食管鳞癌组织中人乳头状瘤病毒感染情况检测
食管鳞癌组织中人乳头状瘤病毒感染情况检测
邢鲁奇 李淑凤 刘鸿瑞 任宗仁 潘建国 申玮 吴慧
关键词：人乳头状瘤病毒(HPV)；食管癌 研究已证实人乳头状瘤病毒(HPV)与女性生殖道某些肿瘤的发生关系密切[1],人体许多部位的肿瘤中都检出过HPV,少数学者也对食管癌中的HPV感染进行过研究,但文献报道研究结果差别很大[2,3]。本研究应用PCR法对100份食管癌标本中的HPV感染情况进行检测,并结合食管癌的病理大体分型进行分析。
一、材料与方法
1.材料：100份石蜡包埋的食管癌组织标本来自洛阳医学高等专科学校附属医院病理科1984～1994年间外检材料。按照食管癌的病理大体分型,随机选择溃疡型、蕈伞型、缩窄型和髓质型食管癌各25份。
, 百拇医药
2.通用引物PCR法:引物序列:5′-TTTGTTACTGTGGTAGATACTAC-3′，5′-GAAAAATAAACTGTAAATCATATTC-3′，切10 μm厚组织切片置微量离心管内,依次用二甲苯、无水乙醇处理,真空干燥后用含蛋白酶K的消化液消化3 h,阳性对照含HPV质粒,阴性对照内由肝组织取代标本。扩增条件：94℃预变性3 min,94℃变性1 min,40℃复性2 min,72℃延伸1.5 min,累计循环40个周期。扩增后的扩增液经琼脂糖凝胶电泳分离,溴乙锭染色后观察结果。
3.多重PCR法：试剂盒购自中国医学科学院基础医学研究所生物物理室。试剂盒扩增液内含3对引物，1次扩增可检测出4型HPV DNA，检测方法同通用引物PCR法。
二、结果
1.100份食管癌标本经通用引物PCR法检测后共检出HPV DNA阳性(图1)26份(26%),其中溃疡型食管癌中阳性5份(5/25),蕈伞型中阳性3份(3/25),缩窄型中阳性12份(12/25),髓质型中阳性6份(6/25)。
, 百拇医药
1、3、4：阳性标本；2：阴性标本；5：阴性对照；6：阳性对照；7：标记物：PBR322 HinfⅠ
图1 食管鳞癌标本通用引物PCR法扩增后
电泳图
2.多重PCR法对经通用引物PCR法检测HPV阳性的26份标本中的20份进行检测，发现HPV6/11型阳性5份，其中缩窄型4份、髓质型1份；HPV16型阳性12份，其中缩窄型4份、髓质型5份、蕈伞型1份、溃疡型2份；HPV18型阳性3份，其中缩窄型、溃疡型和蕈伞型各1份。
三、讨论
随着分子生物学技术的进展和人们对HPV在女性生殖道某些肿瘤发生中所起作用的深入研究,一些学者也对食管癌中的HPV感染状况进行了检测，但研究结果差异很大,病毒检出率从零到50%以上。我们考虑到这些差异是否与使用方法不同和每组检测例数较少有关,因此本研究采用了高敏感度的通用引物PCR法和能同时检测出4型HPV的多重PCR法并选择了100份标本进行检测。检测结果证实我国食管癌中的确存在HPV的感染。
, 百拇医药
现有研究已证实生殖道的尖锐湿疣是由HPV感染引起,其生长方式多为外生乳头或菜花状,如果某些恶性肿瘤发生也与HPV感染有关,其生长方式是否也是以外生性为主呢?这个一直是我们试图探索的问题,我们曾在大体形态上把肺癌分为乳头状生长、浸润性生长和浸润性生长伴向管腔内突出斑块病变3种方式并以此来研究HPV感染与肺癌的关系[4],结果是大体形态上呈乳头状生长的肺癌中没有检测到HPV 。有学者曾对食管鳞状上皮乳头状瘤进行检测[5],HPV的检出率也非常低(1/29,1/23)。本研究中缩窄型食管癌中的HPV检出率最高(12/25),以外生性生长为主的蕈伞型食管癌中的HPV检出率最低(3/25)。结果表明，食管鳞癌中存在HPV感染，HPV可能与某些食管癌的发生有着一定的关系。缩窄型食管癌中的感染率较高，存在HPV感染的食管癌的大体生长方式并不以外生性为主。
基金项目：河南省教委自然科学基础研究项目基金资助(95-474005)
, 百拇医药 作者单位：邢鲁奇(北京协和医院病理科)
李淑凤(471003 洛阳医学高等专科学校附属医院病理科)
参考文献
1 Crum CP, Nuovo GJ. Genital papillomaviruses and related neoplasmas. New York:Raven Press, 1991.1-230.
2 Fidalgo PO, Cravo ML,Chaves PP,et al. High prevalence of human papillomavirus in squamous cell carcinoma and matched normal esophageal mucosa: assessment by polymerase chain reaction.Cancer,1995,76:1522-1528.
, 百拇医药
3 Toh Y, Kuwano H, Tanaka S, et al. Detection of human papillomavirus DNA in esophageal carcinoma in Japan by polymerase chain reaction.Cancer,1992,70:2234-2238.
4 刘鸿瑞,邢鲁奇,司静懿,等.肺鳞癌人乳头状瘤病毒感染的原位杂交检测和观察.中华病理学杂志,1994,23:299-301.
