复制慢传输型便秘动物模型的尝试
复制慢传输型便秘动物模型的尝试
兰州军区总医院普外科(730050) 高 峰 仪孝信 李发智 李文惠
第三军医大学大坪医院普外科 张胜本 张连阳 童卫东 黄显凯
提 要：根据慢传输型便秘(STC)的临床特征和已知的病理学基础，以及接触性泻剂对肠神经系统的损伤作用，应用给大鼠饲料中加用接触性泻剂大黄和酚酞的方法，成功地复制了STC的大鼠模型。对模型肠道传输功能及其神经病理研究结果显示，该模型复制了STC的基本特征，表现为肠道传输减慢、结肠壁内血管活性肠肽含量降低等；该法具有复制方法简单、可重复性强、经济易行和易于推广等优点，可以应用于对STC发生发展病理机制和预防治疗的研究工作。
关键词：慢传输型便秘；动物模型；泻剂；肛肠病
, 百拇医药
慢传输型便秘(slow transit constipation,STC)多发生于育龄期妇女，主要表现为大便次数减少、无便意伴腹胀等。辅助检查表现为胃肠道、特别是结肠传输缓慢；钡灌肠及纤维结肠镜检查均无异常发现。其症状顽固、病因不清、临床治疗非常困难。到目前为止，实验室尚未能建立STC的动物模型，为此我们设计用接触性泻剂使大鼠发生“泻剂结肠”(cathartic colon)改变，并以此作为STC的动物模型。该模型能反应STC的基本特征，能应用于STC的科研工作。现报告如下。
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 动物：Wistar成年健康大鼠36只，雌雄各半，体重140～280g，随机分为甲、乙、丙3组。每组12只，雌雄性各6只。分组后每组大鼠的平均体重无明显差别。甲组为正常对照组，乙组为饲养大黄组(大黄组)，丙组为饲养酚酞组(酚酞组)。
, http://www.100md.com
1.1.2 药物与试剂：试验用泻剂选用大黄和酚酞，均取自本院药房，将大黄磨成粉状。血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide，VIP)和P物质(substance P,SP)放射免疫分析药盒购自北京海科锐生物技术中心。
1.2 实验方法
1.2.1 造模方法：各组大鼠雌雄分笼饲养，给药以每笼大鼠的平均体重计算。甲组饲以普通软饲料(本院动物室配制)。乙组饲以添加有大黄粉的上述软饲料，开始时大黄的用量为100mg·kg-1·d-1，以后每日在前日的基础上加倍，直到出现半数致泻保持此剂量到80%的稀便消失然后再在此基础上加倍给药，又有近半数大鼠出现腹泻。如此循环3次，待最后一次80%的稀便消失1周后停药，给予普通软饲料。丙组饲以添加有酚酞的饲料，开始给予剂量亦为100mg·kg-1·d-1，按照乙组的方法调整剂量。如此方法饲药45天，停药后的大鼠再用普通软饲料饲养1周。造模过程中甲组和丙组各死亡1只，甲组为外伤致死，丙组死因不明，可能系腹泻致死。
, http://www.100md.com
1.2.2 大鼠肠道病理变化的检测
1.2.2.1 肠道传输功能测定：停药1周后的大鼠禁食24h，用10%的活性炭混悬液1～2ml灌胃，灌胃30min后颈椎脱臼法处死。立即剖腹，摘出从幽门到直肠末端的全部肠道，在松弛状态下测量肠道的全长及活性炭混悬液在肠道内推进的长度，并计算活性炭混悬液推进长度与肠道全长的百分比。
1.2.2.2 结肠壁内VIP与SP含量测定：取距肛缘约5cm之一段结肠，长约2.0cm，剃除系膜，用生理盐水冲洗肠腔，称重。纵形剖开肠管，剥除粘膜层及粘膜下层，然后分别称粘膜及粘膜下层的重与浆肌层的重量，用煮沸法提取组织内的活性肽。具体测定方法按放免药盒说明书进行。
1.2.3 统计学处理：按两样本均数t检验分析实验数据。
2 结 果
, 百拇医药 2.1 大鼠肠道传输功能改变 测定结果表明实验组大鼠肠道传输功能明显减弱，见表1。
表1 大鼠各段肠管长度、总长度及其与活性炭混悬液推进长度之比(x±s)
