过敏性紫癜变态反应机制研究(1)
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过敏性紫癜又称舍-亨氏(Schonlein Henoch)综合征，是一种以毛细血管炎为主要病变的变态反应性疾病。病因呈多因素，细菌、病毒、寄生虫以及食物、药物和寒冷等均可诱发该病，但病理机制目前不清楚。学者们推测Ⅲ型变态反应免疫复合物(CIC)沉积于血管壁是造成小血管免疫性损伤的主要原因[1, 2]，但根据我们多年来的临床经验，认为此看法并非完全正确，可能是机体在多因素影响下使机体处于免疫功能紊乱状态，导致I型和Ⅲ型变态反应联合作用所致的损伤。I型变态反应是先导，演变成Ⅲ型变态反应导致血管炎。本文通过8项指标对该病的发病机制进行探讨。
1 材料与方法
1.1 研究对象
1.1.1 过敏性紫癜患者：急性期94例，男45例，女49例，年龄5~55岁。患者四肢或全身大面积出血斑点，或伴肾脏或腹部病变。按1989年人民卫生出版社出版的《临床血液病学》的诊断标准，出血时间，凝血时间和血块收缩时间正常。血小板计数正常。患者来源于大庆油田总医院血液病科的住院及门诊病人，哈尔滨市第一医院血液病研究所住院及门诊患者及我院变态反应门诊随机应诊典型病例。恢复期病人80例，男34例，女46例，年龄5~57岁。经治疗后皮肤瘀血斑点基本消失，无肾、腹型表现。来源同上(主要为原急性期就诊患者)。急性期和缓解期实测例数因项目而异，分别列入表中。
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1.1.2 正常对照组：健康献血员30例，男15例，女15例，年龄20~41岁。体检健康
人血样30例，男15例，女15例，年龄5~42岁。
1.2 检测项目与方法
1.2.1 血清总IgE测定：取受检者静脉血2ml常规法分离血清，用ELISA方法，采用美国DPC公司生产的生物素作配体的ELISA试剂盒，在其配套的SOPHEIA 2000型全自动AlaSTAT过敏酶免疫检测仪上测总IgE值。
1.2.2 T细胞亚群测定：采受检者静脉血5ml，肝素抗凝，用淋巴细胞分层液(中国医学科学院生物科学研究所生产)常规分离淋巴细胞，用直接免疫荧光法在日产Olympus荧光显微镜下计数2000个淋巴细胞中CD3、CD4及CD8亚群的百分率。CD3、CD4及CD8单克隆荧光抗体购自北京军事医学科学院血液研究所。哈尔滨市血研所30例标本(急性期20例，恢复期10例)直接用该所的美国Becton-Dickinson公司生产，FACS420型流式细胞仪测定。
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1.2.3 嗜酸性粒细胞测定：常规取末梢血20μl加入0.38ml Hinkelman液(全国临检专业讨论会推荐)混匀，待红细胞完全溶解后，取少许混匀液滴入细胞计数板，静止3~5min，低倍镜计数两个计数池中10个大方格内嗜酸性粒细胞数。10个大方格内嗜酸性粒细胞数×20×106=嗜酸性粒细胞数/L。
1.2.4 嗜碱性粒细胞测定：用甲苯胺蓝法(Cooper法)直接计数，常规取末梢血20μl与1g/L EDTA.Na2生理盐水溶液80μl混匀，再加入甲苯胺蓝稀释液100μl后，取混匀的悬液滴入细胞计数板内的两个计数池中，静置1~3min，在低倍镜下计数所有计数池方格内的嗜碱性粒细胞(紫红色)，即为绝对值。
1.2.5 免疫复合物(CIC)测定：采用聚乙二醇(PEG)沉淀法。取静脉血，常规分离血清，取0.4ml血清加0.4ml 7% PEG，37℃水浴2小时后取出，3500r.min离心15分钟，弃上清后加3.5%PEG 5ml洗涤沉淀，3500r/min离心去上清，重复一次，将沉淀用双蒸水恢复至原血清容积(0.4ml)，再加0.1mol/L NaOH3.6ml将沉淀溶解，室温20分钟后用T520型分光光度计280nm波长测OD值。, http://www.100md.com(李连臣)
