构建基因文库解析病毒密码
随着近日SARS疫苗进入一期临床研究，以及广东新发的几例SARS
患者治愈出院，人们对于SARS的担忧正在逐渐消退，但科学家却没有
忘记自己的职责，一直在尝试更全面地解析SARS，以期最终战而胜之。
中华医学会呼吸病学会主任委员、解放军总医院呼吸科刘又宁教授等
在国家“863”基金项目的资助下，自2003年7月开始一直在对北京小
汤山医院293例SARS康复者进行定期随访，现已取得了可喜进展。
通过基因序列测定，现已明确广东新发病例体内的SARS冠状病毒
存在变异，而这也是此次SARS患者传染性不强的原因之一，表明病毒
, http://www.100md.com
基因特征在流行病及临床上至关重要。为破解SARS病毒基因的秘密，刘又宁课题组构建了SARS康复者淋巴细胞差异表达基因文库，这对于
寻找SARS康复者体内表达特异性抗体的基因以及SARS患者易感基因等
差异表达的基因有着重要意义，也将有助于最终研制出治疗SARS的药
物和对易感者进行鉴定的方法。
我们知道，基因是病毒一切生物学活动的“密码”，指导着SARS
病毒如何入侵人体、如何与体内靶细胞结合并将其破坏、如何在人群
中传播等一系列关键环节，一旦将其破解，就有可能从源头解除SARS
病毒对人类的威胁。而SARS康复者本身就是破解这一“密码”最为宝
, 百拇医药
贵的“利器”，因为他们体内可能会存在一些与健康人不同的基因，包括容易被SARS病毒感染的基因，产生SARS抗体的基因等，一旦找到
这些基因就有可能从此入手，研制出针对SARS基因的治疗药物；或者
提前发现人群中对SARS的易感者，从而对这部分人采取疫苗注射等有
效防护措施，阻断SARS在人群中的传播。而构建差异表达基因文库就
有助于对上述基因进行筛选。
研究人员首先选取了SARS冠状病毒特异性抗体IgG强阳性的SARS
康复者的淋巴细胞mRNA，以及相应的健康献血者的mRNA，并应用抑制
消减杂交(SSH)的方法进行了SARS康复者血液淋巴细胞抗体表达基
, 百拇医药
因、易感基因及其他差异表达基因的筛选；然后对筛选出的基因进行
了测序和生物信息学分析。结果共获得了77个克隆，其中73个cDNA共
代表了8个不同的已知基因或与已知基因同源的基因。而另外4个cDNA
在GenBank数据库中无法查到对应的同源序列，从而有可能代表新基
因，这表明SARS康复者血液淋巴细胞中确实存在丰度较高的差异表达
基因。这4个新的基因序列只能通过拼接和结构域预测来寻找其功能
线索。目前研究人员已向Genebank登录了7个cDNA序列，且均被收录。
他们还在实验中筛选到几个在SARS康复者淋巴细胞中高表达的cD
, 百拇医药
NA克隆，比如有3个克隆与胸腺素β4基因同源性为94%～97%。胸腺
素β4在胸腺依赖性淋巴细胞调节与分化方面具有重要功能，能诱导T
细胞分型转变，在CD4细胞增殖抑制时，可激活CD8细胞增殖。SARS康
复者淋巴细胞中也克隆到了胸腺素β4基因，表明该基因可能在SARS
康复者淋巴细胞中高表达，并预示淋巴细胞可能处于较强的增殖活性
状态，而其活性的增强可能与冠状病毒系列特异性抗体的产生有关。
课题组同时发现有53个克隆与β2微球蛋白高度同源，β2微球蛋
白在免疫系统中起发挥免疫调节的作用，其水平高低反映了淋巴细胞
, 百拇医药
活性的高低，也可能参与了识别异己物质和提供杀伤细胞的作用。SA
RS康复者淋巴细胞差异表达基因文库中大量的克隆均表达β2微球蛋
白这样一个与免疫功能相关的基因，一方面证实SARS康复者针对冠状
病毒的特异免疫功能的确有较大提高，另一方面也预示着该免疫球蛋
白可能与冠状病毒特异性系列抗体的产生有关。
据刘又宁教授介绍，该文库的cDNA可能代表了SARS康复者血液淋
巴细胞中差异表达的基因，这为进一步研究SARS康复者的康复机理，以及寻找表达SARS冠状病毒特异性抗体的系列基因奠定了分子基础。
SARS作为一种人类尚陌生的疾病，其发展和转归的过程中还有许
多问题不清楚，对SARS康复者进行随访有助于进一步了解SARS疾病的
