异福片的药物动力学及相对生物利用度研究
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师少军1, 陈汇1, 顾世芬1, 刘洁2, 曾繁典1
(1华中科技大学同济医学院临床药理研究所，武汉 430030；2湖北省医药工业研究院，武汉)
摘要 目的：研究抗结核复方制剂异福片(异烟肼和利福平复方制剂)在健康人体内的药物动力学及相对生物利用度。方法：10名健康志愿者随机交叉单剂量口服两种制剂各2片(内含异烟肼300mg，利福平600mg)，采用RP-HPLC法测定异烟肼和利福平血药浓度，计算药物动力学参数及相对生物利用度。结果：经3P97程序处理，异烟肼和利福平的体内过程符合一房室模型。试验药中异烟肼、利福平的主要药动学参数：Tmax为(1.50±0.71)和(2.50±0.53)h，Cmax为(6.64±2.13)和(9.03±2.12) mg·mL-1， t1/2为(3.11±1.10)和(4.58±1.21)h, AUC0-t为(24.07±10.11)和(66.60±18.82)mg·h·mL-1，相对生物利用度Fr为(95.9±23.0)%和 (94.1±20.0)%。结论：两种制剂具有生物等效性。
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关键词 异烟肼；利福平；药物动力学；生物利用度
STUDY OF THE PHARMACOKINETICS AND BIOAVAILABILITY OF COMPOUND RIFAMPIN TABLETS IN HEALTHY VOLUNTEERS
Shi Shaojun, Chen Hui, Gu Shifen, Liu Jie,Zeng Fandian.
(Institute of Clinical Pharmacology, Tongji Medical College of Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430030)
[ABSTRACT] OBJECTIVE: To study the pharmacokinetics and bioavailability of compound rifampin tablets using an imported similar tablets as control.. METHODS: The randomized,crossover study was conducted in 10 healthy volunteers.After a single does(containing 300 mg isoniaxid plus 600 mg rifampin),the plasma drug levels were determined by RP-HPLC and the pharmacokinetic parameters and relative bioavailability were calculated. RESULTS: The plasma concentration-time curves of sample and control were both fitted to a one-compartment model.The Pharmacokinetic parameters of the sample for isoniazid and rifsmpin were as fellow:Tmax=(1.50±0.71)h and (2.50±0.53)h;Cmax=(6.64±2.13)μg·ml-1 and (9.03±2.12) μg·ml-1;t1/2=(3.11±1.10)h and (4.58±1.21)h;AUC0-1=(24.07±10.11) μg·h·ml-1 and (66.60±18.82) μg·h·ml-1.The relative bioavailability was(95.9±23.0)% for isoniazie and(94.1±20.0)%for rifampin CONCLUSIONS: Results obtained showed that the sample and the control tablest are bioequivalent.
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[KEY WORDS ] Isoniazid; Rifampin; Pharmacokinetics; Bioavailability
异福片为异烟肼(isoniazid, INH)和利福平(rifampin, RFP)二联复方制剂，用于结核病短程化疗后4个月巩固期治疗，与异福酰胺片(由异烟肼、利福平、吡嗪酰胺组成)前2个月的强化期治疗组成6个月短程化疗方案。二联复方制剂服药方便，可以提高异烟肼和利福平的疗效，保证短程疗法中联合用药的合理性，延缓耐药菌的产生并提高患者用药的顺应性[1]。本文以进口同类产品Rifinah (卫肺宁)为标准参比试剂，对异福片进行了药物动力学和相对生物利用度的研究，以评价两种制剂的生物等效性，为临床合理用药提供了药物动力学依据。
材料与方法
1 材料
