刘红梅，刘艳，金锐，王珍，孙考祥，陆义诚 哈尔滨医科大学附属二院药学部，哈尔滨市150086
中图分类号:R97 文献标志码:A 文章编号:1001-0408(2001)07-0414-02
摘要：目的：测定人血浆中缬沙坦的药物浓度。方法：采用液固萃取法提取，高效液相色谱法测定。色谱柱：HypersilODSC18(46nm×200nm，5μm)；流动相：乙腈-001mol/L的磷酸盐缓冲液(50∶50，pH28)；流速：15ml/min；荧光检测器：λex为265nm，λem为378nm。结果：缬沙坦的保留时间为54min，定量线性范围005～5μg/ml，方法回收率>90%(n=5)，日内、日间RSD<10%(n=5)。结论：本法快速，定量准确，可用于血药浓度测定及人体药代动力学研究。
关键词：缬沙坦；血药浓度；高效液相色谱法
ABSTRACT：OBJECTIVE： To determine the valsartan concentration in human plasma METHODS： The plasma sample was extracted with a liquid- solid method and determined with HPLC， stationary phase was Hypensil ODS C18(4 6nm× 200nm， 5μ m)， mobile phase consisted of acetonitrile and 0 01mol/L KH2PO4 buffer(pH 2 8)(50∶ 50) The flow rate was 1 5ml/min Detection was performed with fluorescence detector at λ ex 265nm， λ em 378nm RESULTS： The retention time of valsartan was about 5 4 minutes， and the linear range of quantity was 0 05～ 5μ g/ml The recoveries of methodology were more than 90% (n=5) Inter- day and intra- day RSD were less then 10% (n=5) CONCLUSION： This method is rapid and accurate It can be applied to determining the plasma valsartan concentration and studying on pharmacokinetics
KEY WORDS： valsartan； plasma concentration of drug； HPLC
缬沙坦(valsartan)是新一代的血管紧张素受体拮抗剂，其作用机制是阻滞血管紧张素Ⅱ与其受体亚型AT1受体的结合而产生降压作用。研究表明，缬沙坦是一种高度选择性的AT1受体拮抗剂，具有良好的抗高血压作用，适用于各种类型的轻、中度高血压，尤其对血管紧张素转换酶抑制剂不能耐受的患者，且无致咳的不良反应[1]。本实验建立了一种灵敏、准确的高效液相色谱法，此方法可用于缬沙坦的血药浓度测定及人体药代动力学的研究。
1材料与方法
11仪器与试药
Waters高效液相色谱仪，包括616泵，717自动进样器，447荧光检测器，Millennium2010色谱管理系统(美国Water公司)；XW-80型旋涡混合器(上海医科大学仪器厂)；80-1型离心机(上海手术器械厂)；Corning240酸度计(美国产)。SPEC8固相萃取柱(100mg，25ml)购于大连化学物理研究所。
缬沙坦对照品(哈尔滨宁宇药物研究所提供，含量996%)；缬沙坦胶囊(批号：060200，有效期：2001年8月，规格：80mg/粒，购于诺华制有限公司)；乙腈为色谱纯，盐酸、磷酸二氢钾均为分析纯，水为超纯水。
12各种试液的配制
磷酸盐缓冲液(001mol/L，pH28)：称取136g磷酸二氢钾定容于1000ml容量瓶中，用磷酸调pH即得。
稀盐酸(01mol/L)：量取9ml浓盐酸定容于1000ml容量瓶中，摇匀即得。
标准贮备液：精密称取缬沙坦对照品503mg，用流动相定容于50ml容量瓶中，使成100μg/ml的标准贮备液，置于—4℃冰箱保存。
13色谱条件
色谱柱：HpersilODSC18(5μm，46nm×200nm)；流动相∶乙腈-磷酸盐缓冲液(001mol/L，pH28)(50∶50)；流速：15ml/min；柱温：25℃。
14血样处理方法