过敏性紫癜又称舍-亨氏(Schonlein Henoch)综合征，是一种以毛细血管炎为主要病变的变态反应性疾病。病因呈多因素，细菌、病毒、寄生虫以及食物、药物和寒冷等均可诱发该病，但病理机制目前不清楚。学者们推测Ⅲ型变态反应免疫复合物(CIC)沉积于血管壁是造成小血管免疫性损伤的主要原因[1, 2]，但根据我们多年来的临床经验，认为此看法并非完全正确，可能是机体在多因素影响下使机体处于免疫功能紊乱状态，导致I型和Ⅲ型变态反应联合作用所致的损伤。I型变态反应是先导，演变成Ⅲ型变态反应导致血管炎。本文通过8项指标对该病的发病机制进行探讨。
1 材料与方法
1.1 研究对象
1.1.1 过敏性紫癜患者：急性期94例，男45例，女49例，年龄5~55岁。患者四肢或全身大面积出血斑点，或伴肾脏或腹部病变。按1989年人民卫生出版社出版的《临床血液病学》的诊断标准，出血时间，凝血时间和血块收缩时间正常。血小板计数正常。患者来源于大庆油田总医院血液病科的住院及门诊病人，哈尔滨市第一医院血液病研究所住院及门诊患者及我院变态反应门诊随机应诊典型病例。恢复期病人80例，男34例，女46例，年龄5~57岁。经治疗后皮肤瘀血斑点基本消失，无肾、腹型表现。来源同上(主要为原急性期就诊患者)。急性期和缓解期实测例数因项目而异，分别列入表中。
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1.1.2 正常对照组：健康献血员30例，男15例，女15例，年龄20~41岁。体检健康
人血样30例，男15例，女15例，年龄5~42岁。
1.2 检测项目与方法
1.2.1 血清总IgE测定：取受检者静脉血2ml常规法分离血清，用ELISA方法，采用美国DPC公司生产的生物素作配体的ELISA试剂盒，在其配套的SOPHEIA 2000型全自动AlaSTAT过敏酶免疫检测仪上测总IgE值。
1.2.2 T细胞亚群测定：采受检者静脉血5ml，肝素抗凝，用淋巴细胞分层液(中国医学科学院生物科学研究所生产)常规分离淋巴细胞，用直接免疫荧光法在日产Olympus荧光显微镜下计数2000个淋巴细胞中CD3、CD4及CD8亚群的百分率。CD3、CD4及CD8单克隆荧光抗体购自北京军事医学科学院血液研究所。哈尔滨市血研所30例标本(急性期20例，恢复期10例)直接用该所的美国Becton-Dickinson公司生产，FACS420型流式细胞仪测定。
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1.2.3 嗜酸性粒细胞测定：常规取末梢血20μl加入0.38ml Hinkelman液(全国临检专业讨论会推荐)混匀，待红细胞完全溶解后，取少许混匀液滴入细胞计数板，静止3~5min，低倍镜计数两个计数池中10个大方格内嗜酸性粒细胞数。10个大方格内嗜酸性粒细胞数×20×106=嗜酸性粒细胞数/L。
1.2.4 嗜碱性粒细胞测定：用甲苯胺蓝法(Cooper法)直接计数，常规取末梢血20μl与1g/L EDTA.Na2生理盐水溶液80μl混匀，再加入甲苯胺蓝稀释液100μl后，取混匀的悬液滴入细胞计数板内的两个计数池中，静置1~3min，在低倍镜下计数所有计数池方格内的嗜碱性粒细胞(紫红色)，即为绝对值。
1.2.5 免疫复合物(CIC)测定：采用聚乙二醇(PEG)沉淀法。取静脉血，常规分离血清，取0.4ml血清加0.4ml 7% PEG，37℃水浴2小时后取出，3500r.min离心15分钟，弃上清后加3.5%PEG 5ml洗涤沉淀，3500r/min离心去上清，重复一次，将沉淀用双蒸水恢复至原血清容积(0.4ml)，再加0.1mol/L NaOH3.6ml将沉淀溶解，室温20分钟后用T520型分光光度计280nm波长测OD值。, http://www.100md.com(李连臣)