临床依赖利福平分支杆菌的初步研究
临床依赖利福平分支杆菌的初步研究
钟敏 温博海 王易伟 王安容 陈荣 陈炜
关键词：利福平；分支杆菌 我们在实验中发现有的分支杆菌在含利福平(R)培养基中菌落生长粗大旺盛, 没有R反而生长不良。即此类分支杆菌不但不能被R杀死，R反而促进其生长。我们把这类菌称为依赖利福平分支杆菌[1] (依R菌)。为了进一步阐明该类菌的特点，我们就其菌株的依R程度、菌落及菌体的形态特点等进行了研究，以期为依R菌的定义和鉴定提供依据。
材料与方法 实验菌株从我院肺结核病人的痰标本分离。质控菌株(WHO9806敏感株、9809耐R株)和R原药粉由卫生部结核病控制中心参比实验室提供，噻吩-2-羧酸肼(TCH)药粉由北京结核病控制研究所中心实验室提供(在此感谢)。分支杆菌培养、菌种鉴定和抗酸染色方法按《结核病诊断细菌学检验规程》[2]进行。 R浓度梯度试验：从分支杆菌菌株库中选出在含R培养基中生长更旺盛菌株用L-J培养基复苏培养。选取单个菌落制备10-4 μg/ml的菌液，取0.1 ml分别接种于对照管和含不同R浓度(50、100、200～800 μg/ml)的培养管，37 ℃孵育4周观察记录结果：包括各实验管菌落形态、数量及菌落生长最旺盛R管(依R管)和对照管中全部菌落的重量。抗酸染色：取菌落生长最旺盛R管和对照管中的菌落分别涂片抗酸染色，镜下观察比较菌体形态和染色特征。
, 百拇医药
结果 结果显示：质控敏感株对照管菌落生长良好，R管均未生长；质控耐R株和临床耐R株对照管和R管菌落生长的数量和形态均无明显差别。1号依R菌株对照管和R 50～400 μg/ml各管的菌落数和菌落形态均有明显差别，4号依R菌株对照管和R 100～400 μg/ml各管的菌落数和菌落形态均有明显差别，其它各号依R菌株对照管和R管的菌落数无明显差别，但各依R菌株在不同浓度R管的菌落形态与对照管有明显差别。依R管中菌落呈淡黄色、粗糙、凸起、花菜样、生长旺盛；非依R管(对照管)菌落呈淡黄色 、干燥、扁平、生长不良。生长最旺盛R管与对照管菌落的重量比为2.2～5，平均3.1。依R管与对照管菌落涂片抗酸染色可见依R管内细菌菌体粗大，染色质深、染色颗粒明显；对照管和非依R管内细菌菌体细小，染色质浅、均匀、染色颗粒不明显。22株依R菌经菌种鉴定均为结核分支杆菌。
讨论 WHO估计当今约有2/3的结核病患者处于发生耐药病例的危险之中，全国1965～1991年结核病初治耐R率为1.8%～34.6%，复治患者不少地区在40%以上，有的高达80%[3，4] 。高耐R发生率，加上临床依R的产生，无疑给结核病的治疗和疫情控制带来新的严峻的问题。
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R浓度梯度试验结果显示：依R菌对R的依赖表现为相对依赖性，即依R菌对R的依赖性仅限于某个浓度范围(R：50～600 μg/ml)；不同的菌株其依赖范围不同，但大都在R 100～300 μg/ml范围内生长最盛。这说明其依赖性的产生可能与长期使用某种浓度的R类药物有关 。结果提示高浓度R对依R菌仍有杀菌作用。
研究证明：依R管与非依R管(对照管)中菌落(菌体)形态和染色均有明显的差异，同样接种菌量其生长菌落的重量差则为2.2～5倍，可见依R菌在适当R管中菌落生长的旺盛程度。临床病例资料显示：初治肺结核依R菌感染者，经3个月标准短化(含R)，临床症状加重，X线胸片示病变增多，痰菌持续阳性[1]。说明R对依R菌不但不能杀灭，反而促进生长，并使其毒力增强。
目前我们所发现的22株依R菌均为结核分支杆菌，其分子流行病学的意义如何，正在进一步研究。我们认为：依R菌在含R培养基中菌落生长更旺盛和菌体粗大、浓染的特征，可作为依R菌初步鉴定的依据。
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志谢 上海市疾病预防控制中心胡忠义主任医师对课题的建议
基金项目：重庆市医学重点资助项目(99-1002)
作者单位：钟敏(400020 重庆市肺科医院)
王易伟(400020 重庆市肺科医院)
王安容(400020 重庆市肺科医院)
温博海(第三军医大学)
陈荣(第三军医大学)
陈炜(第三军医大学)
参考文献
[1]钟敏，娄乐山，温博海，等. 分支杆菌依赖利福平的实验观察. 中华结核和呼吸杂志，2000，23：104-105.
[2]中国防痨协会. 结核病诊断细菌学检验规程. 中国防痨杂志，1996,18:28.
[3]宋守忠. 肺结核病耐药性调查的现状. 宋文虎，肖成志，宋礼章，主编. 结核病学进展. 北京：北京科学技术出版社，1996.168-182.