组别
n
小肠长度(cm)
结肠长度(cm)
肠道全长(cm)
炭沫推进长度(cm)
百分比(%)
甲组
11
, 百拇医药
106.00±12.85
18.68±3.00
124.68±13.88
87.09±23.00
69.28±12.92
乙组
12
103.83±7.58
16.42±2.84
120.25±9.26
61.08±12.87*
, http://www.100md.com 51.11±11.73*
丙组
11
104.27±10.62
16.09±3.02
120.36±12.62
57.09±15.43*
47.19±10.74* *
*P<0.01；* *P<0.001 VS甲组
2.2 结肠粘膜、粘膜睛层与浆肌层内肽能神经递质的含量变化 实验组大鼠结肠浆肌层内SP含量及浆肌层和粘膜、粘膜下层VIP均明显降低，见表2、3。
, 百拇医药
表2 结肠粘膜、粘膜下层和浆肌层内SP放免测定结果(x±s，pg/mg)
甲组
乙组
丙组
粘膜、粘膜下层
0.781±0.218
14.465±12.826**
8.859±13.157
浆肌层
0.167±0.091
0.074±0.068*
, 百拇医药
0.061±0.056**
*P<0.05；* *P<0.01 VS甲组
表3 结肠粘膜、粘膜下层和浆肌层内VIP放免测定结果(x±s，pg/mg)
甲组
乙组
丙组
粘膜、粘膜下层
浆肌层
*P<0.05；* *P<0.01 VS甲组
3 讨论
临床研究发现STC患者绝大多数有长期服用接触性泻剂病史[1、2]。病程开始时多为偶尔服用，逐渐发展为靠泻剂维持排便，最后泻剂无郊。动物实验和临床研究均发现接触性泻剂可以损伤肠神经系统，从而导致泻剂结肠的发生[3、4]。近年来发现STC患者结肠肌间神经丛嗜银性细胞减少，神经纤维排列紊乱和结肠奖学金肌层内抑制性肽能神经递质VIP含量降低等[5～7]。我们曾经提出在出口梗阻性便秘的基础上如长期滥用接触性泻剂，将会因损伤肠神经系统而引发STC的理论假说[2、8]。
, 百拇医药
基于上述理论基础和临床实践，我们认为长期滥用接触性泻剂，可造成肠道发生泻剂结肠病理改变而引发STC；泻剂结肠是STC的一种重要的临床类型。本实验成功地重复了上述推进上的疾病演变过程，检测结果发现该模型的肠道传输功能和结肠神经病理变化与STC的病理特征基本相同，可以作为STC的动物模型。该模型具有复制方法简单、可重复性强、经济易行、易于推广应用等优点。可以应用于对STC发生发展的病理学过程，亦可用于对STC预防和治疗的研究工作。本实验乙组大鼠结肠粘膜、粘膜下层内SP含量长高，与STC的病理变化不同。我们认为可能是本实验的用药时间较短，粘膜层内SP的含量由于肠道传输减慢而致代偿性升高，如用药时间进一步延长，可能会因粘膜下神经丛的进一步损伤和递质耗竭等导致SP含量降低，但其确切结果有待深入探讨。
参考文献
1.Preston DM,Lennard-Jones JE.Gut 1986；27：41.
, 百拇医药
2.张胜本，张连阳，黄显凯，等.大肠肛门病外科杂志 1995；1：37.
3.Smith B.Dis Colon Rectum 1973；16：455.
4.Riemann JF,Schmidt H,Zimmermann W.Scand J Gastroenterol 1980;15:761.
5.Krishnamurthy S,Schuffler MD,Rohrmann CA,et al.Gastroenterology 1985；88:26.
6.Schouten WR,Kate FJW,Graaf EJR,et al.Dis Colon Rectum 1993；36:1112.
7.Koch TR,Carney JA,Go L,et al.Gastroenterology 1988;94:300.
