天然植物药中蒽醌类化合物含量测定
蒽醌类化合物在天然植物药中较为常见，如百合科的芦荟，豆科的决明子、番泻叶，茜草科的茜草，鼠李科的鼠李，特别是蓼科蓼亚科植物中广泛存在，如大黄属、酸模属、蓼属等，重要的植物药如大黄、虎杖、何首乌、拳参等。除高等植物外，它们还存在于低等植物地衣类和菌类的代谢产物中。蒽醌类化合物在天然药物中以游离状态与苷的形式混合存在，游离态的约占总蒽醌的1/10～1/3，结合态常见的是葡萄糖苷。各种蒽醌及其苷都具有多方面的生物活性，重要的是致泻和抗菌作用。
蒽醌类化合物按结构的不同可分成羟基蒽醌类、氧化蒽酚及蒽酚类、二蒽酮类。目前其提取方法主要采用溶剂提取法，如浸渍、渗漉、连续回流提取等方式，所用的溶剂主要有乙醇、甲醇、氯仿、乙醚、苯、石油醚、吡啶、丙酮、硫酸溶液、盐酸溶液及氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、氢氧化铵等溶液。其含量测定方法有重量法、荧光法、比色法、极谱法、薄层扫描法、高效液相色谱法等，而单味植物药或其复方制剂中的蒽醌化合物含量，一般以大黄素或大黄酸、1，8-二羟基蒽醌为标准测定游离蒽醌或总蒽醌，结合蒽醌的量等于总蒽醌减去游离蒽醌。
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1 比色法
根据蒽醌类及其苷大多数是黄色或橙红色的，羟基蒽醌能溶于碱溶液中而显红或紫红色；蒽酚和二蒽醌与碱液不显红色，只能呈黄色，需经氧化成羟基蒽醌后才与碱作用显红色；羟基蒽醌类因结构不同与醋酸镁的甲醇溶液反应可显橙、红、蓝、紫等色的性质而比色测定。
1.1 标准曲线的绘制：取经五氧化二磷干燥24 h的大黄素(或大黄酸、1，8-二羟基蒽醌)对照品适量用碱液(1 mol/L 氢氧化钠溶液或其与2%氢氧化铵溶液的混合溶液)或0.5%～1%醋酸镁甲醇溶液定溶，在500～550 nm波长处扫描，在最大吸收波长处测定吸收度，以吸收度对浓度绘制标准曲线，线性范围4～24 μg/ml。
1.2 游离蒽醌的测定：取药物细粉或其制剂粉末适量(约相当于游离蒽醌1.5 mg)加乙醚(或氯仿)溶解或用索氏提取器回流提取至提取液无色。将乙醚挥干，残渣用甲醇溶解，加醋酸镁甲醇溶液至定容；或将乙醚提取液移入分液漏斗中，用碱液提取并定容[1]，比色测定，依标准曲线计算含量。
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1.3 总蒽醌的测定
1.3.1 先水解后提取：取供试品适量(约相当于总蒽醌1.5 mg)，用酸液(1～7.5 mol/L硫酸溶液或1.5～6 mol/L盐酸溶液)20～30 ml[2，3，4]，水浴回流1～2 h，以使结合态的蒽醌苷水解，使蒽醌游离，再用乙醚(或氯仿)萃取，并将过滤的药物残渣及滤纸经50℃干燥后用乙醚回流提取，待索氏提取器内提取液无色，合并乙醚液，照游离蒽醌测定法测定。
对含还原型蒽酮苷(如番泻苷)的样品，根据其可被三氯化铁氧化，酸水解成氧化型蒽醌苷元这一原理，称取供试品适量，加水30 ml超声处理15～30 min(提高溶解、提取效率，大大缩短溶解、提取时间)，加10.5%三氯化铁溶液20 ml，回流20～60 min[3]，再加盐酸1～3 ml继续回流30 min，放冷，再进行萃取与测定。
因蒽醌类与碱液显色后，过氧化氢不能使其褪色，而其它有色物质可被其氧化褪色的原理，对含有干扰测定成分的碱萃取液[2]，加1%过氧化氢溶液少量，在沸水浴中加热4 min氧化，冷却，定容，比色测定。
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1.3.2 先提取后水解：取供试品适量，加甲醇(或乙醇、氯仿等)，对含蒽醌的浸膏制剂，超声处理30 min[5]，使溶解，对含蒽醌的原植物药粉末制剂，应置索氏提取器中回流提取，至提取液无色，将甲醇回收至干，残渣用酸液水解，乙醚(或氯仿)萃取，依法测定。
2 差示分光光度法
羟基蒽醌与碱液或醋酸镁甲醇液能产生颜色变化，使吸收峰由450 nm左右移至520 nm左右，而其它蒽醌及蒽类与之没有颜色变化，与其它有色物质均可干扰羟基蒽醌的含量测定，可用分光光度法。如为防止处方中的其它化合物对测定的干扰，取供试品提取液两份[6]，一份用0.5%的醋酸镁甲醇液至定容，为测定液；另一份用甲醇至定容，作为空白，于520 nm处测定△A值，依标准曲线计算含量。线性范围为4～12 μg/ml。
