质粒辅助重组腺病毒相关病毒的制备和纯化
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中国医学科学院中国协和医科大学生化系；中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院神经外科 100730 李桂
参见附件(58kb)。
中国医学科学院中国协和医科大学生化系；中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院神经外科 100730 李桂林；王任直；王欣；窦万臣；张波；田士强；任祖渊；苏长保
关键词：依赖病毒；质粒
摘要：目的 探讨制备、纯化2型重组腺病毒相关病毒(rAAV2 )载体的简便、高效的方法。方法 采用磷酸钙方法将质粒辅助腺病毒相关病毒重组系统转染HEK2 93T细胞,重组rAAV ,通过氯仿 PEG80 0 0 /NaCl 氯仿法结合超滤纯化rAAV病毒。采用蛋白电泳和Western印迹检测病毒外壳蛋白,斑点杂交和病毒转染检测病毒的物理和感染滴度。结果 rAAV物理滴度为2×10 13 /ml,感染滴度为5×10 11/ml。结论 本实验方法简便、高效,不需要特殊的仪器设备,在普通实验室均可完成,制备的病毒纯度和滴度均可以满足动物实验需要。
中国医学科学院中国协和医科大学生化系；中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院神经外科 100730 李桂林；王任直；王欣；窦万臣；张波；田士强；任祖渊；苏长保
关键词：依赖病毒；质粒
摘要：目的 探讨制备、纯化2型重组腺病毒相关病毒(rAAV2 )载体的简便、高效的方法。方法 采用磷酸钙方法将质粒辅助腺病毒相关病毒重组系统转染HEK2 93T细胞,重组rAAV ,通过氯仿 PEG80 0 0 /NaCl 氯仿法结合超滤纯化rAAV病毒。采用蛋白电泳和Western印迹检测病毒外壳蛋白,斑点杂交和病毒转染检测病毒的物理和感染滴度。结果 rAAV物理滴度为2×10 13 /ml,感染滴度为5×10 11/ml。结论 本实验方法简便、高效,不需要特殊的仪器设备,在普通实验室均可完成,制备的病毒纯度和滴度均可以满足动物实验需要。
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