c-erbB-2基因在乳腺癌中的研究进展
c-erbB-2基因在乳腺癌中的研究进展
庞宗国 步宏
关键词：c-erbB-2(HER-2/neu)；乳腺癌 c-erbB-2(HER-2/neu)在乳腺癌中过度表达的意义及其检测方法一直是人们关注的热点，近来更取得了突破性进展[1，2]。人们发现c-erbB-2高表达乳腺癌患者对三苯氧胺治疗、单独的激素疗法、以及环磷酰胺、甲氨喋呤、5-氟脲嘧啶联合化疗产生耐受，而对泰素、阿霉素(adriamycin)治疗变得更敏感。近年来，一种针对HER-2的单克隆抗体类药物(Herceptin)研制成功，并已得到美国食品及药物管理局(FDA)许可用于临床治疗三期乳腺癌，它只针对c-erbB-2高表达的肿瘤细胞产生作用，可有效延长患者生存期并使其生活质量得到改善，是一种极有前途的疗法。因此，乳腺癌患者有无c-erbB-2高表达，如何客观准确地对其加以检测，对患者治疗方法的选择以及预后具有极为重要的意义。
, 百拇医药
一、c-erbB-2检测方法的分类及比较
检测HER-2/neu表达状况的方法可分为3类：(1)反映DNA扩增情况，包括Southern印迹、狭缝印迹、斑点印迹、PCR、原位杂交(ISH)及荧光原位杂交(FISH)；(2)反映mRNA的过度表达，包括Northern印迹、狭缝印迹及原位杂交；(3)反映HER-2蛋白的过度表达，包括Western印迹、免疫和免疫组织化学法。总的来看，FISH和免疫组织化学是更为适宜的方法。它们都可用于新鲜或石蜡包埋组织，并能保持原有组织结构，在可视条件下原位识别肿瘤与非肿瘤组织，从而免受组织不纯的干扰。在1998年9月，免疫组织化学法HercepTest试剂盒(DAKO公司,Carpinteria,CA)和FISH法(INFORM基因检测系统)都得到了FDA许可用于筛选c-erbB-2高表达的乳腺癌患者，指导临床选择Herceptin的治疗对象。在较好控制标本固定等处理条件下，二者检测结果具有较高的协同性[3]。两者相比较，FISH虽敏感性较高，但技术上较为复杂，很多实验室缺乏开展条件，观察结果需荧光显微镜且观察者必须具备相当的经验；人员的培训，设施的建立，都需要一段较长的时间；并且其操作时间为免疫组织化学的2倍，观察结果时间为免疫组织化学的3倍，花费金钱为免疫组织化学的20多倍，切片需-20℃低温保存等[3]。其技术方法的不足还在于，3%～7%的HER-2/neu高表达患者并不伴有HER-2/neu基因扩增[4]，对此，FISH法可能产生假阴性。而免疫组织化学法在以上方面显示了较大的优势，应为实际工作的首选方法。
, 百拇医药
二、免疫组织化学法中应注意的问题
1.待检组织的影响：新鲜或冷冻组织：DNA及抗原分子保存好，是理想的检测对象，免疫组织化学与FISH结果一致性很高。但组织来源有限且不能进行回顾性研究。
2.石蜡包埋组织：来源最广，是大量开展免疫组织化学的主要对象。但标本的处理对HER-2抗原分子的保存将产生较为复杂的作用，最主要的是受固定剂种类和固定时间影响。Penault-Llorca等[5]认为，使用A-F液(alcoholic formalin)充分固定的效果最佳。其次是标本保存方法、保存时间等因素也会带来一定的影响，将使抗原不同程度的损失而导致偏差。在不同的实验室，不一致的方法选用，检测结果所受影响程度也将不同。抗原修复法的应用，可提高敏感性，但也使问题变的更为复杂甚至导致假阳性发生。
3.染色试剂的选择：有多种商业或非商业试剂可供选用，它们可能带来不同的结果，在选择时要注意其敏感性和特异性等情况。
, 百拇医药
4.评分标准的影响：FDA推荐的HercepTest结果评分标准为：结果分为0～3+：0，完全阴性；1+，超过10%的癌细胞胞膜染色，染色间断分布，未环绕胞膜；2+，超过10%的癌细胞胞膜弱到中度阳性，染色连续，环绕整个胞膜；3+，超过10%的癌细胞胞膜强阳性，染色连续，环绕整个胞膜；0～1+判为阴性；2+为弱阳性，3+为强阳性。
由于免疫组织化学依靠肉眼观察判定结果，因此，目前此评分标准尚存在较大争议。Timothy等在控制标本处理，采用水浴热致抗原修复法(HIER)条件下，对100例石蜡包埋切片做HercepTest染色，按FDA推荐法判断结果，所得假阳性率为58.4%[6]。另一有趣的发现是，癌旁上皮也有不同程度的阳性表达(0～3+)，若用肿瘤得分减去癌旁上皮得分后的结果来评分，假阳性率降为6.8%。因此，他们认为现在的评分标准过宽，会增加假阳性率，并指出用正常上皮染色情况作为内对照也许是可行的纠正办法。
对c-erbB-2表达状况检测的研究可以说才刚刚起步，今后努力的方向：(1)合理选择染色试剂和方法；(2)控制和统一标本的固定、保存等处理方法；(3)探索更好的结果评分标准；(4)提高技术方法的自动化程度。由于c-erbB-2表达状况对临床乳腺癌患者的治疗和预后具有巨大价值，对它的研究将会愈加深入。
, 百拇医药
作者单位：庞宗国(610041 成都，华西医科大学附属第一医院病理科 Email: ppzg@21cn.com)
步宏(610041 成都，华西医科大学附属第一医院病理科 Email: ppzg@21cn.com)
参考文献
[1]Allred DC, Harvey JM, Berardo M，et al. Prognostic and predictive factors in breast cancer by immunohistochemical analysis. Mod Pathol, 1998,11:155-168.