[4]屠德华. 耐药性结核病的流行病学特征和意义. 中华结核和呼吸杂志，1997,6:327-328., 百拇医药
钟敏 温博海 王易伟 王安容 陈荣 陈炜
关键词：利福平；分支杆菌 我们在实验中发现有的分支杆菌在含利福平(R)培养基中菌落生长粗大旺盛, 没有R反而生长不良。即此类分支杆菌不但不能被R杀死，R反而促进其生长。我们把这类菌称为依赖利福平分支杆菌[1] (依R菌)。为了进一步阐明该类菌的特点，我们就其菌株的依R程度、菌落及菌体的形态特点等进行了研究，以期为依R菌的定义和鉴定提供依据。
材料与方法 实验菌株从我院肺结核病人的痰标本分离。质控菌株(WHO9806敏感株、9809耐R株)和R原药粉由卫生部结核病控制中心参比实验室提供，噻吩-2-羧酸肼(TCH)药粉由北京结核病控制研究所中心实验室提供(在此感谢)。分支杆菌培养、菌种鉴定和抗酸染色方法按《结核病诊断细菌学检验规程》[2]进行。 R浓度梯度试验：从分支杆菌菌株库中选出在含R培养基中生长更旺盛菌株用L-J培养基复苏培养。选取单个菌落制备10-4 μg/ml的菌液，取0.1 ml分别接种于对照管和含不同R浓度(50、100、200～800 μg/ml)的培养管，37 ℃孵育4周观察记录结果：包括各实验管菌落形态、数量及菌落生长最旺盛R管(依R管)和对照管中全部菌落的重量。抗酸染色：取菌落生长最旺盛R管和对照管中的菌落分别涂片抗酸染色，镜下观察比较菌体形态和染色特征。
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结果 结果显示：质控敏感株对照管菌落生长良好，R管均未生长；质控耐R株和临床耐R株对照管和R管菌落生长的数量和形态均无明显差别。1号依R菌株对照管和R 50～400 μg/ml各管的菌落数和菌落形态均有明显差别，4号依R菌株对照管和R 100～400 μg/ml各管的菌落数和菌落形态均有明显差别，其它各号依R菌株对照管和R管的菌落数无明显差别，但各依R菌株在不同浓度R管的菌落形态与对照管有明显差别。依R管中菌落呈淡黄色、粗糙、凸起、花菜样、生长旺盛；非依R管(对照管)菌落呈淡黄色 、干燥、扁平、生长不良。生长最旺盛R管与对照管菌落的重量比为2.2～5，平均3.1。依R管与对照管菌落涂片抗酸染色可见依R管内细菌菌体粗大，染色质深、染色颗粒明显；对照管和非依R管内细菌菌体细小，染色质浅、均匀、染色颗粒不明显。22株依R菌经菌种鉴定均为结核分支杆菌。
讨论 WHO估计当今约有2/3的结核病患者处于发生耐药病例的危险之中，全国1965～1991年结核病初治耐R率为1.8%～34.6%，复治患者不少地区在40%以上，有的高达80%[3，4] 。高耐R发生率，加上临床依R的产生，无疑给结核病的治疗和疫情控制带来新的严峻的问题。
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R浓度梯度试验结果显示：依R菌对R的依赖表现为相对依赖性，即依R菌对R的依赖性仅限于某个浓度范围(R：50～600 μg/ml)；不同的菌株其依赖范围不同，但大都在R 100～300 μg/ml范围内生长最盛。这说明其依赖性的产生可能与长期使用某种浓度的R类药物有关 。结果提示高浓度R对依R菌仍有杀菌作用。
研究证明：依R管与非依R管(对照管)中菌落(菌体)形态和染色均有明显的差异，同样接种菌量其生长菌落的重量差则为2.2～5倍，可见依R菌在适当R管中菌落生长的旺盛程度。临床病例资料显示：初治肺结核依R菌感染者，经3个月标准短化(含R)，临床症状加重，X线胸片示病变增多，痰菌持续阳性[1]。说明R对依R菌不但不能杀灭，反而促进生长，并使其毒力增强。
目前我们所发现的22株依R菌均为结核分支杆菌，其分子流行病学的意义如何，正在进一步研究。我们认为：依R菌在含R培养基中菌落生长更旺盛和菌体粗大、浓染的特征，可作为依R菌初步鉴定的依据。
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志谢 上海市疾病预防控制中心胡忠义主任医师对课题的建议
基金项目：重庆市医学重点资助项目(99-1002)
作者单位：钟敏(400020 重庆市肺科医院)
王易伟(400020 重庆市肺科医院)
王安容(400020 重庆市肺科医院)
温博海(第三军医大学)
陈荣(第三军医大学)
陈炜(第三军医大学)
参考文献
[1]钟敏，娄乐山，温博海，等. 分支杆菌依赖利福平的实验观察. 中华结核和呼吸杂志，2000，23：104-105.
[2]中国防痨协会. 结核病诊断细菌学检验规程. 中国防痨杂志，1996,18:28.
[3]宋守忠. 肺结核病耐药性调查的现状. 宋文虎，肖成志，宋礼章，主编. 结核病学进展. 北京：北京科学技术出版社，1996.168-182.
[4]屠德华. 耐药性结核病的流行病学特征和意义. 中华结核和呼吸杂志，1997,6:327-328., 百拇医药