去甲万古霉素抗MRSA感染小鼠的实验研究结果(1)
随着抗菌药物在临床上的广泛应用，细菌耐药性也不断发生变迁。近年来甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(Methicillin-Resistant Staphylococcus Aureous,MRSA)成为院内感染的重要致病菌，因MRSA的多重耐药性，造成治疗上等困难，甚至危及生命，病死率较高。多项研究结果表明其耐药性是由于金黄色葡萄球菌内膜上产生了一种独特的青霉素结合蛋白PBP2a，与β-内酰胺类抗生素亲和力很低，而且具有金黄色葡萄球菌其他PBPs的多种功能，其中mec A基因是PBP2a的结构表达基因。具有PBP2a 的MRSA引起的感染很难有效控制。虽然报道认为具有抗MRSA的药物不少，但获得临床研究证实及安全有效的抗菌药物并不多。目前临床上用于抗MRSA 感染的有效治疗药物仅有糖肽类抗生素如万古霉素、替考拉宁及万古霉素衍生物去甲万古霉素(norvancomycin,NVM)等少数几个品种。糖肽类抗生素的作用机制是抑制细菌细胞壁粘肽的合成，当这类抗生素与细菌接触后很快进入细胞膜内与胞壁糖肽合成前体，形成复合物，使胞壁糖肽所必需的基本结构双糖十肽不能运送至胞壁合成部位，阻断细胞壁的合成，同时，由于复合物堆积于细胞膜内，阻碍了细胞膜的正常合成，最终使细胞壁和细胞膜的完整性遭到破坏，导致细菌死亡，达到杀菌作用。
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感染动物模型主要用于研究与评价抗菌药物在体内的抗菌作用。MRSA 感染动物模型在MRSA耐药机制的深入研究，抗MRSA感染给药方案的确定以及评价抗MRSA 感染药物的体内抗菌作用等方面起到了很大作用。常用的MRSA感染动物模型有小鼠败血症感染模型，兔心内膜炎感染模型。由于去甲万古霉素是抗MRSA感染有效药物，因此，检验这种模型成功与否常用去甲万古霉素作为治疗评价标准。在目前的实验动物研究中去甲万古霉素抗MRSA感染动物模型常作为研究抗MRSA药物的阳性对照研究模型。
Totsuka等就亚胺培南与万古霉素协同抗MRSA的作用进行了体内研究。亚胺培南是碳青霉烯类抗菌药物，体外实验结果表明其单独对MRSA无抗菌活性，但与万古霉素联合体外具有协同作用，万古霉素对MRSA的抗生素后效应(PAE)是1.9-2.6小时，亚胺培南与万古霉素联合后抗生素后效应(PAE)是2.7-4.4小时，两药治疗MRSA感染小鼠，一组单独给予万古霉素1或2mg/kg治疗，一组单独给予亚胺培南/西司他丁5mg/kg治疗，细菌生长曲线结果表明，两组与空白对照组相似，对细菌生长无抑制作用，细菌抑制时间为0小时。而用万古霉素1mg/kg与亚胺培南/西司他丁5mg/kg共同治疗MRSA感染小鼠，细菌抑制时间则为2.9小时；万古霉素1mg/kg与亚胺培南/西司他丁10mg/kg共同治疗MRSA感染小鼠，细菌抑制时间为3.9小时；万古霉素2mg/kg与亚胺培南/西司他丁10mg/kg共同治疗MRSA感染小鼠，细菌抑制时间延长至5.2小时。结果表明联合给药对于MRSA感染小鼠是有效的，万古霉素与亚胺培南具有体内协同作用。
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本所陈琼等应用mec A基因阳性的甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌两株临床分离菌株(MRSA 92-106与MRSA 89-187)，感染小鼠引起的小鼠败血症实验模型，评价去甲万古霉素与依替米星、氟氧头孢单独给药，以及去甲万古霉素与依替米星+氟氧头孢联合给药进行比较其体内抗菌活性。氟氧头孢(flomoxef, FMX)是氧头孢烯类抗生素，具有广谱抗菌活性，对金黄色葡萄球菌包括部分MRSA 菌株也有较好体外抗菌活性，由于其结构特点，对β-内酰胺酶诱导性较低，对金黄色葡萄球菌感染也有较好临床疗效。