[2]Andrulis DC, Bull SB, Blackstein ME, et al. Neu/erbB-2 amplification idetifies a poor-prognosis group of women with node-negative breast cancer. Toronto Breast Cancer Study Group. J Clin Oncol, 1998,16:1340-1349.
, 百拇医药
[3]Jacobs TW, Gown AM, Yaziji H, et al. Comparison of fluorescence in situ hybridization and immunohistochemistry for the evaluation of HER-2/neu in breast cancer. J Clin Oncol, 1999,17:1974-1982.
[4]Pauletti G, Godolphin W, Press MF, et al.Detection and quantitation of HER-2/neu gene amplification in human breast cancer archival material using fluorescence in situ hybridization. Oncogene,1996,13:63-72.
[5]Penault-Llorca F, Adelaide J, Houvenaeghel G,et al. Optimization of immunohistochemical detection of ERBB2 in human breast cancer: impact of fixation. J Pathol, 1994,173:65-75.
[6]Jacobs TW, Gown AM, Yaziji H, et al. Specificity of HercepTest in determining HER-2/neu status of breast cancers using the United States Food and Drug Administration-approved scoring system. J Clin Oncol, 1999,17:1983-1987., 百拇医药
庞宗国 步宏
关键词：c-erbB-2(HER-2/neu)；乳腺癌 c-erbB-2(HER-2/neu)在乳腺癌中过度表达的意义及其检测方法一直是人们关注的热点，近来更取得了突破性进展[1，2]。人们发现c-erbB-2高表达乳腺癌患者对三苯氧胺治疗、单独的激素疗法、以及环磷酰胺、甲氨喋呤、5-氟脲嘧啶联合化疗产生耐受，而对泰素、阿霉素(adriamycin)治疗变得更敏感。近年来，一种针对HER-2的单克隆抗体类药物(Herceptin)研制成功，并已得到美国食品及药物管理局(FDA)许可用于临床治疗三期乳腺癌，它只针对c-erbB-2高表达的肿瘤细胞产生作用，可有效延长患者生存期并使其生活质量得到改善，是一种极有前途的疗法。因此，乳腺癌患者有无c-erbB-2高表达，如何客观准确地对其加以检测，对患者治疗方法的选择以及预后具有极为重要的意义。
, 百拇医药
一、c-erbB-2检测方法的分类及比较
检测HER-2/neu表达状况的方法可分为3类：(1)反映DNA扩增情况，包括Southern印迹、狭缝印迹、斑点印迹、PCR、原位杂交(ISH)及荧光原位杂交(FISH)；(2)反映mRNA的过度表达，包括Northern印迹、狭缝印迹及原位杂交；(3)反映HER-2蛋白的过度表达，包括Western印迹、免疫和免疫组织化学法。总的来看，FISH和免疫组织化学是更为适宜的方法。它们都可用于新鲜或石蜡包埋组织，并能保持原有组织结构，在可视条件下原位识别肿瘤与非肿瘤组织，从而免受组织不纯的干扰。在1998年9月，免疫组织化学法HercepTest试剂盒(DAKO公司,Carpinteria,CA)和FISH法(INFORM基因检测系统)都得到了FDA许可用于筛选c-erbB-2高表达的乳腺癌患者，指导临床选择Herceptin的治疗对象。在较好控制标本固定等处理条件下，二者检测结果具有较高的协同性[3]。两者相比较，FISH虽敏感性较高，但技术上较为复杂，很多实验室缺乏开展条件，观察结果需荧光显微镜且观察者必须具备相当的经验；人员的培训，设施的建立，都需要一段较长的时间；并且其操作时间为免疫组织化学的2倍，观察结果时间为免疫组织化学的3倍，花费金钱为免疫组织化学的20多倍，切片需-20℃低温保存等[3]。其技术方法的不足还在于，3%～7%的HER-2/neu高表达患者并不伴有HER-2/neu基因扩增[4]，对此，FISH法可能产生假阴性。而免疫组织化学法在以上方面显示了较大的优势，应为实际工作的首选方法。
, 百拇医药
二、免疫组织化学法中应注意的问题
1.待检组织的影响：新鲜或冷冻组织：DNA及抗原分子保存好，是理想的检测对象，免疫组织化学与FISH结果一致性很高。但组织来源有限且不能进行回顾性研究。
