肺癌bcl-2、C-myc表达及细胞凋亡
肺癌bcl-2、C-myc表达及细胞凋亡
王国凤 陈培辉 周燕
关键词：肺癌；bcl-2；C-myc；细胞凋亡
细胞凋亡是与生物体发育及组织更新有关的生理性细胞死亡过程。近年发现凋亡异常与肿瘤 的发生发展有关。实验证明凋亡受到许多相关基因严密的正负调控[1]。在体内调 控凋亡的 因素及其相互作用的关系更复杂，但这方面的报道少见且结果不一。本文对我院手术切除的 90例肺癌进行bcl-2、C-myc及细胞凋亡水平的检测，并探讨它们之间的关系及临床病理学 意义。
材料与方法 检测标本为我科1993～1996年档案材料。90例肺癌中，男71例，女19例。年龄33～72岁。组 织学类型：鳞癌29例，腺癌27例，细支气管肺泡癌13例，粘液表皮样癌4例，小细胞未分化 癌5例，大细胞癌12例。肺癌临床分期按国际抗癌联盟(UICC)1997年标准，其中Ⅰ期35例， Ⅱ期42例，Ⅲ+Ⅳ期13例。14例肺良性病变包括结核球，炎性假瘤，肺大泡，支气管扩张及 肺外伤。
, 百拇医药
以S-P免疫组化法(链霉菌抗生物素蛋白过氧化酶连接法)对肺癌bcl-2、C-myc表达进 行检测 ，bcl-2 Ⅰ抗(100)及C-myc Ⅰ抗(9E10)浓缩型试剂工作浓度均为1∶60，二氨基联 苯胺(DAB)显色。
以TUNEL(TdT-mediated dUTP-x nick end labeling)法原位标记凋亡细胞。TUNEL试剂盒 为 德国保灵曼原装产品。实验前试剂配制按产品说明书。五溴-四氯-三吲哚磷酸酯/氮蓝四唑(BCIP/NBT)显色，水性封片剂封片。
结果判断：bcl-2阳性位于胞膜及胞浆，C-myc阳性位于胞浆及胞核，呈棕黄色颗粒状，背 景 清晰。凋亡细胞呈蓝黑色，散在。以每高倍视野(HPF 10×40)凋亡细胞数判断凋亡水平。 高级数凋亡(++)：>5个/HPF，低级数凋亡(+)：≤5个/HPF。
实验时，均设立阳性及阴性对照。
, 百拇医药
统计学处理：采用卡方检验及确切概率法。
结果 肺癌bcl-2、C-myc表达及细胞凋亡：肺癌bcl-2表达率31%(28/90)，C-myc表 达率62%(56/90)，高级数凋亡率48%(43/90)。bcl-2、C-myc表达及细胞凋亡水 平与肺 癌组 织类型、分化、转移及临床分期无关。bcl-2表达者高级数凋亡率(29%，8/28)明显低 于 bcl-2阴性者的高级数凋亡率(56%，35/62)(χ2=6.009，P<0.05)。C-myc表 达率显著 高于肺良性病变表达率(29%，4/14)(χ2=5.621,P<0.05)，但与凋亡水平无关。 肺癌bcl- 2表达及凋亡水平与肺良性病变比较差异无显著性，但在良性病变中，bcl-2表达于支气管 上皮基底细胞(图1～3)。
肺癌bcl-2与C-myc共同表达及意义：肺癌中bcl-2与C-myc同时表达率为20%(18/90 )。共 同表达与组织类型、分化，局部淋巴结转移及凋亡水平无关，但与远处转移及临床分期密切 相关(P<0.01)(见表1)。
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表1 肺癌bcl-2/C-myc联合表达与远 处转移及临床分期关系
组别
例数
bcl-2/C-myc表达
联合表
达率
(%)
χ2
P值
联合
表达
非联合
, 百拇医药
表达
远处转移
M0
82
13
69
16
7.211 △
<0.01
M1
8
5
3
, http://www.100md.com
63
临床分期
Ⅰ+Ⅱ期
77
11
66
14
10.879△
<0.01
Ⅲ+Ⅳ期
13
7
6
, http://www.100md.com
54
注：△均为同组内比较 讨论 凋亡是机体清除衰老、病变及多余细胞的一种生理性途径。若应被清除的细胞凋亡受抑制， 则其生命期延长，从而使这些细胞受外界致癌因子作用的机会，癌基因激活及癌变的机率增 加。肿瘤细胞的凋亡抑制也有助于肿瘤的扩大。凋亡受到相关基因严密的正负调控。bcl-2 为凋亡抑制基因，C-myc对细胞生长具有双向调节作用[2]。本组肺癌检测结果显 示bcl-2、 C-myc表达及凋亡水平与肺癌组织类型、分化、转移及临床分期无关，提示凋亡抑制及bcl - 2、C-myc单独表达与肺癌进展无明显关系。由于没有明确的肺癌前病变作为对照，因此不 能 否定凋亡抑制在肺癌发生中的作用。肺癌bcl-2表达者凋亡水平明显降低，提示bcl-2表达 抑 制肺癌凋亡。肺癌C-myc表达明显高于肺良性病变，而bcl-2在肺良性病变中主要表达在支 气 管上皮基底细胞，提示bcl-2、C-myc表达可能与肺癌的发生有关。本组资料结果显示 ，bcl- 2、C-myc同时表达在远处转移组和临床Ⅲ+Ⅳ期明显高于无远处转移组和临床Ⅰ+Ⅱ期， 提 示bcl-2及C-myc共同表达在肺癌的进展中具有协同作用，这与早期对其它肿瘤的研究结果 一 致[3,4]。后来的实验证明bcl-2能抑制C-myc诱导的凋亡，但不影响其促有丝分 裂功能[5， 6]。推测这可能是bcl-2与C-myc协同作用的一个重要机制。实验结果表明bcl-2与C- myc共同表达时，预示着肺癌预后不良。