3 薄层扫描法
采用双波长薄层扫描法测定蒽醌类含量，其层析扫描条件为：硅胶H-CMC薄层板，石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)上层溶液展开剂[7]；或硅胶G-CMC薄层板，展开剂：正己烷-醋酸乙酯-甲酸(30∶10∶0.5)，展距12 cm[8]；或甲苯-醋酸乙酯-甲酸(15∶2∶1)上层溶液为展开剂[9]。双波长反射法锯齿扫描，λS：430～445 nm，λR：630～650 nm；SX=3，狭缝1.2×1.2 mm，灵敏度中，线性范围：0.1～1.3 μg，用外标两点法定量，3 h的扫描数据稳定。
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4 高效液相色谱法(HPLC)
利用反相高效液相色谱法可同时测定蒽醌类的不同成分(如大黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素甲醚等)的含量[10]，色谱条件与系统适用性：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-水(70∶30)[11]，或甲醇-0.5%磷酸(0.025 mol/L磷酸)(80～85∶20～15)[12]，或甲醇-水-冰醋酸(80∶20∶1)为流动相[13]，检测波长可选用254，290，438 nm等；流速0.8 ml/min；柱温10～35℃；灵敏度0.08 AUFS，线性范围4～58.5 μg/ml，样品可经大孔吸附树脂柱处理，以外标两点法计算含量。
5 超临界流体萃取法
超临界流体萃取(Supercritical fluid extraction，SFE)是近代分离领域出现的高新技术，具有所用溶剂少，萃取效率和选择性高，省时(5～20 min)，易于操作的特点，通过建立SFE与高效液相联用(SFE-HPLC)来测定供试品中的蒽醌类含量。在SFE中，确定检测萃取压力为38.5 mPa，温度60℃，改性剂甲醇剂量0.4 ml，静态萃取时间5～20 min，动态萃取体积5 ml，线性范围0.008 4～0.302 4 μg，检测波长437 nm。
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滕义生(黑龙江省鹤岗市药品检验所 154101)
温增珍(黑龙江省鹤岗市药品检验所 154101)
刘伟红(黑龙江省鹤岗市药品检验所 154101)
许连环(黑龙江省鹤岗市药品检验所 154101)
参考文献：
[1] 北京中医学院.中药化学[M].上海：上海人民出版社，1976∶136
[2] 徐国钧.生药学[M].北京：人民卫生出版社，1988∶166
[3] 陈礼胡，刘 圣，田 莉，等.紫外分光光度法测定肠必清处方浸膏粉总蒽醌含量[J].中国药房，1998，9(4)∶181
, 百拇医药
[4] 中华人民共和国卫生部部标准(试行)[S].WS-094(2-013)97
[5] 黄俊斌.妇科洗剂中大黄素含量测定[J].时珍国医国药，1998，9(4)∶81
[6] 韩 晋，蔡光明.差方分光光度法测定蚁肝丸中蒽醌含量[J].中国药学杂志，1998，33(12)∶750
[7] 刘 伟，梁生旺.薄层扫描法测定淋结消中总大黄素含量[J].中国药学杂志，1999，34(10)∶689
[8] 欧国灯.薄层扫描法测定大黄虫丸中大黄素的含量[J].广东药学，1999，9(1)∶14
[9] 郑书成.薄层扫描法测定乙肝清热解毒胶囊中大黄素的含量[J].西北药学杂志，1999，14(5)∶198
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[10] 唐 刚，王义明，罗国安，等.高效液相色谱法测定洁脉冲剂中大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量[J].药物分析杂志，1999，19(5)∶340