2.石蜡包埋组织：来源最广，是大量开展免疫组织化学的主要对象。但标本的处理对HER-2抗原分子的保存将产生较为复杂的作用，最主要的是受固定剂种类和固定时间影响。Penault-Llorca等[5]认为，使用A-F液(alcoholic formalin)充分固定的效果最佳。其次是标本保存方法、保存时间等因素也会带来一定的影响，将使抗原不同程度的损失而导致偏差。在不同的实验室，不一致的方法选用，检测结果所受影响程度也将不同。抗原修复法的应用，可提高敏感性，但也使问题变的更为复杂甚至导致假阳性发生。
3.染色试剂的选择：有多种商业或非商业试剂可供选用，它们可能带来不同的结果，在选择时要注意其敏感性和特异性等情况。
, 百拇医药
4.评分标准的影响：FDA推荐的HercepTest结果评分标准为：结果分为0～3+：0，完全阴性；1+，超过10%的癌细胞胞膜染色，染色间断分布，未环绕胞膜；2+，超过10%的癌细胞胞膜弱到中度阳性，染色连续，环绕整个胞膜；3+，超过10%的癌细胞胞膜强阳性，染色连续，环绕整个胞膜；0～1+判为阴性；2+为弱阳性，3+为强阳性。
由于免疫组织化学依靠肉眼观察判定结果，因此，目前此评分标准尚存在较大争议。Timothy等在控制标本处理，采用水浴热致抗原修复法(HIER)条件下，对100例石蜡包埋切片做HercepTest染色，按FDA推荐法判断结果，所得假阳性率为58.4%[6]。另一有趣的发现是，癌旁上皮也有不同程度的阳性表达(0～3+)，若用肿瘤得分减去癌旁上皮得分后的结果来评分，假阳性率降为6.8%。因此，他们认为现在的评分标准过宽，会增加假阳性率，并指出用正常上皮染色情况作为内对照也许是可行的纠正办法。
对c-erbB-2表达状况检测的研究可以说才刚刚起步，今后努力的方向：(1)合理选择染色试剂和方法；(2)控制和统一标本的固定、保存等处理方法；(3)探索更好的结果评分标准；(4)提高技术方法的自动化程度。由于c-erbB-2表达状况对临床乳腺癌患者的治疗和预后具有巨大价值，对它的研究将会愈加深入。
, 百拇医药
作者单位：庞宗国(610041 成都，华西医科大学附属第一医院病理科 Email: ppzg@21cn.com)
步宏(610041 成都，华西医科大学附属第一医院病理科 Email: ppzg@21cn.com)
参考文献
[1]Allred DC, Harvey JM, Berardo M，et al. Prognostic and predictive factors in breast cancer by immunohistochemical analysis. Mod Pathol, 1998,11:155-168.
[2]Andrulis DC, Bull SB, Blackstein ME, et al. Neu/erbB-2 amplification idetifies a poor-prognosis group of women with node-negative breast cancer. Toronto Breast Cancer Study Group. J Clin Oncol, 1998,16:1340-1349.
, 百拇医药
[3]Jacobs TW, Gown AM, Yaziji H, et al. Comparison of fluorescence in situ hybridization and immunohistochemistry for the evaluation of HER-2/neu in breast cancer. J Clin Oncol, 1999,17:1974-1982.
[4]Pauletti G, Godolphin W, Press MF, et al.Detection and quantitation of HER-2/neu gene amplification in human breast cancer archival material using fluorescence in situ hybridization. Oncogene,1996,13:63-72.
[5]Penault-Llorca F, Adelaide J, Houvenaeghel G,et al. Optimization of immunohistochemical detection of ERBB2 in human breast cancer: impact of fixation. J Pathol, 1994,173:65-75.
[6]Jacobs TW, Gown AM, Yaziji H, et al. Specificity of HercepTest in determining HER-2/neu status of breast cancers using the United States Food and Drug Administration-approved scoring system. J Clin Oncol, 1999,17:1983-1987., 百拇医药