8.Cao feng,Zhang Shengben,Zhang Lianyang,et al.China J New Gastroenterol 1997；5:141., 百拇医药
兰州军区总医院普外科(730050) 高 峰 仪孝信 李发智 李文惠
第三军医大学大坪医院普外科 张胜本 张连阳 童卫东 黄显凯
提 要：根据慢传输型便秘(STC)的临床特征和已知的病理学基础，以及接触性泻剂对肠神经系统的损伤作用，应用给大鼠饲料中加用接触性泻剂大黄和酚酞的方法，成功地复制了STC的大鼠模型。对模型肠道传输功能及其神经病理研究结果显示，该模型复制了STC的基本特征，表现为肠道传输减慢、结肠壁内血管活性肠肽含量降低等；该法具有复制方法简单、可重复性强、经济易行和易于推广等优点，可以应用于对STC发生发展病理机制和预防治疗的研究工作。
关键词：慢传输型便秘；动物模型；泻剂；肛肠病
, 百拇医药
慢传输型便秘(slow transit constipation,STC)多发生于育龄期妇女，主要表现为大便次数减少、无便意伴腹胀等。辅助检查表现为胃肠道、特别是结肠传输缓慢；钡灌肠及纤维结肠镜检查均无异常发现。其症状顽固、病因不清、临床治疗非常困难。到目前为止，实验室尚未能建立STC的动物模型，为此我们设计用接触性泻剂使大鼠发生“泻剂结肠”(cathartic colon)改变，并以此作为STC的动物模型。该模型能反应STC的基本特征，能应用于STC的科研工作。现报告如下。
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 动物：Wistar成年健康大鼠36只，雌雄各半，体重140～280g，随机分为甲、乙、丙3组。每组12只，雌雄性各6只。分组后每组大鼠的平均体重无明显差别。甲组为正常对照组，乙组为饲养大黄组(大黄组)，丙组为饲养酚酞组(酚酞组)。
, http://www.100md.com
1.1.2 药物与试剂：试验用泻剂选用大黄和酚酞，均取自本院药房，将大黄磨成粉状。血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide，VIP)和P物质(substance P,SP)放射免疫分析药盒购自北京海科锐生物技术中心。
1.2 实验方法
1.2.1 造模方法：各组大鼠雌雄分笼饲养，给药以每笼大鼠的平均体重计算。甲组饲以普通软饲料(本院动物室配制)。乙组饲以添加有大黄粉的上述软饲料，开始时大黄的用量为100mg·kg-1·d-1，以后每日在前日的基础上加倍，直到出现半数致泻保持此剂量到80%的稀便消失然后再在此基础上加倍给药，又有近半数大鼠出现腹泻。如此循环3次，待最后一次80%的稀便消失1周后停药，给予普通软饲料。丙组饲以添加有酚酞的饲料，开始给予剂量亦为100mg·kg-1·d-1，按照乙组的方法调整剂量。如此方法饲药45天，停药后的大鼠再用普通软饲料饲养1周。造模过程中甲组和丙组各死亡1只，甲组为外伤致死，丙组死因不明，可能系腹泻致死。
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1.2.2 大鼠肠道病理变化的检测
1.2.2.1 肠道传输功能测定：停药1周后的大鼠禁食24h，用10%的活性炭混悬液1～2ml灌胃，灌胃30min后颈椎脱臼法处死。立即剖腹，摘出从幽门到直肠末端的全部肠道，在松弛状态下测量肠道的全长及活性炭混悬液在肠道内推进的长度，并计算活性炭混悬液推进长度与肠道全长的百分比。
1.2.2.2 结肠壁内VIP与SP含量测定：取距肛缘约5cm之一段结肠，长约2.0cm，剃除系膜，用生理盐水冲洗肠腔，称重。纵形剖开肠管，剥除粘膜层及粘膜下层，然后分别称粘膜及粘膜下层的重与浆肌层的重量，用煮沸法提取组织内的活性肽。具体测定方法按放免药盒说明书进行。
1.2.3 统计学处理：按两样本均数t检验分析实验数据。
2 结 果
, 百拇医药 2.1 大鼠肠道传输功能改变 测定结果表明实验组大鼠肠道传输功能明显减弱，见表1。
表1 大鼠各段肠管长度、总长度及其与活性炭混悬液推进长度之比(x±s)
