机选择压力蒸汽灭菌方式，必须是耐高温处理的机型；实验用吸唾器均为高分子制品，经135℃作用10 min重复处理3次，不影响临床使用效果。
总之，小型速效压力蒸汽灭菌器灭菌时间短、便于操作，在临床口腔器械灭菌处理工作中具有良好的应用前景。
武迎宏(北京医科大学人民医院， 北京 100044)
罗薇(北京医科大学人民医院， 北京 100044)
高承志(北京医科大学人民医院， 北京 100044)
邓小虹(北京市卫生防疫站， 北京 100073)
, 百拇医药
李盈洁(北京同心行科贸有限公司， 北京 100007)
参考文献
1，冷泰俊. 乙型病毒性肝炎的医源性传播问题[J]. 中华医院感染学杂志, 1991, 1(1): 50.
2，马飞, 张立红, 薛毅, 等. 口腔科常用消毒剂抑菌性能污染监测[J]. 中华医院感染学杂志, 1998, 8(3): 171.
3，刘伟红, 丁丽, 刘伟, 等. 口腔科器械乙型肝炎病毒表面抗原和e抗原污染情况调查[J]. 中华医院感染学杂志, 1998, 8(1): 36., http://www.100md.com
摘 要： 目的 比较压力蒸汽灭菌与化学灭菌剂两种灭菌方法对临床口腔器械的灭菌效果。方法 采用悬液定性法进行灭菌实验，采用无菌检查法检查口腔器械灭菌效果。结果 有效氯含量2 000 mg/L的含氯灭菌剂，作用40 min，2%碱性戊二醛，作用4 h均不能使手机、吸唾器全部达到无菌；压力蒸汽灭菌135℃ 10 min可使手机、吸唾器全部达到无菌、TT型肝炎病毒(TTV)、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)抗原性全部灭活。结论 压力蒸汽灭菌及灭活TTV，HBsAg效果可靠。
关键词：口腔器械；手机；压力蒸汽灭菌
手机、车针、扩大针、吸唾器等口腔器械直接与口腔疾病患者唾液、血液接触，用后污染极为严重。本实验研究的目的是通过压力蒸汽灭菌、化学灭菌剂等灭菌方法及灭菌效果的比较，探讨适用于口腔科临床工作需要的手机、车针等口腔科器械的可靠的、快速的灭菌方式。结果报告如下。
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1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验菌 金黄色葡萄球菌(ATCC6538)、白色念珠菌(ATCC10231)、TTV、HBsAg。
1.1.2 实验用临床口腔器械 NSK MCH-QDJ-M4高速手机；IS-25低速手机；车针；扩大针；吸唾器。
1.1.3 化学灭菌剂 戊二醛、含氯灭菌剂。
1.1.4 压力蒸汽灭菌器 EAC-2200型压力蒸汽灭菌器由北京同心行科贸有限公司提供。
1.1.5 压力蒸汽灭菌指示器材 化学指示器材：化学指示胶带、化学指示卡均为3M公司的产品。生物指示器材：嗜热脂肪杆菌芽胞(ATCC7953)。
, 百拇医药
1.2 方法
1.2.1 菌悬液的制备 分别取金黄色葡萄球菌、白色念珠菌种第3～14代营养琼脂斜面18～24 h新鲜培养物，用磷酸盐缓冲液制备成含菌量为107～108 CFU/ml的菌悬液备用。
1.2.2 器械染菌、染病毒方法 分别将手机远端5 cm、吸唾器远端5 cm、车针、扩大针全部浸入试验菌液、TTV及HBsAg悬液中，沥干，置37℃恒温干燥30 min后进行实验。
1.2.3 灭菌剂灭菌实验
1.2.3.1 中和剂鉴定试验 以金黄色葡萄球菌、白色念珠菌为试验菌进行试验。试验分：灭菌剂+菌液；(灭菌剂+菌液)+中和剂；(灭菌剂+中和剂)+菌液；磷酸盐缓冲液(PBS，0.03 mol/L，pH7.2)+菌液；中和剂+菌液；PBS、中和剂、培养基直接培养。试验结果，当第1组不长菌或菌数远少于第2组；第6，7，8组不长菌；第3，4，5组组间菌数误差率不超过10%时，表明所用中和剂及使用浓度适宜。
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1.2.3.2 染菌器械的灭菌实验 实验分两组，实验组：分别将染菌后手机及吸唾器远端10 cm、车针、扩大针全部浸入灭菌剂中，作用至预定时间取出，立即放入相应10 ml中和剂中，中和10 min，超声洗涤振荡，取洗脱液接种培养，进行定性观察，记录培养结果。对照组：以PBS代替灭菌剂进行实验，洗脱液定量培养，回收菌量作为实验阳性对照；中和剂、培养基直接培养作为实验阴性对照。
1.2.4 器械灭菌效果检查 分别将灭菌后器械放入真菌培养基、流体硫乙醇酸盐培养基中直接培养。观察记录实验结果。
2 结 果
2.1 染菌器械灭菌效果 压力蒸汽对器械上污染的白色念珠菌的杀灭效果明显优于化学灭菌剂。化学灭菌剂对车针、扩大针上污染的白色念珠菌金黄色葡萄球菌杀灭作用较手机、吸唾器彻底(表1)。
表1 不同方法对指示菌的杀灭率(%)
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器械
名称
氯制剂
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V
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Ag
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2.2 污染TTV，HBsAg器械灭活效果 压力蒸汽能够彻底灭活器械上污染的TTV，HBsAg抗原性。化学灭菌剂不能将所有器械污染的TTV，HBsAg抗原性灭活。