药品与试剂：异福片(试验药，湖北省医药工业研究院，批号980815)，Rifinah(卫肺宁，对照药，美国Merion Merrell Dow公司，批号：086)，甲醇(优级纯，北京化工厂)，水杨醛(化学纯，北京旭东化工厂)，庚烷磺酸钠(进口分装)，其余试剂均系分析纯，实验用水为去离子重蒸水。
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仪器：日本岛津LC-1高效液相色谱仪，SPD-1型紫外检测器，日立056型自动记录仪。
2 受试者选择
10名男性健康志愿者，年龄(19.3±0.9)岁，体重(55.1±4.4)kg，身高(164.3±8.5)cm。受试者无心、肝、肾、代谢异常等病史，无慢性胃肠道疾病，无药物过敏史，无吸烟、嗜酒等不良嗜好。试验前两周及试验期间不用任何其他药物。
3 试验方案
受试者随机分为2组，并随机确定服药顺序，进行自身对照交叉试验。禁食12h后，于次日晨7：30～8：00分别空腹口服试验药或对照药各2片(内含异烟肼300mg，利福平600mg)，用150ml温开水送服。服药2h后进统一食谱饮食。试验期间禁忌烟酒。两次服药间隔时间为1周。于服药前(0h)及服药后0.5，1，2，3，4，6，9，12，24h肘静脉采血4ml，离心分离血浆，血样于-20℃以下贮存待测。
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4 异烟肼血药浓度测定
4.1 色谱条件 固定相为YWG (4.6mm×150mm ，5mm)C18色谱柱，流动相为0.02mol·L-1 磷酸二氢钾:甲醇(48:52 v/v)，流速1ml·min-1，检测波长330nm。以外标法定量。
4.2 样品处理 取0.5mL血浆，加入1 mol·L-1 磷酸二氢钾 1mL，10%醋酸0.3mL，0.1%水杨醛溶液0.3mL，混匀，于60℃反应30min，冷却后，加入1 mol·L-1磷酸氢二钾 1mL，混匀，再加乙酸乙酯6mL，振荡20min后，离心取上清液吹干，用甲醇0.2mL复溶，取40mL进样。
4.3 方法学评价 标准曲线与最低检测浓度：于0.5mL空白血浆中准确加入异烟肼标准液，使其浓度分别为0.2，0.4，2.0，5.0，10.0，12.0mg·mL-1，按样品处理项下操作，得血浆标准曲线。在0.2～12.0mg·mL-1浓度范围内线性关系良好，回归方程：C＝0.1370+0.0291H(C：浓度，H：峰高)，r＝0.9993，最低检测浓度为0.2mg·mL-1(S/N＝2)。精密度与回收率试验：分别配制异烟肼3种浓度(0.4，5.0，10.0mg·mL-1)的血浆样品，按样品处理项下操作，其日内变异系数分别为8.9%，4.4%，2.9%，日间变异系数分别为5.8%，2.7%，3.6%。3种浓度的相对回收率分别为70.6%，89.5%，85.7%。
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5 利福平血药浓度测定
5.1 色谱条件 固定相为YWG(4.6mm×150mm ，5mm) C18色谱柱，流动相为0.05 mol·L-1磷酸二氢钾:甲醇:0.01 mol·L-1庚烷磺酸钠(25:71:4 v/v)，流速1ml·min-1，检测波长340nm。以外标法定量。
5.2 样品处理 取0.5mL血浆，加入1 mol·L-1磷酸二氢钾 1mL，混匀后，加二氯甲烷/乙醚(1:1 v/v)混合溶剂7mL，振荡20min后，离心取上清液吹干，用甲醇0.2mL复溶，取25～40mL进样。
5.3 方法学评价 标准曲线与最低检测浓度：于0.5mL空白血浆中准确加入利福平标准液，使其浓度分别为0.2，0.5，4.0，8.0，16.0，20.0mg·mL-1，按样品处理项下操作，得血浆标准曲线。在0.2～20.0mg·mL-1浓度范围内线性关系良好，回归方程：C＝-0.1040+0.0636H (C：浓度，H：峰高)，r＝0.9992，最低检测浓度为0.2mg·mL-1(S/N＝2)。精密度与回收率试验：分别配制利福平3种浓度(0.5，8.0，16.0mg·mL-1)的血浆样品，按样品处理项下操作，其日内变异系数分别为5.6%，5.3%，4.2%，日间变异系数分别为15.0%，4.6%，5.0%。3种浓度的相对回收率分别为91.8%，87.2%，92.3%。
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6 数据处理
采用3P97药代动力学程序进行参数计算及生物等效性分析。Tmax，Cmax用实测数值，AUC采用梯形法计算。相对生物利用度按下列公式计算：Fr＝AUC0-t(试验药)´100%/ AUC0-t(对照药)。试验结果采用交叉试验的方差分析法进行统计学处理，并进行双单侧t检验和区间估计，对两种制剂的AUC0-t、Cmax作出生物等效性评价。
结 果
1 药代动力学结果
10名健康志愿者中异烟肼、利福平的平均血药浓度-时间曲线见图1,2，主要药物动力学参数见表1。结果表明，试验药与对照药异烟肼和利福平的体内血药浓度经时过程基本一致，均符合一房室模型，其主要药物动力学参数在两种制剂间均无显著性差异(P>0.05)。
图1 异烟肼平均血药浓度-时间曲线 (n=10)
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图2 利福平平均血药浓度-时间曲线 (n=10)
表1 异烟肼、利福平药物动力学参数 (n=10，x±s)
药动学参数
异烟肼
