-第一节 血液标本的采集和处理
第一节 血液标本的采集和处理
血液标本的采集是分析前质量控制的重在环节，可分为毛细血管采血法和静脉采血法。需要血量较少的检验，如手工法或半自动血细胞分析仪血细胞计数，常用毛细管采血法。需血量较多检验，如红细胞比积、临床生化检验、全自动血细胞分析血细胞计数一般用静脉采血法。特别是全自动血细胞分析仪，无论仪器进样品多少，为防止血样中小凝块的形成，保证仪器进样时标本能充分混匀，原则上均应使用静脉血。毛细血管血和静脉血之间，无论细胞成分或化学组成，都存在程度不同的差异。在判断和比较所得结果时必须予以考虑。
某些生理因素，如吸烟、进食、运动和情绪激支等，均可影响血液成分。甚至一日之间，白细胞总数、嗜酸性粒细胞绝对值、淋巴细胞各亚群的比例等参数均有一定的波动。服用某些药物可能明显干扰实验，得出假象结果。因此采血时，应询问浊否服用过明显干扰试验的药物(如阿司匹林对血小板聚集的抑制作用)关尽可能在一定时间在避免干扰因素条件下进行，以便于比较和动态分析。
一、毛细血管采血法
成人常用手指或耳垂采血。耳垂采血痛较轻，操作方便，适用于肥复采集，特别是手指皮肤粗厚者，但耳垂外周血循环较差，血细胞容易停滞，受气温影响较大，检查结果不够恒定。红细胞、白细胞、血红蛋白和红细胞比积结果均比静脉血高，特别是冬季小波动幅度更大。手指采血操作方便。可获较多血量。婴幼儿手指太小可用拇指或足跟采血。严重烧伤患者，可选择皮肤完整处采血，采血器以用带带三棱针或专用的“采血针”为好，特别是后者有利于采血技术的质量控制，为了避免交叉应严格实行一人一针制。应注意穿刺的深度的适当，切忌用力挤压，以免混入组织液，影响检验结果。
二、静脉采血法
几位于体表的浅静脉均可作为采血部位，通常采用肘部静脉，肘部静脉不明显时，可用手背静脉或内踝静脉。幼儿可于颈外静脉采血。根据采血量可选用不同型号注射器配血相应的针头。某些特殊的检查，比台血小板的激活，要使用塑料注射器和硅化处理后的试管或塑料闭幕式管。采血前应向病人作适当解释，以消除不必要的疑虑和恐惧。如遇个别病人采血后发生晕厥，可让其平卧，通常休息片刻即可恢复。必要时可嗅芳香氨酊，针刺或指掐人中，合谷等穴位。止血带压迫时间不难过长，归好不超过半分钟，以避免瘀血和血液浓缩，有试验证明，压迫时间过长，可引起纤溶活性增强，血小板释放及甘些因子活性增强，影响某些实验结果。注射器和容器必须干燥，抽血时避免产生大量泡沫，向血后应先拔针头，然后将血液徐徐注入标本容器。否则可能导致溶血。溶血标本不仅红细胞半数，红细胞比积降低，血浆清化学组成也会产生变化，影响钾、镁、转氨酶等多项指标的测定。有些试验需用具有严密寒紧的，洁净的橡胶或塑料寒子的玻璃或塑料管作采血及储存器。目前国外已经普及(国内已开始生产)的封闭式真空采血器，既有利于标本的收集运送和保存，又便于防止血液交叉感染，已开始在国内推广使用。
血液标本的保存条件非常重要，不适当保存直接影响实验结果。文献报导，既便将血浆放在4。C冰箱内保存，24小时后的因子活性也仅为采血后即刻实验结果的5%(减少95%)，而供血液分析仪进行细胞计数的血液只能在室温下保存，低温保存可使血小板计数结果减低。因此，应根据实验项止确定最佳的保存条件。
三、抗凝剂
抗凝剂种类很多，性质各异，必须根据检验止的适当选择，才能获得预期的结果。现将实验常用抗凝剂及其使用方法简述如下：
1、乙二胺四乙酸(EDTA)盐 EDTA有二钠、二钾和三钾盐。均可与钙离子结全成螯合物，从而阻止血液凝固。
Na2C10H14O8N2+CA2+→CAC10H12O8N2+2NA++2H+
