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编号:176443
高效液相色谱法测定血浆中平痛新的浓度
http://www.100md.com 2002年5月25日 新药网
     赵晓萌1,董淳1,徐群英1,常翠1,毕殿洲2 1深圳市人民医院、暨南大学附属第二医院药学部,深圳市518020;2沈阳药科大学药剂教研室,沈阳市110015

    中图分类号:R97 文献标志码:B 文章编号:1001-0408(2001)06-0350-02

    摘要:目的:建立高效液相色谱法测定血浆中微量平痛新浓度的分析方法。方法:采用HPLC法,色谱柱:KromasilC18柱(Φ46mm×200mm,5μm);流动相:甲醇-水-三乙胺(50∶50∶05);流速:07ml/min;检测波长:215nm;灵敏度:004AUFS;内标物:奥美拉唑。结果:血浆中平痛新浓度在10~600ng/ml范围内线性关系良好,相关系数r=09993;平均回收率为(10036±11)%;平均日内和日间差异分别为47%和38%;最低检测限可至1ng/ml。结论:该法简便、稳定,可用于盐酸平痛新体内药代动力学与生物利用度研究。
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    关键词:平痛新;高效液相色谱法;血浆药物浓度

    ABSTRACT:OBJECTIVE: To develop a method to determine the contents of nefopam in plasma by HPLC METHODS: RP- HPLC method, Kromasil C18 column( Φ 4 6× 200mm, 5μ m) ; mobile phase was methenol- water- triethylamine( 50∶ 50∶ 0 5) ; Detecting wavelength was 215nm; The flow rate was 0 7ml/min; sensitivity was 0 04AUFS; HPLC internal standard was Omeprazole RESULTS: The calibration cure was linear in the concentrations ranged from 10ng/ml to 600ng/ml( r=0 9 993)The average recovery was ( 100 36± 1 1) %  The RSD within day was less than 4 7% and the RSD between days was less than 3 8%  CONCLUSION: This method is simple and reliable, which also can be applied to the study of pharmacokinetics and bioavailability of nefopam in vivo
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    KEY WORDS: nefopam hydrochloride; HPLC; plasma drug concentration

    平痛新(NefopamHydrochloride,又称盐酸奈福泮)是一种较新的中等强度的非成瘾性镇痛药[1],此药化学结构与已知的其它镇痛药均不相同,是苯海拉明的环化类似物。平痛新体内血药浓度低,所以要求体内检测方法具有高度的灵敏性和选择性。有关平痛新的体内检测方法较多,如:GC法[2]、HPLC法等,HPLC法的检测器常用荧光检测器(FD)[3]或电化学检测器(ECD)[4]等。荧光检测器需要配用离子对试剂,价格昂贵,且干扰大;电化学检测器温度影响大,环境条件要求苛刻;而HPLC-UV法分离速度快、自动化程度高、灵敏度可达检测要求。为了研究和开发平痛新的新剂型,本文选择UV法作为平痛新血药浓度的检测手段,建立了HPLC法测定血浆中平痛新浓度的方法,并测定了家犬口服平痛新片及其缓释胶囊后的血药浓度。

    1仪器与试剂
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    LC-6AHPLC仪,6AUV检测器,C-R3A色谱数据处理仪(日本岛津);80-2型离心机(上海手术器械厂);HH-S恒温水浴(江苏金坛县医疗仪器厂);液体涡流混合器(江苏医疗器械厂)。平痛新、平痛新片(沈阳东陵制药厂);平痛新缓释胶囊(沈阳药科大学药剂教研室提供);奥美拉唑(扬州制药厂);甲醇为色谱纯;水为超纯水;三乙胺、氢氧化钠、环己烷、盐酸均为分析纯。

    2方法与结果

    21色谱条件

    色谱柱:KromasilC18柱(Φ46mm×200mm,5μm);流动相:甲醇-水-三乙胺(50∶50∶05);流速:07ml/min;UV检测波长:215nm;灵敏度:004AUFS;内标物:奥美拉唑(样品和内标的保留时间分别为983min和1234min)。空白血浆及样品血浆色谱图见图1。

    22血样处理方法
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    吸取含平痛新样品血浆10ml,加入内标溶液01ml及05mol/L氢氧化钠溶液1ml,振摇5s,加入5ml环己烷,旋涡振摇2min后,在3000rpm/min下离心3min。取上层有机相加01mol/L盐酸3ml,旋涡振摇2min后,在3000rpm/min下离心3min,弃去有机相,水层加05mol/L氢氧化钠溶液1ml、环己烷5ml,旋涡振摇2min后,在3000rpm/min下离心3min,取有机相于60℃恒温水浴中蒸干,残渣用01ml甲醇充分溶解,取10μl进样。

    23标准曲线的制备

    吸取不同量平痛新储备液加到10ml空白血浆中混匀,配制成10、25、50、100、200、300、400、600ng/ml血浆系列平痛新标准溶液,按22项下血样处理方法进行处理。以样品对内标的峰面积比(As/Ai)对样品浓度C(ng/ml)回归,在10~600ng/ml的范围内线性关系良好,回归方程为:C=64037(As/Ai)—14242(r=09993,n=8),最低检测限为1ng/ml,理论塔板数为3210。
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    24回收率试验

    制备高、中、低3种不同平痛新浓度的血浆,按血样处理方法处理后进样,将测定的峰面积比(As/Ai)代入标准回归方程,计算测得量与加入量比较,得回收率,结果见表1。

    表1平痛新的HPLC法回收率试验结果(n=3)

    结果表明,高、中、低3种浓度回收率均符合体内分析的要求。

    25精密度试验

    对高、中、低3种浓度的血浆样品,分别于1d内(n=5)和1wk内(n=5)进行测定,计算日内变异系数和日间变异系数,结果见表2。

    表2平痛新的HPLC法精密度试验结果(n=5)

    结果表明,高、中、低3种浓度日内、日间变异系数均符合体内分析的要求。
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    26血药浓度测定

    给健康狗(10±4)kg单剂量交叉口服平痛新缓释胶囊和平

    痛新市售片。口服平痛新市售片后05、1、2、3、4、6、8h,分别在狗后腿隐静脉采血30ml,口服平痛新缓释胶囊后05、1、2、3、4、6、8、10、24h分别采血30ml。在3000rpm/min下离心5min得到血浆样品,然后按血样处理项下操作,求得各时刻的血药浓度,药-时曲线见图2。

    3讨论

    本文采用HPLC法测定血浆中微量平痛新浓度,以奥美拉唑为内标,方法灵敏可靠,回收率和日内、日间差异均符合要求。由图2可以看出,平痛新缓释胶囊与市售片的血药浓度曲线明显不同,可以算出各自的药代动力学参数和生物利用度。因此,本法可用于盐酸平痛新体内药代动力学与生物利用度研究。

    从图1可以看出,平痛新在紫外末端吸收强,所以在紫外末端寻找适宜波长,既可使平痛新吸收强,又可减少杂质干扰。笔者参考文献[5]并通过实验筛选,确定215nm为测定波长。摘自:中国药房, http://www.100md.com