, 百拇医药
基金项目：浙江大学医学院附属第二医院科研基金资助项目(000039)
作者单位：王国凤(310009 杭州，浙江大学医学院附属第二医院病理科)
陈培辉(310009 杭州，浙江大学医学院附属第二医院病理科)
周燕(310009 杭州，浙江大学医学院附属第二医院病理科)
参考文献
1，Steller H. Mechanisms and genes of cellular suicide. Science，1995,267:1445 -1449.
2，Chiarugi V, Ruggiero M. Role of three cancer “master gene” p53， bcl-2 and C-myc on the apoptotic process. Tumori, 1996, 82:205-209.
, http://www.100md.com
3，Vaux DL, Cory S, Adams JM. Bcl-2 gene promotes haemopoietic c ell survival a nd cooperates with C-myc to immortalize pre-B cells. Nature, 1988,335:440-44 2.
4，Strasser A, Harris AW, Bath ML, et al. Novel Primitive lymphoi d tumours indu ced in transgenic mice by cooperation between myc and bcl-2. Nature, 1990, 348:331-333.
5，Bissonnette RP, Echeverri F,Mahboubi A, et al. Apoptotic cell death induced by C-myc is inhibited by bcl-2. Nature, 1992,359：552-554.
6，Fanidi A, Harrington EA, Evan GI, et al. Cooperative interacti on between C-myc and bcl-2 proto-oncogenes. Nature, 1992,359:554-556., 百拇医药
王国凤 陈培辉 周燕
关键词：肺癌；bcl-2；C-myc；细胞凋亡
细胞凋亡是与生物体发育及组织更新有关的生理性细胞死亡过程。近年发现凋亡异常与肿瘤 的发生发展有关。实验证明凋亡受到许多相关基因严密的正负调控[1]。在体内调 控凋亡的 因素及其相互作用的关系更复杂，但这方面的报道少见且结果不一。本文对我院手术切除的 90例肺癌进行bcl-2、C-myc及细胞凋亡水平的检测，并探讨它们之间的关系及临床病理学 意义。
材料与方法 检测标本为我科1993～1996年档案材料。90例肺癌中，男71例，女19例。年龄33～72岁。组 织学类型：鳞癌29例，腺癌27例，细支气管肺泡癌13例，粘液表皮样癌4例，小细胞未分化 癌5例，大细胞癌12例。肺癌临床分期按国际抗癌联盟(UICC)1997年标准，其中Ⅰ期35例， Ⅱ期42例，Ⅲ+Ⅳ期13例。14例肺良性病变包括结核球，炎性假瘤，肺大泡，支气管扩张及 肺外伤。
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以S-P免疫组化法(链霉菌抗生物素蛋白过氧化酶连接法)对肺癌bcl-2、C-myc表达进 行检测 ，bcl-2 Ⅰ抗(100)及C-myc Ⅰ抗(9E10)浓缩型试剂工作浓度均为1∶60，二氨基联 苯胺(DAB)显色。
以TUNEL(TdT-mediated dUTP-x nick end labeling)法原位标记凋亡细胞。TUNEL试剂盒 为 德国保灵曼原装产品。实验前试剂配制按产品说明书。五溴-四氯-三吲哚磷酸酯/氮蓝四唑(BCIP/NBT)显色，水性封片剂封片。
结果判断：bcl-2阳性位于胞膜及胞浆，C-myc阳性位于胞浆及胞核，呈棕黄色颗粒状，背 景 清晰。凋亡细胞呈蓝黑色，散在。以每高倍视野(HPF 10×40)凋亡细胞数判断凋亡水平。 高级数凋亡(++)：>5个/HPF，低级数凋亡(+)：≤5个/HPF。
实验时，均设立阳性及阴性对照。
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统计学处理：采用卡方检验及确切概率法。
结果 肺癌bcl-2、C-myc表达及细胞凋亡：肺癌bcl-2表达率31%(28/90)，C-myc表 达率62%(56/90)，高级数凋亡率48%(43/90)。bcl-2、C-myc表达及细胞凋亡水 平与肺 癌组 织类型、分化、转移及临床分期无关。bcl-2表达者高级数凋亡率(29%，8/28)明显低 于 bcl-2阴性者的高级数凋亡率(56%，35/62)(χ2=6.009，P<0.05)。C-myc表 达率显著 高于肺良性病变表达率(29%，4/14)(χ2=5.621,P<0.05)，但与凋亡水平无关。 肺癌bcl- 2表达及凋亡水平与肺良性病变比较差异无显著性，但在良性病变中，bcl-2表达于支气管 上皮基底细胞(图1～3)。