[11] 中华人民共和国卫生部部标准(试行)[S].WS-105(2-017)-97
[12] 戚宝婵，郭兰建，李 虹，等.高效液相色谱法测定大黄清胃丸中大黄素的含量[J].中成药，1999，21(6)∶291
[13] 高运军，毛巧形.八正清淋栓中大黄酸含量测定[J].时珍国医国药，1999，10(8)∶578
[14] 苟奎斌，袁海龙，李仙义，等.超临界流体萃取法用于大黄素的定量测定研究[J].中国药学杂志，1999，34(9)∶619
滕义生 温增珍 刘伟红 许连环建立SFE与高效液相联用(SFE-HPLC)来测定供试品中的蒽醌类含量。在SFE中，确定检测萃取压力为38.5 mPa，温度60℃，改性剂甲醇剂量0.4 ml，静态萃取时间5～20 min，动态萃取体积5 ml，线性范围0.008 4～0.302 4 μg，检测波长437 nm。
滕义生(黑龙江省鹤岗市药品检验所 154101)
温增珍(黑龙江省鹤岗市药品检验所 154101)
刘伟红(黑龙江省鹤岗市药品检验所 154101)
许, http://www.100md.com
蒽醌类化合物按结构的不同可分成羟基蒽醌类、氧化蒽酚及蒽酚类、二蒽酮类。目前其提取方法主要采用溶剂提取法，如浸渍、渗漉、连续回流提取等方式，所用的溶剂主要有乙醇、甲醇、氯仿、乙醚、苯、石油醚、吡啶、丙酮、硫酸溶液、盐酸溶液及氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、氢氧化铵等溶液。其含量测定方法有重量法、荧光法、比色法、极谱法、薄层扫描法、高效液相色谱法等，而单味植物药或其复方制剂中的蒽醌化合物含量，一般以大黄素或大黄酸、1，8-二羟基蒽醌为标准测定游离蒽醌或总蒽醌，结合蒽醌的量等于总蒽醌减去游离蒽醌。
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1 比色法
根据蒽醌类及其苷大多数是黄色或橙红色的，羟基蒽醌能溶于碱溶液中而显红或紫红色；蒽酚和二蒽醌与碱液不显红色，只能呈黄色，需经氧化成羟基蒽醌后才与碱作用显红色；羟基蒽醌类因结构不同与醋酸镁的甲醇溶液反应可显橙、红、蓝、紫等色的性质而比色测定。
1.1 标准曲线的绘制：取经五氧化二磷干燥24 h的大黄素(或大黄酸、1，8-二羟基蒽醌)对照品适量用碱液(1 mol/L 氢氧化钠溶液或其与2%氢氧化铵溶液的混合溶液)或0.5%～1%醋酸镁甲醇溶液定溶，在500～550 nm波长处扫描，在最大吸收波长处测定吸收度，以吸收度对浓度绘制标准曲线，线性范围4～24 μg/ml。
1.2 游离蒽醌的测定：取药物细粉或其制剂粉末适量(约相当于游离蒽醌1.5 mg)加乙醚(或氯仿)溶解或用索氏提取器回流提取至提取液无色。将乙醚挥干，残渣用甲醇溶解，加醋酸镁甲醇溶液至定容；或将乙醚提取液移入分液漏斗中，用碱液提取并定容[1]，比色测定，依标准曲线计算含量。
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1.3 总蒽醌的测定
1.3.1 先水解后提取：取供试品适量(约相当于总蒽醌1.5 mg)，用酸液(1～7.5 mol/L硫酸溶液或1.5～6 mol/L盐酸溶液)20～30 ml[2，3，4]，水浴回流1～2 h，以使结合态的蒽醌苷水解，使蒽醌游离，再用乙醚(或氯仿)萃取，并将过滤的药物残渣及滤纸经50℃干燥后用乙醚回流提取，待索氏提取器内提取液无色，合并乙醚液，照游离蒽醌测定法测定。
对含还原型蒽酮苷(如番泻苷)的样品，根据其可被三氯化铁氧化，酸水解成氧化型蒽醌苷元这一原理，称取供试品适量，加水30 ml超声处理15～30 min(提高溶解、提取效率，大大缩短溶解、提取时间)，加10.5%三氯化铁溶液20 ml，回流20～60 min[3]，再加盐酸1～3 ml继续回流30 min，放冷，再进行萃取与测定。
因蒽醌类与碱液显色后，过氧化氢不能使其褪色，而其它有色物质可被其氧化褪色的原理，对含有干扰测定成分的碱萃取液[2]，加1%过氧化氢溶液少量，在沸水浴中加热4 min氧化，冷却，定容，比色测定。