2.3 临床使用后器械灭菌效果 压力蒸汽灭菌对临床使用后器械灭菌效果明显优于化学灭菌剂。经灭菌剂处理的临床使用后器械仍有6件检菌阳性。
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2.4 临床使用后器械病毒污染灭活效果 压力蒸汽灭菌处理能够彻底灭活临床使用后器械上污染的TTV，HBsAg抗原性。化学灭菌剂灭菌处理后器械TTV仍保持阳性、HBsAg抗原性阳性的占11.25%(表2)。表2 不同方法对临床使用后器械灭菌效果(%)
器械
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氯制剂
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2.5 压力蒸汽灭活HBsAg抗原性、TTV所需时间 HBsAg抗原性、TTV对135℃压力蒸汽灭菌耐受性均较强，完全灭活需要10 min。
2.6 器械无菌检查结果 对灭菌后细菌及TTV，HBsAg抗原性检测阴性的器械进行无菌检查。经压力蒸汽灭菌及TTV，HBsAg抗原性灭活的器械，无菌检查均合格；经化学灭菌剂灭菌及HBsAg抗原性灭活的器械有2.69%无菌检查不合格。
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3 讨 论
本次实验研究结果表明，口腔科器械中手机的污染是十分严重的。临床使用后手机污染的细菌平均菌量为900 CFU/件、HBsAg污染明确存在。近年来国外报道的TTV，国内同样发现有感染病例存在，在本次临床检验中检出2件器械有TTV病毒污染。对于车针、扩大针等能够充分暴露于灭菌剂中的器械，即使污染严重，采用戊二醛、含氯灭菌剂灭菌处理，灭菌质量仍可以保证。而对于结构复杂、缝隙较多的口腔器械如污染的手机、吸唾器等，即使将这些器械污染部分全部放入2%碱性戊二醛连续浸泡4 h后，手机检测件数中仍有13.33%检菌阳性、30.00% HBsAg检测阳性；吸唾器检测件数中仍有3.33%检菌阳性、5% HBsAg检测阳性。含氯灭菌剂对手机及吸唾器浸泡灭菌处理结果与戊二醛接近。均难以全部达到应有的灭菌质量。说明化学灭菌剂对手机、吸唾器的浸泡灭菌效果不可靠，并进一步证明，局部擦拭手机及吸唾器表面，由于无法清除因负压回吸到机头内部的粘液、血液以及螺旋凹槽内的附着物，灭菌效果更加无法保证。
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压力蒸汽灭菌法是临床医疗器械传统的灭菌方式。尤其是近年来为适应临床需要而研制生产的新型小型速效压力蒸汽灭菌器为临床器械及时灭菌带来极大方便。这类设备在135℃条件下，作用10 min，即可彻底杀灭器械上附着的各种微生物。本次实验结果证明，人工污染及临床使用后污染的手机、吸唾器、车针、扩大针经压力蒸汽灭菌135℃，作用6 min、8 min后，器械上附着的细菌均被100%杀灭、化学指示卡完全变色、生物指示菌片培养全部阴性，但HBsAg抗原性、TTV则需135℃，作用10 min后全部灭活。根据化学灭菌剂灭菌及压力蒸汽灭菌实验结果说明，TTV不仅对化学灭菌剂抗性较强，对压力蒸汽灭菌亦具有一定的耐受能力。为确保口腔器械灭菌质量，压力蒸汽灭菌在135℃条件下，灭菌时间应保持10 min。
对灭菌后检菌及TTV，HBsAg抗原性检测阴性的器械进行无菌检查。经压力蒸汽灭菌135℃、作用10 min后的器械无菌检查均达到合格标准；经戊二醛及含氯灭菌剂灭菌处理后检菌及HBsAg抗原性检测阴性的器械，无菌检查仍有1.33%及4.07%未达到合格标准。检测结果进一步证明，压力蒸汽灭菌较化学灭菌剂对口腔器械灭菌效果可靠。
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压力蒸汽灭菌效果可靠、操作简便、对环境无污染，是目前口腔科器械灭菌切实可行的方法之一。车针、扩大针经压力蒸汽灭菌处理对与戊二醛及含氯灭菌剂灭菌处理比较，未发现临床使用寿命上的差异；手机选择压力蒸汽灭菌方式，必须是耐高温处理的机型；实验用吸唾器均为高分子制品，经135℃作用10 min重复处理3次，不影响临床使用效果。
总之，小型速效压力蒸汽灭菌器灭菌时间短、便于操作，在临床口腔器械灭菌处理工作中具有良好的应用前景。
武迎宏(北京医科大学人民医院， 北京 100044)
罗薇(北京医科大学人民医院， 北京 100044)
高承志(北京医科大学人民医院， 北京 100044)
邓小虹(北京市卫生防疫站， 北京 100073)
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李盈洁(北京同心行科贸有限公司， 北京 100007)
参考文献
1，冷泰俊. 乙型病毒性肝炎的医源性传播问题[J]. 中华医院感染学杂志, 1991, 1(1): 50.
2，马飞, 张立红, 薛毅, 等. 口腔科常用消毒剂抑菌性能污染监测[J]. 中华医院感染学杂志, 1998, 8(3): 171.
3，刘伟红, 丁丽, 刘伟, 等. 口腔科器械乙型肝炎病毒表面抗原和e抗原污染情况调查[J]. 中华医院感染学杂志, 1998, 8(1): 36., http://www.100md.com