EDTA盐经1000C烘干，抗凝作用不变，通常配成15g/L水溶液，每瓶0.4ml，干燥后可抗凝5ml血液。EDTA盐对红、白细胞形态影响很小，根据国际血液学标准公委员会(International committee standard of hematology ,ICSH)1993年文件建议，血细胞计数用EDTA二钾作抗凝剂，用量为EDTA-K2。2H2O1.5-2.2Mg (4.45±0.85μmol)/ml血液。EDTA-NA与EDTA-K2对血细胞计数影响均较小，但二钠溶解度明显低于二钾，有时影响抗凝效果，其他抗凝剂不适合于血细胞计数。表1-1是几种抗凝剂对白细胞计数的影响，EDTA影响小板聚集，不适合于作凝血象检查和血小板功能试验。
表1-1 不同抗凝剂不同条件保存血液的WBC变化(×109/L)
| 40C | 200C | 320C | |
30‘1h 2h 4h 8h | 30’ 1h 2h 4h 8h | 30’ 1h 2h 4h 8h | |
EDTA-K2 | 6.6 6.5 6.56.5 6.5 | 6.5 6.5 6.56.5 6.5 | 6.4 6.5 6.56.5 6.5 |
EDTA-NA | 6.3 6.2 6.36.4 6.5 | 6.3 6.3 6.46.3 6.4 | 6.3 6.3 6.46.3 6.3 |
肝素 | 5.6 4.9 | 5.3 5.1 4.23.6 | 5.6 5.6 5.65.3 |
敬椽酸钠 | 6.5 6.2 6.05.6 5.6 | 6.4 6.3 6.26.0 5.8 | 5.9 5.9 6.05.8 5.7 |
2.枸椽酸钠(trisodium citrate)枸椽酸盐可与血中钙离子形成可溶性螯合物，从而阻止血液凝固。
2Na3C6H5O7+2CA2+→2CAC6H5O7-+6Na+
枸椽酸钠有2Na3C6H5O7。和2Na3C6H5。11H2O等多种晶体。通常用前者配成109mmol/l(32g/l)水溶液(也有用106mmol/l浓度)，与血液按1：9或1：4比例使用。枸椽钠对凝血V因子有较好的保护作用，使其活性减低缓，故常用于凝血象的检查，也用于红细胞沉降率的测定。因毒性小，是输积压保养中的成分之一。
由于枸椽酸钠溶液是按体积肥比例加入血液内达到抗凝目的的，而抗凝剂主要是作用于积压浆成分，通常所谓的1：9比例抗凝的概念是提1份体积的抗凝剂作用9份红细胞比积正常血液内的血浆成分而言。所以台果对贫血或红细胞增多症患者的血液仍按1：9的比例加入抗凝剂时，就会发生抗凝剂足或相对过多，这将明显地影响凝象检查结果。为了避免这种现象，有文献报道应根据抗凝剂用量(ml)=0.00185×血量×(100—病人红细胞比积%)这一公式，来计算抗凝剂的用量。
3.草酸钠(sodium oxalate)草酸盐可与血中钙离子生成草酸钙沉淀，从而阻止血液凝固。
草酸钠通常用0.1mol/L浓度，与血液按1：9比例使用，过去主要用于凝务象检查。实践发现草酸盐对凝备V因子保护功能差，影响凝血酶原时间测定效果；另外由于草酸盐与钙结合形成的是沉淀物，影响自动凝血仪的使用，因此，多数学者认为凝积压象检查选用枸椽酸钠为抗凝剂更为适宜。
4.肝素(heparin)肝素广泛在于肺、肝、脾等几乎所有组织和血管周围肥大细胞和暑碱性粒细胞的颗粒中。它是一种含硫酸基团的粘多糖，是分散物质，平均分子量为15000(2000-40000)。肝素可加强抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)灭活丝氨酸蛋白酶，从而具有阻止凝血酶形成，对抗凝血酶和阻止血小板聚集等多种作用。每毫升血液抗凝需要持素15±2.5Iu 。尽管肝素可以保持红细胞的自然形态，但由于其常可引起白细胞聚集关使用涂片在罗氏()染色时产生蓝色背景，因此肝素抗凝血不适全血液学一般检查。肝素是红细胞透渗脆性试验理想的抗凝剂。
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