SPEC8固相萃取小柱依次用甲醇、稀盐酸各2ml冲洗1次，取血浆1ml与稀盐酸1ml旋涡混匀后上柱，然后用磷酸盐缓冲液1ml冲洗1次，整个过程均在减压下进行，抽干后除去减压系统，加入05ml流动相洗脱，收集洗脱液，进样25μl，按上述色谱条件测定。
2结果
21色谱行为
在上述色谱条件下，缬沙坦与血浆内源性物质实现较好分离，色谱图见图1。缬沙坦的保留时间为54min。
22标准曲线
取空白血浆900μl，精密加入100μl不同浓度的标准液使成为005、01、025、05、1、25、5μg/ml的含药标准血浆。按“血样处理方法”项下操作，记录峰面积，以峰面积A对浓度C做回归，得回归方程：C=201×10-6
A+00348，r=09999。
23回收率
于空白血浆中准确加入定量的缬沙坦标准液，配成低、中、高浓度分别为005、1、5μg/ml的含药标准血浆各5份。按“血样处理方法”项下操作，记录峰面积，代入标准曲线方程计算浓度，以计算浓度与配制浓度的比值计算方法回收率，结果见表1。
24精密度
配制浓度为005、1、5μg/ml的缬沙坦标准含药血浆各10份，按“血样处理方法”项下操作，于当日不同时间测定低、中、高浓度各5份，计算日内变异，另低、中、高浓度的样品各5份在连续的5日内测定，计算日间变异，结果见表2。
按色谱峰信噪比(S/N≥3)计，该方法的最低检测浓度为5ng/ml。
3方法应用
20名男性健康志愿者单剂量口服缬沙坦胶囊160mg，服
药前采空白血，分别于服药后05、1、15、2、3、4、6、8、12、24h采静脉血3ml，用本法测定血浆缬沙坦浓度，其药-时曲线见图2。由图2可知，服药后约2h缬沙坦达血浆峰浓度16μg/ml。用梯型法计算该药的AUC0～24为108μg/(h·ml)。
表1缬沙坦测定的方法回收率(n=5)
表2缬沙坦测定的精密度结果(n=5)
4讨论
本文建立了一种灵敏、快速、准确的高效液相色谱法测定血浆中缬沙坦的药物浓度，且该方法适用于缬沙坦的药代动力学方面的研究。与文献相比[2]，该方法的改进之处在于提取方法，试验中发现用乙腈-磷酸盐缓冲液(30∶50)1ml洗脱小柱，在去掉血中杂质的同时有30%的药物损失，本试验中去掉这步，发现并不影响药物的分离。
本试验采用固相萃取技术处理血浆样品，该技术具有操作简便、快速、安全性高、重现性好等优点，且适合大批样品的预处理，但不同公司生产的同一类型的固相萃取剂的萃取性能并不完全相同，甚至同一公司的不同批号间的萃取回收率也可能不同。为确保试验的回收率和精密度，本试验用的固相萃取柱为同一公司同一批号的产品。摘自：中国药房
中图分类号:R97 文献标志码:A 文章编号:1001-0408(2001)07-0414-02
摘要：目的：测定人血浆中缬沙坦的药物浓度。方法：采用液固萃取法提取，高效液相色谱法测定。色谱柱：HypersilODSC18(46nm×200nm，5μm)；流动相：乙腈-001mol/L的磷酸盐缓冲液(50∶50，pH28)；流速：15ml/min；荧光检测器：λex为265nm，λem为378nm。结果：缬沙坦的保留时间为54min，定量线性范围005～5μg/ml，方法回收率>90%(n=5)，日内、日间RSD<10%(n=5)。结论：本法快速，定量准确，可用于血药浓度测定及人体药代动力学研究。
关键词：缬沙坦；血药浓度；高效液相色谱法
ABSTRACT：OBJECTIVE： To determine the valsartan concentration in human plasma METHODS： The plasma sample was extracted with a liquid- solid method and determined with HPLC， stationary phase was Hypensil ODS C18(4 6nm× 200nm， 5μ m)， mobile phase consisted of acetonitrile and 0 01mol/L KH2PO4 buffer(pH 2 8)(50∶ 50) The flow rate was 1 5ml/min Detection was performed with fluorescence detector at λ ex 265nm， λ em 378nm RESULTS： The retention time of valsartan was about 5 4 minutes， and the linear range of quantity was 0 05～ 5μ g/ml The recoveries of methodology were more than 90% (n=5) Inter- day and intra- day RSD were less then 10% (n=5) CONCLUSION： This method is rapid and accurate It can be applied to determining the plasma valsartan concentration and studying on pharmacokinetics
