重组日本血吸虫特异性IgE相关蛋白的纯化及免疫学活性鉴定

http://www.100md.com 南京医科大学医学分子生物学研究所分子免疫寄生虫学研究室 南京210029 王勇；苏川；张兆松；胡雪梅；刘丰；

日本血吸虫|IGE|融合蛋白|包涵体|蛋白纯化,重组日本血吸虫特异性IGE相关蛋白的纯化及免疫学活性鉴定

    参见附件(65kb)。

     南京医科大学医学分子生物学研究所分子免疫寄生虫学研究室 南京210029 王勇；苏川；张兆松；胡雪梅；刘丰；李春林；季旻珺；朱翔；吴观陵

    关键词：日本血吸虫；IgE；融合蛋白；包涵体；蛋白纯化

    摘要：目的 纯化重组日本血吸虫特异性IgE抗体相关蛋白和鉴定其免疫原性。 方法 大量表达Sj43B/pGEX 6p 1 /BL2 1重组克隆菌 ,超声粉碎后离心获得融合表达的重组蛋白包涵体。经TNMFX缓冲液分步洗涤后 ,将包涵体溶解液经FPLC分离 ,获得重组融合蛋白组分 ,再经巯基二硫键转换复性后 ,用于免疫小鼠获得抗血清 ,分别用dot ELISA法和Westernblotting法对融合蛋白引起的特异性血清抗体同型反应进行鉴定。 结果 分步洗涤可有效去除重组蛋白包涵体沉淀中混杂的多数杂蛋白成分 ,FPLC分离可获得高纯度重组蛋白。用复性后的重组融合蛋白免疫小鼠 ,其中目的蛋白可引...

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