5 Poljak M,Orlowska J,Cerar A. Human papillomavirus infection in esophageal squamous cell papillomas: a study of 29 lesions. Anticancer Res,1995,15:965-969., 百拇医药
邢鲁奇 李淑凤 刘鸿瑞 任宗仁 潘建国 申玮 吴慧
关键词：人乳头状瘤病毒(HPV)；食管癌 研究已证实人乳头状瘤病毒(HPV)与女性生殖道某些肿瘤的发生关系密切[1],人体许多部位的肿瘤中都检出过HPV,少数学者也对食管癌中的HPV感染进行过研究,但文献报道研究结果差别很大[2,3]。本研究应用PCR法对100份食管癌标本中的HPV感染情况进行检测,并结合食管癌的病理大体分型进行分析。
一、材料与方法
1.材料：100份石蜡包埋的食管癌组织标本来自洛阳医学高等专科学校附属医院病理科1984～1994年间外检材料。按照食管癌的病理大体分型,随机选择溃疡型、蕈伞型、缩窄型和髓质型食管癌各25份。
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2.通用引物PCR法:引物序列:5′-TTTGTTACTGTGGTAGATACTAC-3′，5′-GAAAAATAAACTGTAAATCATATTC-3′，切10 μm厚组织切片置微量离心管内,依次用二甲苯、无水乙醇处理,真空干燥后用含蛋白酶K的消化液消化3 h,阳性对照含HPV质粒,阴性对照内由肝组织取代标本。扩增条件：94℃预变性3 min,94℃变性1 min,40℃复性2 min,72℃延伸1.5 min,累计循环40个周期。扩增后的扩增液经琼脂糖凝胶电泳分离,溴乙锭染色后观察结果。
3.多重PCR法：试剂盒购自中国医学科学院基础医学研究所生物物理室。试剂盒扩增液内含3对引物，1次扩增可检测出4型HPV DNA，检测方法同通用引物PCR法。
二、结果
1.100份食管癌标本经通用引物PCR法检测后共检出HPV DNA阳性(图1)26份(26%),其中溃疡型食管癌中阳性5份(5/25),蕈伞型中阳性3份(3/25),缩窄型中阳性12份(12/25),髓质型中阳性6份(6/25)。
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1、3、4：阳性标本；2：阴性标本；5：阴性对照；6：阳性对照；7：标记物：PBR322 HinfⅠ
图1 食管鳞癌标本通用引物PCR法扩增后
电泳图
2.多重PCR法对经通用引物PCR法检测HPV阳性的26份标本中的20份进行检测，发现HPV6/11型阳性5份，其中缩窄型4份、髓质型1份；HPV16型阳性12份，其中缩窄型4份、髓质型5份、蕈伞型1份、溃疡型2份；HPV18型阳性3份，其中缩窄型、溃疡型和蕈伞型各1份。
三、讨论
随着分子生物学技术的进展和人们对HPV在女性生殖道某些肿瘤发生中所起作用的深入研究,一些学者也对食管癌中的HPV感染状况进行了检测，但研究结果差异很大,病毒检出率从零到50%以上。我们考虑到这些差异是否与使用方法不同和每组检测例数较少有关,因此本研究采用了高敏感度的通用引物PCR法和能同时检测出4型HPV的多重PCR法并选择了100份标本进行检测。检测结果证实我国食管癌中的确存在HPV的感染。
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现有研究已证实生殖道的尖锐湿疣是由HPV感染引起,其生长方式多为外生乳头或菜花状,如果某些恶性肿瘤发生也与HPV感染有关,其生长方式是否也是以外生性为主呢?这个一直是我们试图探索的问题,我们曾在大体形态上把肺癌分为乳头状生长、浸润性生长和浸润性生长伴向管腔内突出斑块病变3种方式并以此来研究HPV感染与肺癌的关系[4],结果是大体形态上呈乳头状生长的肺癌中没有检测到HPV 。有学者曾对食管鳞状上皮乳头状瘤进行检测[5],HPV的检出率也非常低(1/29,1/23)。本研究中缩窄型食管癌中的HPV检出率最高(12/25),以外生性生长为主的蕈伞型食管癌中的HPV检出率最低(3/25)。结果表明，食管鳞癌中存在HPV感染，HPV可能与某些食管癌的发生有着一定的关系。缩窄型食管癌中的感染率较高，存在HPV感染的食管癌的大体生长方式并不以外生性为主。
基金项目：河南省教委自然科学基础研究项目基金资助(95-474005)
, 百拇医药 作者单位：邢鲁奇(北京协和医院病理科)
李淑凤(471003 洛阳医学高等专科学校附属医院病理科)
参考文献
1 Crum CP, Nuovo GJ. Genital papillomaviruses and related neoplasmas. New York:Raven Press, 1991.1-230.
2 Fidalgo PO, Cravo ML,Chaves PP,et al. High prevalence of human papillomavirus in squamous cell carcinoma and matched normal esophageal mucosa: assessment by polymerase chain reaction.Cancer,1995,76:1522-1528.
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3 Toh Y, Kuwano H, Tanaka S, et al. Detection of human papillomavirus DNA in esophageal carcinoma in Japan by polymerase chain reaction.Cancer,1992,70:2234-2238.
4 刘鸿瑞,邢鲁奇,司静懿,等.肺鳞癌人乳头状瘤病毒感染的原位杂交检测和观察.中华病理学杂志,1994,23:299-301.
5 Poljak M,Orlowska J,Cerar A. Human papillomavirus infection in esophageal squamous cell papillomas: a study of 29 lesions. Anticancer Res,1995,15:965-969., 百拇医药