胆汁成核效应蛋白的研究进展(2)
(6)泡蛋白：胆汁泡是肝脏分泌过饱和胆固醇的主要载体形式，泡中含有胆固醇、磷脂及少量蛋白质，三者各占40%、58.7%和3、130×103、114×103、66×103、60×103及52×103糖蛋白。除52×103糖蛋白外，余均为疏水性蛋白质。理化性质鉴定130×103、114×103、86×103及(62～67)×103疏水性蛋白质分别为IgA，IgG，IgM和白蛋白。1998年，国内马保金等又在T管胆汁中分离纯化出Mr33500泡蛋白，成核活性强达0.310，是迄今发现活性最强的成核效应蛋白。HRPConA染色借助扫描电镜证实泡蛋白参与泡的聚集和融合、增加泡相胆固醇饱和度，有利于胆固醇结晶的析出。
二、抑成核蛋白体系的组成
, http://www.100md.com 1.Mr120000糖蛋白：Ohya等利用凝胶过滤层析法在胆固醇结石胆囊胆汁中分离出Mr120000糖蛋白，浓度约为0.47μg/ml，仅占胆汁总蛋白的0.02%。尽管量微，却有很强的抑成核作用，成核活性(NTm/NTc)高达1.61。理化性质研究提示该蛋白质由等电点均为66的Mr58000和Mr63000两个亚基组成，一级结构分析其主要含亲水性的Gln，Gly，Ser及Asp等氨基酸。水解脱去与肽链相连的糖基后，Mr120000糖蛋白抑成核活性随之丧失，提示糖基在成核效应过程中起重要作用。Mr120000糖蛋白的来源及理化性质仍有待继续研究。
2.结晶结合蛋白：因同胆固醇结晶直接结合而得名，这组蛋白质共有4种成分，Mr分别为16000、28000、63000及74000。成核活性研究表明该组蛋白群抑制胆固醇结晶生长作用呈量效关系，即使低于生理浓度(1～100μg/ml)，亦具强大抑成核作用。成核活性比较以Mr63000最强，其次为Mr16000、Mr74000及Mr28000。免疫吸附试验及N端氨基酸序列分析提示Mr74000、Mr63000和Mr28000分别是分泌性IgA及其重链和轻链。分泌性IgA是结晶结合蛋白的重要组成部分，扫描电镜揭示该群抑成核蛋白通过疏水键与胆固醇结晶结合，从而有利于形态规则致密有序的微小胆固醇结晶核形成。这种形式的微结晶被认为是胆汁中胆固醇最有效的沉淀方式，在生理情况下最易通过胆囊收缩排出胆道，但当胆道运动失调时，这些微结晶便在胆汁中聚集形成结石。
, 百拇医药
3.Mr15000蛋白质：Secknus等将胆囊胆汁经抗载脂蛋白AI免疫吸附柱提取脂蛋白，并经截留Mr为30000的超滤柱分离纯化出Mr15000成核效应蛋白。体外试验表明当其浓度为15mg/ml时，试验组结晶数量仅为对照组75%(P<0.05)且结晶生长速度亦显著减慢。理化性质分析示该蛋白质不含糖基，等电点pI为61，在非还原状态下可自行聚集成Mr为30000的二聚体及Mr60000的四聚体。
三、成核效应作用机制的探讨
胆固醇成核是胆结石形成的关键，包括胆固醇从微胶粒相转至泡相，小泡逐渐增大形成大泡，伴随着泡相胆固醇饱和度的增高，大泡进一步发生聚集和融合出现复合泡，最终直至胆固醇单水结晶析出，结晶继续生长形成结石等过程。胆汁成核效应蛋白作用机制仍不甚清楚，目前已成共识的有以下几方面：(1)不同的成核效应蛋白作用环节不尽相同，诸如LDP和AAG等主要参与胆固醇结晶的成核过程，ATR/ACT主要促进胆固醇结晶生长，而IgM和IgG不仅可促进胆固醇结晶成核、生长，尚可移动胆固醇溶解平衡，有助于大量胆固醇结晶析出。已知微胶粒相与泡相胆固醇的转移受胆汁中胆汁酸盐浓度及成分的影响，胆汁成核效应蛋白是否参与这一过程尚不明了，但有人在模拟体系中加入ConA结合蛋白能使泡相胆固醇比浊度逐渐增加，提示ConA结合蛋白可能具调节微胶粒相与泡相胆固醇转移的作用。(2)糖链在调节成核效应蛋白活性中起重要作用：已发现的成核活性蛋白大多系糖蛋白，糖链以N连接方式参与该蛋白质的空间结构，如AAG中糖链约占糖蛋白的33%，其中大部分(97%)由N乙酰葡萄糖胺、唾液酸、甘露糖及半乳糖组成。无论促/抑成核蛋白，诸如AAG，APN，Mr120000糖蛋白等水解脱糖基后活性全部丧失，推测糖链参与调节胆固醇成核过程。(3)多发胆固醇结石与单发胆固醇结石的成核机制不全相同。研究表明，成核效应蛋白AAG、粘蛋白等在多发、单发结石组的含量是不同的，两者差异显著。尽管两组间胆固醇饱和指数、胆汁胆固醇浓度等条件相同，但多发结石组成核时间约(26±13)d，明显较单发结石组(85±30)d缩短(P<0.01)。, http://www.100md.com(项建斌 蔡端 张延龄)