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1.3.2 先提取后水解：取供试品适量，加甲醇(或乙醇、氯仿等)，对含蒽醌的浸膏制剂，超声处理30 min[5]，使溶解，对含蒽醌的原植物药粉末制剂，应置索氏提取器中回流提取，至提取液无色，将甲醇回收至干，残渣用酸液水解，乙醚(或氯仿)萃取，依法测定。
2 差示分光光度法
羟基蒽醌与碱液或醋酸镁甲醇液能产生颜色变化，使吸收峰由450 nm左右移至520 nm左右，而其它蒽醌及蒽类与之没有颜色变化，与其它有色物质均可干扰羟基蒽醌的含量测定，可用分光光度法。如为防止处方中的其它化合物对测定的干扰，取供试品提取液两份[6]，一份用0.5%的醋酸镁甲醇液至定容，为测定液；另一份用甲醇至定容，作为空白，于520 nm处测定△A值，依标准曲线计算含量。线性范围为4～12 μg/ml。
3 薄层扫描法
采用双波长薄层扫描法测定蒽醌类含量，其层析扫描条件为：硅胶H-CMC薄层板，石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)上层溶液展开剂[7]；或硅胶G-CMC薄层板，展开剂：正己烷-醋酸乙酯-甲酸(30∶10∶0.5)，展距12 cm[8]；或甲苯-醋酸乙酯-甲酸(15∶2∶1)上层溶液为展开剂[9]。双波长反射法锯齿扫描，λS：430～445 nm，λR：630～650 nm；SX=3，狭缝1.2×1.2 mm，灵敏度中，线性范围：0.1～1.3 μg，用外标两点法定量，3 h的扫描数据稳定。
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4 高效液相色谱法(HPLC)
利用反相高效液相色谱法可同时测定蒽醌类的不同成分(如大黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素甲醚等)的含量[10]，色谱条件与系统适用性：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-水(70∶30)[11]，或甲醇-0.5%磷酸(0.025 mol/L磷酸)(80～85∶20～15)[12]，或甲醇-水-冰醋酸(80∶20∶1)为流动相[13]，检测波长可选用254，290，438 nm等；流速0.8 ml/min；柱温10～35℃；灵敏度0.08 AUFS，线性范围4～58.5 μg/ml，样品可经大孔吸附树脂柱处理，以外标两点法计算含量。
5 超临界流体萃取法
超临界流体萃取(Supercritical fluid extraction，SFE)是近代分离领域出现的高新技术，具有所用溶剂少，萃取效率和选择性高，省时(5～20 min)，易于操作的特点，通过建立SFE与高效液相联用(SFE-HPLC)来测定供试品中的蒽醌类含量。在SFE中，确定检测萃取压力为38.5 mPa，温度60℃，改性剂甲醇剂量0.4 ml，静态萃取时间5～20 min，动态萃取体积5 ml，线性范围0.008 4～0.302 4 μg，检测波长437 nm。
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滕义生(黑龙江省鹤岗市药品检验所 154101)
温增珍(黑龙江省鹤岗市药品检验所 154101)
刘伟红(黑龙江省鹤岗市药品检验所 154101)
许连环(黑龙江省鹤岗市药品检验所 154101)
参考文献：
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滕义生 温增珍 刘伟红 许连环建立SFE与高效液相联用(SFE-HPLC)来测定供试品中的蒽醌类含量。在SFE中，确定检测萃取压力为38.5 mPa，温度60℃，改性剂甲醇剂量0.4 ml，静态萃取时间5～20 min，动态萃取体积5 ml，线性范围0.008 4～0.302 4 μg，检测波长437 nm。
滕义生(黑龙江省鹤岗市药品检验所 154101)
温增珍(黑龙江省鹤岗市药品检验所 154101)
刘伟红(黑龙江省鹤岗市药品检验所 154101)
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