依替米星为新型氨基糖苷类抗生素，为我国开发研制的新药，目前已应用于临床，对革兰氏阴性菌以及葡萄球菌有较好的体外抗菌活性，对MRSA也有一定的抗菌作用。实验前测定甲氧西林、苯唑西林、去甲万古霉素、氟氧头孢、依替米星五种抗生素对两株MRSA菌(MRSA 92-106与MRSA 89-187)的体外MIC测定结果表明为MRSA菌株，对甲氧西林、苯唑西林的MIC均为128->256mg/L，对去甲万古霉素、氟氧头孢、依替米星的MIC分别为8 mg/L与4 mg/L，4 mg/L与8 mg/L，16 mg/L与16 mg/L。实验用去甲万古霉素单独治疗作为阳性对照，分别与依替米星、氟氧头孢单独治疗及依替米星与氟氧头孢按1：1联合治疗三种治疗方案进行比较。MRSA 92-106与MRSA 89-187感染小鼠菌量分别为2X104 cfu/m与5X104cfu/ml。实验结果显示：去甲万古霉素、依替米星、氟氧头孢、依替米星/氟氧头孢(1:1)治疗 MRSA 92-106感染小鼠败血症的ED50(95%可信限)分别为5.8±1.1 mg/kg(4.9-7.0)、10.0±2.0 mg/kg(8.3-12.1)、26.9±5.1 mg/kg(22.4-32.6)、3.8±0.7 mg/kg3.1-4.5)，ED95分别为20.6 mg/kg、54.2 mg/kg、164.8 mg/kg、12.9 mg/kg。去甲万古霉素、依替米星、氟氧头孢、依替米星/氟氧头孢(1:1)治疗MRSA 89-187感染小鼠败血症的ED50 (95%可信限) 分别为4.1±0.8 mg/kg(3.4-4.9)、10.5±1.8 mg/kg(8.9-12.4)、29.2±5.0 mg/kg(24.7-34.5)、2.5±0.4 mg/kg(2.1-2.9)，ED95分别为13.9 mg/kg、23.3 mg/kg、67.0 mg/kg、6.9 mg/kg。上述结果经显著性t检验，去甲万古霉素单独治疗MRSA感染小鼠败血症疗效显著优于依替米星、氟氧头孢单独治疗组，而依替米星与氟氧头孢的联合治疗疗效显著优于去甲万古霉素单独治疗MRSA感染小鼠败血症。新的氨基糖苷类抗生素依替米星与氧头孢烯类抗生素氟氧头孢体外都对MRSA 有一定的抗菌作用，单独治疗mec A阳性MRSA感染小鼠，实验治疗效果都明显不如去甲万古霉素。依替米星与氟氧头孢按1：1联合，治疗甲氧收林高度耐药MRSA感染小鼠，实验治疗效果不仅显著高于两药单独治疗结果，而且显著优于去甲万古霉素，说明这一联合方案具有明显的体内抗MRSA协同作用，值得进一步研究和进行临床验证。, http://www.100md.com(赵彩芸)
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感染动物模型主要用于研究与评价抗菌药物在体内的抗菌作用。MRSA 感染动物模型在MRSA耐药机制的深入研究，抗MRSA感染给药方案的确定以及评价抗MRSA 感染药物的体内抗菌作用等方面起到了很大作用。常用的MRSA感染动物模型有小鼠败血症感染模型，兔心内膜炎感染模型。由于去甲万古霉素是抗MRSA感染有效药物，因此，检验这种模型成功与否常用去甲万古霉素作为治疗评价标准。在目前的实验动物研究中去甲万古霉素抗MRSA感染动物模型常作为研究抗MRSA药物的阳性对照研究模型。
Totsuka等就亚胺培南与万古霉素协同抗MRSA的作用进行了体内研究。亚胺培南是碳青霉烯类抗菌药物，体外实验结果表明其单独对MRSA无抗菌活性，但与万古霉素联合体外具有协同作用，万古霉素对MRSA的抗生素后效应(PAE)是1.9-2.6小时，亚胺培南与万古霉素联合后抗生素后效应(PAE)是2.7-4.4小时，两药治疗MRSA感染小鼠，一组单独给予万古霉素1或2mg/kg治疗，一组单独给予亚胺培南/西司他丁5mg/kg治疗，细菌生长曲线结果表明，两组与空白对照组相似，对细菌生长无抑制作用，细菌抑制时间为0小时。而用万古霉素1mg/kg与亚胺培南/西司他丁5mg/kg共同治疗MRSA感染小鼠，细菌抑制时间则为2.9小时；万古霉素1mg/kg与亚胺培南/西司他丁10mg/kg共同治疗MRSA感染小鼠，细菌抑制时间为3.9小时；万古霉素2mg/kg与亚胺培南/西司他丁10mg/kg共同治疗MRSA感染小鼠，细菌抑制时间延长至5.2小时。结果表明联合给药对于MRSA感染小鼠是有效的，万古霉素与亚胺培南具有体内协同作用。