特点，为人类最终战胜SARS寻找有效的办法。, 百拇医药(罗刚)
患者治愈出院，人们对于SARS的担忧正在逐渐消退，但科学家却没有
忘记自己的职责，一直在尝试更全面地解析SARS，以期最终战而胜之。
中华医学会呼吸病学会主任委员、解放军总医院呼吸科刘又宁教授等
在国家“863”基金项目的资助下，自2003年7月开始一直在对北京小
汤山医院293例SARS康复者进行定期随访，现已取得了可喜进展。
通过基因序列测定，现已明确广东新发病例体内的SARS冠状病毒
存在变异，而这也是此次SARS患者传染性不强的原因之一，表明病毒
, http://www.100md.com
基因特征在流行病及临床上至关重要。为破解SARS病毒基因的秘密，刘又宁课题组构建了SARS康复者淋巴细胞差异表达基因文库，这对于
寻找SARS康复者体内表达特异性抗体的基因以及SARS患者易感基因等
差异表达的基因有着重要意义，也将有助于最终研制出治疗SARS的药
物和对易感者进行鉴定的方法。
我们知道，基因是病毒一切生物学活动的“密码”，指导着SARS
病毒如何入侵人体、如何与体内靶细胞结合并将其破坏、如何在人群
中传播等一系列关键环节，一旦将其破解，就有可能从源头解除SARS
病毒对人类的威胁。而SARS康复者本身就是破解这一“密码”最为宝
, 百拇医药
贵的“利器”，因为他们体内可能会存在一些与健康人不同的基因，包括容易被SARS病毒感染的基因，产生SARS抗体的基因等，一旦找到
这些基因就有可能从此入手，研制出针对SARS基因的治疗药物；或者
提前发现人群中对SARS的易感者，从而对这部分人采取疫苗注射等有
效防护措施，阻断SARS在人群中的传播。而构建差异表达基因文库就
有助于对上述基因进行筛选。
研究人员首先选取了SARS冠状病毒特异性抗体IgG强阳性的SARS
康复者的淋巴细胞mRNA，以及相应的健康献血者的mRNA，并应用抑制
消减杂交(SSH)的方法进行了SARS康复者血液淋巴细胞抗体表达基
, 百拇医药
因、易感基因及其他差异表达基因的筛选；然后对筛选出的基因进行
了测序和生物信息学分析。结果共获得了77个克隆，其中73个cDNA共
代表了8个不同的已知基因或与已知基因同源的基因。而另外4个cDNA
在GenBank数据库中无法查到对应的同源序列，从而有可能代表新基
因，这表明SARS康复者血液淋巴细胞中确实存在丰度较高的差异表达
基因。这4个新的基因序列只能通过拼接和结构域预测来寻找其功能
线索。目前研究人员已向Genebank登录了7个cDNA序列，且均被收录。
他们还在实验中筛选到几个在SARS康复者淋巴细胞中高表达的cD
, 百拇医药
NA克隆，比如有3个克隆与胸腺素β4基因同源性为94%～97%。胸腺
素β4在胸腺依赖性淋巴细胞调节与分化方面具有重要功能，能诱导T
细胞分型转变，在CD4细胞增殖抑制时，可激活CD8细胞增殖。SARS康
复者淋巴细胞中也克隆到了胸腺素β4基因，表明该基因可能在SARS
康复者淋巴细胞中高表达，并预示淋巴细胞可能处于较强的增殖活性
状态，而其活性的增强可能与冠状病毒系列特异性抗体的产生有关。
课题组同时发现有53个克隆与β2微球蛋白高度同源，β2微球蛋
白在免疫系统中起发挥免疫调节的作用，其水平高低反映了淋巴细胞
, 百拇医药
活性的高低，也可能参与了识别异己物质和提供杀伤细胞的作用。SA
RS康复者淋巴细胞差异表达基因文库中大量的克隆均表达β2微球蛋
白这样一个与免疫功能相关的基因，一方面证实SARS康复者针对冠状
病毒的特异免疫功能的确有较大提高，另一方面也预示着该免疫球蛋
白可能与冠状病毒特异性系列抗体的产生有关。
据刘又宁教授介绍，该文库的cDNA可能代表了SARS康复者血液淋
巴细胞中差异表达的基因，这为进一步研究SARS康复者的康复机理，以及寻找表达SARS冠状病毒特异性抗体的系列基因奠定了分子基础。
SARS作为一种人类尚陌生的疾病，其发展和转归的过程中还有许
多问题不清楚，对SARS康复者进行随访有助于进一步了解SARS疾病的
特点，为人类最终战胜SARS寻找有效的办法。, 百拇医药(罗刚)