利福平
试验药
对照药
试验药
对照药
Cmax(mg·mL-1)
6.64±2.13
6.06±1.25
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9.03±2.12
10.08±2.69
Tmax(h)
1.50±0.71
1.45±0.76
2.50±0.53
2.40±0.52
T1/2(h)
3.11±1.10
2.82±0.60
4.58±1.21
4.36±1.15
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MRT(h)
4.39±0.97
4.45±0.73
7.83±1.64
7.58±1.35
AUC0-t(mg·h·ml-1)
24.07±10.11
25.27±9.13
66.60±18.82
71.35±16.59
AUC0-∞(mg·h·ml-1)
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25.61±10.57
26.84±9.90
69.73±21.39
74.10±19.11
Fr(%)
95.90±23.00
94.10±20.00
2 相对生物利用度及生物等效性评价
试验药异福片中异烟肼、利福平的相对生物利用度分别为(95.9±23.0)%和 (94.1±20.0)%。将两种制剂异烟肼、利福平的AUC0-t、Cmax值经对数转换后方差分析表明，在两种制剂间均无显著性差异(P>0.05)。再进行双单侧t检验表明，异烟肼、利福平的AUC0-t的t1、t2值均大于t0.05(1.86)值，试验药中异烟肼、利福平AUC0-t的 90%置信区间分别为80.7%~108.4%、80.4%~105.5%，均落在对照药的80%～125%之间，Cmax的90%置信区间分别为91.0%~125.8%、79.2%~103.0%，均落在对照药的70%～143%之间。根据生物等效性指导原则[2]，说明两制剂生物等效。
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讨 论
血浆样品中同时存在异烟肼、利福平二种化合物，并且要分别进行定量测定。异烟肼，利福平的血药浓度测定方法国外已有不少报道[3,4~5]，但作为复方制剂需要同时测定二种组分的文献报道甚少。本文建立了一种新的测定血浆中异烟肼、利福平的HPLC，该法血样处理步骤简便，且灵敏度高、回收率高，杂质干扰少。适用于体内药物浓度测定及药物动力学研究。
经对10名健康志愿者血浆中异烟肼、利福平的药物动力学进行研究，结果表明：二者的药动学特性符合一房室模型。异烟肼吸收快，1.5h左右血药浓度达峰值，其消除与各人的乙酰化代谢酶有关，t1/2约3h，较文献报道稍有延长，可能与采样时间长短及计算方法差异等有关。利福平的主要药动学特性与文献[6]报道基本一致。
两种制剂异烟肼、利福平的Tmax，Cmax，t1/2，AUC0-t等参数经统计学分析，均无显著性差异(P>0.05)，表明异福片与进口同类产品Rifinah(卫肺宁)在人体内的吸收速度、消除速度及吸收程度均相似。两种制剂AUC0-t、Cmax等效性检验证明，两种制剂生物等效。试验期间未发生任何不良反应。
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[作者简介] 师少军(1973—)，男，硕士研究生，主要从事药代动力学及药效学研究。
联系电话：(027)83692628 E-mail: sjshi1@163.com
[参考文献]
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【2】 国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京：化学工业出版社，2000.193-197.
【3】 Seifart HI, Gent WL, Parkin DP, et al. High-performance liquid chromatographic determination of isoniazid, acetylisoniazid and hydrazine in biological fluids[J]. J Chromatog Biomed Appli, 1995,674:269-275.
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【4】 Zent C, Smith P. Study of the effect of concomitant food on the bioavailability of rifampicin, isoniazid and pyrazinamide[J]. Tuber Lung Dis, 1995,76:109-113
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【6】 Peloquin CA, Jaresko GS, Yong CL, et al. Population pharmacokinetics modeling of isoniazid, rifampin, and pyrazinamide[J]. Antimicrob Agents Chemother, 1997,41:2670-2679., 百拇医药