二、抑成核蛋白体系的组成
, http://www.100md.com 1.Mr120000糖蛋白：Ohya等利用凝胶过滤层析法在胆固醇结石胆囊胆汁中分离出Mr120000糖蛋白，浓度约为0.47μg/ml，仅占胆汁总蛋白的0.02%。尽管量微，却有很强的抑成核作用，成核活性(NTm/NTc)高达1.61。理化性质研究提示该蛋白质由等电点均为66的Mr58000和Mr63000两个亚基组成，一级结构分析其主要含亲水性的Gln，Gly，Ser及Asp等氨基酸。水解脱去与肽链相连的糖基后，Mr120000糖蛋白抑成核活性随之丧失，提示糖基在成核效应过程中起重要作用。Mr120000糖蛋白的来源及理化性质仍有待继续研究。
2.结晶结合蛋白：因同胆固醇结晶直接结合而得名，这组蛋白质共有4种成分，Mr分别为16000、28000、63000及74000。成核活性研究表明该组蛋白群抑制胆固醇结晶生长作用呈量效关系，即使低于生理浓度(1～100μg/ml)，亦具强大抑成核作用。成核活性比较以Mr63000最强，其次为Mr16000、Mr74000及Mr28000。免疫吸附试验及N端氨基酸序列分析提示Mr74000、Mr63000和Mr28000分别是分泌性IgA及其重链和轻链。分泌性IgA是结晶结合蛋白的重要组成部分，扫描电镜揭示该群抑成核蛋白通过疏水键与胆固醇结晶结合，从而有利于形态规则致密有序的微小胆固醇结晶核形成。这种形式的微结晶被认为是胆汁中胆固醇最有效的沉淀方式，在生理情况下最易通过胆囊收缩排出胆道，但当胆道运动失调时，这些微结晶便在胆汁中聚集形成结石。
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3.Mr15000蛋白质：Secknus等将胆囊胆汁经抗载脂蛋白AI免疫吸附柱提取脂蛋白，并经截留Mr为30000的超滤柱分离纯化出Mr15000成核效应蛋白。体外试验表明当其浓度为15mg/ml时，试验组结晶数量仅为对照组75%(P<0.05)且结晶生长速度亦显著减慢。理化性质分析示该蛋白质不含糖基，等电点pI为61，在非还原状态下可自行聚集成Mr为30000的二聚体及Mr60000的四聚体。
三、成核效应作用机制的探讨
胆固醇成核是胆结石形成的关键，包括胆固醇从微胶粒相转至泡相，小泡逐渐增大形成大泡，伴随着泡相胆固醇饱和度的增高，大泡进一步发生聚集和融合出现复合泡，最终直至胆固醇单水结晶析出，结晶继续生长形成结石等过程。胆汁成核效应蛋白作用机制仍不甚清楚，目前已成共识的有以下几方面：(1)不同的成核效应蛋白作用环节不尽相同，诸如LDP和AAG等主要参与胆固醇结晶的成核过程，ATR/ACT主要促进胆固醇结晶生长，而IgM和IgG不仅可促进胆固醇结晶成核、生长，尚可移动胆固醇溶解平衡，有助于大量胆固醇结晶析出。已知微胶粒相与泡相胆固醇的转移受胆汁中胆汁酸盐浓度及成分的影响，胆汁成核效应蛋白是否参与这一过程尚不明了，但有人在模拟体系中加入ConA结合蛋白能使泡相胆固醇比浊度逐渐增加，提示ConA结合蛋白可能具调节微胶粒相与泡相胆固醇转移的作用。(2)糖链在调节成核效应蛋白活性中起重要作用：已发现的成核活性蛋白大多系糖蛋白，糖链以N连接方式参与该蛋白质的空间结构，如AAG中糖链约占糖蛋白的33%，其中大部分(97%)由N乙酰葡萄糖胺、唾液酸、甘露糖及半乳糖组成。无论促/抑成核蛋白，诸如AAG，APN，Mr120000糖蛋白等水解脱糖基后活性全部丧失，推测糖链参与调节胆固醇成核过程。(3)多发胆固醇结石与单发胆固醇结石的成核机制不全相同。研究表明，成核效应蛋白AAG、粘蛋白等在多发、单发结石组的含量是不同的，两者差异显著。尽管两组间胆固醇饱和指数、胆汁胆固醇浓度等条件相同，但多发结石组成核时间约(26±13)d，明显较单发结石组(85±30)d缩短(P<0.01)。, http://www.100md.com(项建斌 蔡端 张延龄)