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本所陈琼等应用mec A基因阳性的甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌两株临床分离菌株(MRSA 92-106与MRSA 89-187)，感染小鼠引起的小鼠败血症实验模型，评价去甲万古霉素与依替米星、氟氧头孢单独给药，以及去甲万古霉素与依替米星+氟氧头孢联合给药进行比较其体内抗菌活性。氟氧头孢(flomoxef, FMX)是氧头孢烯类抗生素，具有广谱抗菌活性，对金黄色葡萄球菌包括部分MRSA 菌株也有较好体外抗菌活性，由于其结构特点，对β-内酰胺酶诱导性较低，对金黄色葡萄球菌感染也有较好临床疗效。依替米星为新型氨基糖苷类抗生素，为我国开发研制的新药，目前已应用于临床，对革兰氏阴性菌以及葡萄球菌有较好的体外抗菌活性，对MRSA也有一定的抗菌作用。实验前测定甲氧西林、苯唑西林、去甲万古霉素、氟氧头孢、依替米星五种抗生素对两株MRSA菌(MRSA 92-106与MRSA 89-187)的体外MIC测定结果表明为MRSA菌株，对甲氧西林、苯唑西林的MIC均为128->256mg/L，对去甲万古霉素、氟氧头孢、依替米星的MIC分别为8 mg/L与4 mg/L，4 mg/L与8 mg/L，16 mg/L与16 mg/L。实验用去甲万古霉素单独治疗作为阳性对照，分别与依替米星、氟氧头孢单独治疗及依替米星与氟氧头孢按1：1联合治疗三种治疗方案进行比较。MRSA 92-106与MRSA 89-187感染小鼠菌量分别为2X104 cfu/m与5X104cfu/ml。实验结果显示：去甲万古霉素、依替米星、氟氧头孢、依替米星/氟氧头孢(1:1)治疗 MRSA 92-106感染小鼠败血症的ED50(95%可信限)分别为5.8±1.1 mg/kg(4.9-7.0)、10.0±2.0 mg/kg(8.3-12.1)、26.9±5.1 mg/kg(22.4-32.6)、3.8±0.7 mg/kg3.1-4.5)，ED95分别为20.6 mg/kg、54.2 mg/kg、164.8 mg/kg、12.9 mg/kg。去甲万古霉素、依替米星、氟氧头孢、依替米星/氟氧头孢(1:1)治疗MRSA 89-187感染小鼠败血症的ED50 (95%可信限) 分别为4.1±0.8 mg/kg(3.4-4.9)、10.5±1.8 mg/kg(8.9-12.4)、29.2±5.0 mg/kg(24.7-34.5)、2.5±0.4 mg/kg(2.1-2.9)，ED95分别为13.9 mg/kg、23.3 mg/kg、67.0 mg/kg、6.9 mg/kg。上述结果经显著性t检验，去甲万古霉素单独治疗MRSA感染小鼠败血症疗效显著优于依替米星、氟氧头孢单独治疗组，而依替米星与氟氧头孢的联合治疗疗效显著优于去甲万古霉素单独治疗MRSA感染小鼠败血症。新的氨基糖苷类抗生素依替米星与氧头孢烯类抗生素氟氧头孢体外都对MRSA 有一定的抗菌作用，单独治疗mec A阳性MRSA感染小鼠，实验治疗效果都明显不如去甲万古霉素。依替米星与氟氧头孢按1：1联合，治疗甲氧收林高度耐药MRSA感染小鼠，实验治疗效果不仅显著高于两药单独治疗结果，而且显著优于去甲万古霉素，说明这一联合方案具有明显的体内抗MRSA协同作用，值得进一步研究和进行临床验证。, http://www.100md.com(赵彩芸)