KEY WORDS： valsartan； plasma concentration of drug； HPLC
缬沙坦(valsartan)是新一代的血管紧张素受体拮抗剂，其作用机制是阻滞血管紧张素Ⅱ与其受体亚型AT1受体的结合而产生降压作用。研究表明，缬沙坦是一种高度选择性的AT1受体拮抗剂，具有良好的抗高血压作用，适用于各种类型的轻、中度高血压，尤其对血管紧张素转换酶抑制剂不能耐受的患者，且无致咳的不良反应[1]。本实验建立了一种灵敏、准确的高效液相色谱法，此方法可用于缬沙坦的血药浓度测定及人体药代动力学的研究。
1材料与方法
11仪器与试药
Waters高效液相色谱仪，包括616泵，717自动进样器，447荧光检测器，Millennium2010色谱管理系统(美国Water公司)；XW-80型旋涡混合器(上海医科大学仪器厂)；80-1型离心机(上海手术器械厂)；Corning240酸度计(美国产)。SPEC8固相萃取柱(100mg，25ml)购于大连化学物理研究所。
缬沙坦对照品(哈尔滨宁宇药物研究所提供，含量996%)；缬沙坦胶囊(批号：060200，有效期：2001年8月，规格：80mg/粒，购于诺华制有限公司)；乙腈为色谱纯，盐酸、磷酸二氢钾均为分析纯，水为超纯水。
12各种试液的配制
磷酸盐缓冲液(001mol/L，pH28)：称取136g磷酸二氢钾定容于1000ml容量瓶中，用磷酸调pH即得。
稀盐酸(01mol/L)：量取9ml浓盐酸定容于1000ml容量瓶中，摇匀即得。
标准贮备液：精密称取缬沙坦对照品503mg，用流动相定容于50ml容量瓶中，使成100μg/ml的标准贮备液，置于—4℃冰箱保存。
13色谱条件
色谱柱：HpersilODSC18(5μm，46nm×200nm)；流动相∶乙腈-磷酸盐缓冲液(001mol/L，pH28)(50∶50)；流速：15ml/min；柱温：25℃。
14血样处理方法
SPEC8固相萃取小柱依次用甲醇、稀盐酸各2ml冲洗1次，取血浆1ml与稀盐酸1ml旋涡混匀后上柱，然后用磷酸盐缓冲液1ml冲洗1次，整个过程均在减压下进行，抽干后除去减压系统，加入05ml流动相洗脱，收集洗脱液，进样25μl，按上述色谱条件测定。
2结果
21色谱行为
在上述色谱条件下，缬沙坦与血浆内源性物质实现较好分离，色谱图见图1。缬沙坦的保留时间为54min。
22标准曲线
取空白血浆900μl，精密加入100μl不同浓度的标准液使成为005、01、025、05、1、25、5μg/ml的含药标准血浆。按“血样处理方法”项下操作，记录峰面积，以峰面积A对浓度C做回归，得回归方程：C=201×10-6
A+00348，r=09999。
23回收率
于空白血浆中准确加入定量的缬沙坦标准液，配成低、中、高浓度分别为005、1、5μg/ml的含药标准血浆各5份。按“血样处理方法”项下操作，记录峰面积，代入标准曲线方程计算浓度，以计算浓度与配制浓度的比值计算方法回收率，结果见表1。
24精密度
配制浓度为005、1、5μg/ml的缬沙坦标准含药血浆各10份，按“血样处理方法”项下操作，于当日不同时间测定低、中、高浓度各5份，计算日内变异，另低、中、高浓度的样品各5份在连续的5日内测定，计算日间变异，结果见表2。
按色谱峰信噪比(S/N≥3)计，该方法的最低检测浓度为5ng/ml。
3方法应用
20名男性健康志愿者单剂量口服缬沙坦胶囊160mg，服
药前采空白血，分别于服药后05、1、15、2、3、4、6、8、12、24h采静脉血3ml，用本法测定血浆缬沙坦浓度，其药-时曲线见图2。由图2可知，服药后约2h缬沙坦达血浆峰浓度16μg/ml。用梯型法计算该药的AUC0～24为108μg/(h·ml)。
表1缬沙坦测定的方法回收率(n=5)
表2缬沙坦测定的精密度结果(n=5)
4讨论
本文建立了一种灵敏、快速、准确的高效液相色谱法测定血浆中缬沙坦的药物浓度，且该方法适用于缬沙坦的药代动力学方面的研究。与文献相比[2]，该方法的改进之处在于提取方法，试验中发现用乙腈-磷酸盐缓冲液(30∶50)1ml洗脱小柱，在去掉血中杂质的同时有30%的药物损失，本试验中去掉这步，发现并不影响药物的分离。
本试验采用固相萃取技术处理血浆样品，该技术具有操作简便、快速、安全性高、重现性好等优点，且适合大批样品的预处理，但不同公司生产的同一类型的固相萃取剂的萃取性能并不完全相同，甚至同一公司的不同批号间的萃取回收率也可能不同。为确保试验的回收率和精密度，本试验用的固相萃取柱为同一公司同一批号的产品。摘自：中国药房