组别
n
小肠长度(cm)
结肠长度(cm)
肠道全长(cm)
炭沫推进长度(cm)
百分比(%)
甲组
11
, 百拇医药
106.00±12.85
18.68±3.00
124.68±13.88
87.09±23.00
69.28±12.92
乙组
12
103.83±7.58
16.42±2.84
120.25±9.26
61.08±12.87*
, http://www.100md.com 51.11±11.73*
丙组
11
104.27±10.62
16.09±3.02
120.36±12.62
57.09±15.43*
47.19±10.74* *
*P<0.01；* *P<0.001 VS甲组
2.2 结肠粘膜、粘膜睛层与浆肌层内肽能神经递质的含量变化 实验组大鼠结肠浆肌层内SP含量及浆肌层和粘膜、粘膜下层VIP均明显降低，见表2、3。
, 百拇医药
表2 结肠粘膜、粘膜下层和浆肌层内SP放免测定结果(x±s，pg/mg)
甲组
乙组
丙组
粘膜、粘膜下层
0.781±0.218
14.465±12.826**
8.859±13.157
浆肌层
0.167±0.091
0.074±0.068*
, 百拇医药
0.061±0.056**
*P<0.05；* *P<0.01 VS甲组
表3 结肠粘膜、粘膜下层和浆肌层内VIP放免测定结果(x±s，pg/mg)
甲组
乙组
丙组
粘膜、粘膜下层
浆肌层
*P<0.05；* *P<0.01 VS甲组
3 讨论
临床研究发现STC患者绝大多数有长期服用接触性泻剂病史[1、2]。病程开始时多为偶尔服用，逐渐发展为靠泻剂维持排便，最后泻剂无郊。动物实验和临床研究均发现接触性泻剂可以损伤肠神经系统，从而导致泻剂结肠的发生[3、4]。近年来发现STC患者结肠肌间神经丛嗜银性细胞减少，神经纤维排列紊乱和结肠奖学金肌层内抑制性肽能神经递质VIP含量降低等[5～7]。我们曾经提出在出口梗阻性便秘的基础上如长期滥用接触性泻剂，将会因损伤肠神经系统而引发STC的理论假说[2、8]。
, 百拇医药
基于上述理论基础和临床实践，我们认为长期滥用接触性泻剂，可造成肠道发生泻剂结肠病理改变而引发STC；泻剂结肠是STC的一种重要的临床类型。本实验成功地重复了上述推进上的疾病演变过程，检测结果发现该模型的肠道传输功能和结肠神经病理变化与STC的病理特征基本相同，可以作为STC的动物模型。该模型具有复制方法简单、可重复性强、经济易行、易于推广应用等优点。可以应用于对STC发生发展的病理学过程，亦可用于对STC预防和治疗的研究工作。本实验乙组大鼠结肠粘膜、粘膜下层内SP含量长高，与STC的病理变化不同。我们认为可能是本实验的用药时间较短，粘膜层内SP的含量由于肠道传输减慢而致代偿性升高，如用药时间进一步延长，可能会因粘膜下神经丛的进一步损伤和递质耗竭等导致SP含量降低，但其确切结果有待深入探讨。
参考文献
1.Preston DM,Lennard-Jones JE.Gut 1986；27：41.
, 百拇医药
2.张胜本，张连阳，黄显凯，等.大肠肛门病外科杂志 1995；1：37.
3.Smith B.Dis Colon Rectum 1973；16：455.
4.Riemann JF,Schmidt H,Zimmermann W.Scand J Gastroenterol 1980;15:761.
5.Krishnamurthy S,Schuffler MD,Rohrmann CA,et al.Gastroenterology 1985；88:26.
6.Schouten WR,Kate FJW,Graaf EJR,et al.Dis Colon Rectum 1993；36:1112.
7.Koch TR,Carney JA,Go L,et al.Gastroenterology 1988;94:300.
8.Cao feng,Zhang Shengben,Zhang Lianyang,et al.China J New Gastroenterol 1997；5:141., 百拇医药