肺癌bcl-2与C-myc共同表达及意义：肺癌中bcl-2与C-myc同时表达率为20%(18/90 )。共 同表达与组织类型、分化，局部淋巴结转移及凋亡水平无关，但与远处转移及临床分期密切 相关(P<0.01)(见表1)。
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表1 肺癌bcl-2/C-myc联合表达与远 处转移及临床分期关系
组别
例数
bcl-2/C-myc表达
联合表
达率
(%)
χ2
P值
联合
表达
非联合
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表达
远处转移
M0
82
13
69
16
7.211 △
<0.01
M1
8
5
3
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临床分期
Ⅰ+Ⅱ期
77
11
66
14
10.879△
<0.01
Ⅲ+Ⅳ期
13
7
6
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54
注：△均为同组内比较 讨论 凋亡是机体清除衰老、病变及多余细胞的一种生理性途径。若应被清除的细胞凋亡受抑制， 则其生命期延长，从而使这些细胞受外界致癌因子作用的机会，癌基因激活及癌变的机率增 加。肿瘤细胞的凋亡抑制也有助于肿瘤的扩大。凋亡受到相关基因严密的正负调控。bcl-2 为凋亡抑制基因，C-myc对细胞生长具有双向调节作用[2]。本组肺癌检测结果显 示bcl-2、 C-myc表达及凋亡水平与肺癌组织类型、分化、转移及临床分期无关，提示凋亡抑制及bcl - 2、C-myc单独表达与肺癌进展无明显关系。由于没有明确的肺癌前病变作为对照，因此不 能 否定凋亡抑制在肺癌发生中的作用。肺癌bcl-2表达者凋亡水平明显降低，提示bcl-2表达 抑 制肺癌凋亡。肺癌C-myc表达明显高于肺良性病变，而bcl-2在肺良性病变中主要表达在支 气 管上皮基底细胞，提示bcl-2、C-myc表达可能与肺癌的发生有关。本组资料结果显示 ，bcl- 2、C-myc同时表达在远处转移组和临床Ⅲ+Ⅳ期明显高于无远处转移组和临床Ⅰ+Ⅱ期， 提 示bcl-2及C-myc共同表达在肺癌的进展中具有协同作用，这与早期对其它肿瘤的研究结果 一 致[3,4]。后来的实验证明bcl-2能抑制C-myc诱导的凋亡，但不影响其促有丝分 裂功能[5， 6]。推测这可能是bcl-2与C-myc协同作用的一个重要机制。实验结果表明bcl-2与C- myc共同表达时，预示着肺癌预后不良。
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基金项目：浙江大学医学院附属第二医院科研基金资助项目(000039)
作者单位：王国凤(310009 杭州，浙江大学医学院附属第二医院病理科)
陈培辉(310009 杭州，浙江大学医学院附属第二医院病理科)
周燕(310009 杭州，浙江大学医学院附属第二医院病理科)
参考文献
1，Steller H. Mechanisms and genes of cellular suicide. Science，1995,267:1445 -1449.
2，Chiarugi V, Ruggiero M. Role of three cancer “master gene” p53， bcl-2 and C-myc on the apoptotic process. Tumori, 1996, 82:205-209.
, http://www.100md.com
3，Vaux DL, Cory S, Adams JM. Bcl-2 gene promotes haemopoietic c ell survival a nd cooperates with C-myc to immortalize pre-B cells. Nature, 1988,335:440-44 2.
4，Strasser A, Harris AW, Bath ML, et al. Novel Primitive lymphoi d tumours indu ced in transgenic mice by cooperation between myc and bcl-2. Nature, 1990, 348:331-333.
5，Bissonnette RP, Echeverri F,Mahboubi A, et al. Apoptotic cell death induced by C-myc is inhibited by bcl-2. Nature, 1992,359：552-554.
6，Fanidi A, Harrington EA, Evan GI, et al. Cooperative interacti on between C-myc and bcl-2 proto-oncogenes. Nature, 1992,359:554-556., 百拇医药