前列腺癌基因治疗的实验研究进展(2)

http://www.100md.com 2003年9月26日 好医生

     2.替代性基因疗法 肿瘤抑制基因的突变或缺失是细胞恶性增生的重要因素，已发现大部分肿瘤细胞都存在P53基因突变后，细胞增殖周期失控而导致肿瘤发生，最近证实，各种原发性和转移性前列癌都伴有P53基因突变或缺失，因此，可通过细胞内导入野生型P53基因替代功能异常或缺乏的基因，逆转癌细胞 的恶性增生，Yang等(2)使用腺病毒载体将野生型P53基因转染至非雄激素依赖性，伴有P53基因缺失的人前列腺细胞(Rsu-Prl)，结果发现，离体转染15小时后，细胞内P53蛋白含量增高，24小时后癌细胞出现核致密。、染色体断裂和凋亡濉本等特殊性改变。此外，转染细胞在裸鼠的致癌率也由对照组的90%降至10%。上述结果不仅表明P53可通过诱导癌细胞凋亡抑制肿瘤发展，还可成为治疗非雄激素依赖性前列癌的潜在治疗方法，此外，P53还可作转录激活因子促进P21的表达，而后者可阻断癌细胞从G1到S期转化，Eastham等人(3)进一步利用腺病毒载体，分别将P53和P21基因染到地P53缺失型小鼠前列腺癌细胞(148-IPA)，分别观察两种抑癌基因的抑癌效果，结果发现，在离体P21阻止癌细胞增生效应明显高于P53,动物存活期相应地也长于P53转染组。提示这现任中生长抑制蛋白对不同类型的癌细胞作用可能不差别。最近还发现，突变型P53基因编码蛋白是癌细胞增生的刺激物，若分离出可识别含有突变型P53基因癌细胞的CTL，则可快速杀死癌细胞，阻断由P53基因突变导致的癌细胞恶性增生(4)。

    二、 免疫基因疗法

    目前已知，许多细胞因子可提高体内细胞免疫系统的抗肿瘤效应，特别是可增强TIL和CTL对癌细胞识别杀伤作用，但全身给药效果差，副作用严重；相反，应用体外-体内耦联方法(ex vivo)，将细胞因子转染至TiL,CTL或癌细胞，通过这些细胞自身分泌提高肿瘤组织局部细胞因子浓度。这种诱导性基因疗法不仅克服了全身给药的诸多缺点，还极大地提高了抑癌效果，仅在美国已有20个应用细胞因子的基因治疗方案渐进入了临床实验阶段，这些包括IL-2、IL-4、IFNα、GM-CSF和IFNα等，其中以IL-2和IL-4应用最为广泛。Yoshimara(5)分别构建IL-2。GM-CSF和IFNα的逆转录病毒载体并转染至在鼠前列癌细胞(R3327G)，该细胞株的生物学特性与人前列部细胞相似，为雄激素依赖性而且增生缓慢。将能分别分泌和上述三种细胞因子的癌细胞克隆接种大鼠皮下，8周后，分泌IL-2和IFNα的接种癌细胞全部形成瘤体，而67%GM-CSF接种组未见瘤体形成，提示后者对癌细胞杀伤力最大。Rowakita(6)进一步将IFNα分别与IL-2和GM-CSF组合，分别转染至小鼠前列癌细胞(RM-1)，结果发现，IFNα-IL-2和IFNα-GM-CSF复合转染组癌细胞裸鼠成瘤率皆为零；而且动物存活率分别达到100%和80%。重要的是在肿瘤排斥部位发现除杀伤T细胞因子外还出现特异性溶癌T细胞。提示三种细胞因子共转染可通过非特异性和特异性抗肿瘤细胞免疫阻断肿瘤发生。

    在转基因治疗前腺癌的实验研究的重大进展之一，是发现并克隆了前列腺特异抗原启动子基因(PSA-P)(7)。含有PSA-P和某种细胞因子基因的表达性腺病毒甘休进入体内后，在PSA-P的导向下，可选择性进入前列腺癌细胞的基因中，这各壑向载体使基因治疗变得简单易行，通过静脉注射外源基因即可定向导入靶细胞，为基因治疗前列腺癌的临床推广应用作出了重要贡献。

    1.增强肿瘤杀伤T细胞的反应性 肿瘤虽可表达能被免疫系统识别的抗原，但不能激发有效的抗肿瘤免疫反应，这种弱抗原性在于肿瘤细胞特异抗原本身涌激活细胞，T细胞的激活须两种来逢肿瘤抗原提呈细胞(APC)的信号：一是APC表面特异性1型组织相溶抗原(MHC-1)，更重要的是APC表面特异抗原B7，这两种抗原分别T细胞相应受体(T细胞抗原受体及CD28)结合，方可 激活CTL和TIL。多数肿瘤细胞可表达1型MHC，但只有少数特化APC可提呈B7，所以不能激活有效的细胞免疫反应，鉴于多数前列腺癌细胞，以替代APC的B7分子，将这种癌细胞免疫小鼠以提高T细胞杀伤癌细胞的功能，抑制肿瘤的增生。在此基础上，还将进一步利用B7类似物细胞毒性淋巴细胞抗原4(CTLA-4)抗体或反义RNA，阻断CTLA-4对T细胞激活的抑制作用，增强T细胞的肿瘤杀伤力。(郭应禄 张志文)

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