脑脉复元合剂生产工艺研究
【摘要】 目的 通过提取实验研究，确定提取工艺。方法 冷提取部分采用对比实验法;热提取部分采用正交实验法。结果 冷提取部分筛选出了提取溶剂、提取剂量、溶剂用量及提取次数和提取时间;热提取部分优选出了挥发油提取时间及水煎工艺条件。结论 通过实验确定了合理的提取工艺路线。
关键词 脑脉复元合剂 提取 正交实验 含量测定
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2003)19-2785-02
脑脉复元合剂是国家重点科技攻关项目“蚯蚓溶栓酶的研究” [1] 系列项目之一，处方是以地龙(蚯蚓)为主要原料，辅以川芎、郁金等中药加工而成的复方制剂，具有活血化瘀、行气通络的功效。而方中的成分比较复杂，影响提取效果的因素很多，故本文对方中地龙的提取工艺及川芎、郁金挥发油提取和水煎提取工艺分别进行了实验研究，最终确定了合理的提取工艺。
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1 材料与方法
1.1 材料 高速冷冻离心机，GL21型;紫外分光光度计，723OG型。蚯蚓:赤子爱胜蚓，本研究室养殖;川芎、郁金，均购于药材公司;乙醇为分析纯试剂。
1.2 方法 地龙中有效活性成分的提取采取对比提取法;川芎、郁金中挥发油及水煎工艺条件的确定采用正交实验法。
2 结果与分析
由于处方所含成分比较复杂，在提取过程中使用的溶剂及溶剂用量、提取次数、提取时间等均对提取效果产生影响，故对生产工艺进行了系统研究。
2.1 地龙有效成分的提取
2.1.1 提取溶剂的选择 地龙中主要有效成分在低浓度乙醇和水中均有很好的溶解度，故选用低浓度乙醇提取和加热水提及室温水提进行比较分析。取方量地龙两份，分别用10%乙醇溶液和蒸馏水作提取溶剂室温浸提，离心，收取上清液，再取方量地龙一份，加热水煮两次，合并提取液，然后分别测定三种提取液中活性蛋白成分，测定方法采用TAME法和溶解纤维蛋白平板法 [3] ，结果为:水煎煮提取的TAME单位效价和溶解纤维蛋白平板面积均为0;室温水提取的效果不明显;10%乙醇提取的TAME单位效价为6.89U/ml，溶解纤维蛋白平板面积为493.8mm 2 /ml。结果表明:低浓度乙醇提取效果较好。
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2.1.2 提取溶剂中最佳乙醇含量的确定 在上述研究的基础上，对溶剂中含醇量高低所产生的提取效果进行了对比试验，设含乙醇6个浓度的溶剂进行提取，然后测定TAME单位效价和溶解纤维蛋白平板面积，方法同2.1.1中的检测方法，结果见表1。由表1结果可知:含乙醇5%的溶剂提取效果相对较低，含乙醇10%和20%、30%的溶剂提取效果比较接近，但从降低成本考虑，以10%的乙醇溶液为提取溶剂更为合适。
表1 溶剂中不同乙醇含量对提取效果影响比较
2.1.3 提取次数确定试验取方量地龙，加10%的乙醇溶液6倍量，提取次数分别以1、2、3次进行提取，离心，各自合并上清液，分别用2.1.1中的方法测定，结果为:1次提取的TAME单位效价为5.42，溶纤面积为390.24mm 2 /ml;2次提取的结果分别为7.61和550.01mm 2 /ml;3次提取的结果分别为7.69和552.96mm 2 /ml。从结果看，提取次数以3次提取效果最优，但2次提取与3次提取有效成分浸出量相差较小，从减少工时缩短生产周期考虑，故提取次数定分为2次提取。
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2.1.4 浸提时间研究 取一定量地龙加10%乙醇溶液6倍量，分别浸提4h、8h、10h、12h，进行试验比较，结果分别为:TAME单位效价3.01、5.47、7.12、7.16;溶解纤维蛋白平板面积(mm 2 /ml)216.72、393.84、512.64、515.52。由试验结果看出:在一定时间内，浸提时间与浸提量成正比，超过10h，有效成分的含量增加很小，无实际意义，故浸提时间选用10h为宜。
2.2 川芎、郁金中挥发油提取及水煎工艺条件的确定
2.2.1 挥发油提取时间考查 取三倍处方量郁金、川芎药材，水蒸气蒸馏法提取挥发油，加水量为药材量的8倍，测定第1.5、3.0、4.5、6.0h的出油量，计算出油率分别为1.52、2.78、2.88、2.90，结果表明，加8倍量水蒸馏提取4.5h已基本将挥发油提尽，故挥发油蒸馏提取时间确定为4.5h。
2.2.2 川芎、郁金水煎工艺条件的确定 水煎工艺条件采用正交试验优化选择，考察加水量、水煎时间、水煎次数三个因子，采用四因素三水平正交表。选择川芎中阿魏酸含量为考查水煎工艺条件的指标，采用双波长扫描法 [2] 进行测定。选用L 9 (3 4 )正交实验表 [4] 安排实验，见表2。水煎工艺正交实验结果及方差分析见表3和表4。
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表2 水煎提取三水平正交表水平
表中直观结果和方差分析均表明A、C为显著因子，B属不显著因子，最优组合为A 2 B1 C 1 ，即8倍量水煎煮3次，每次2.0h。
2.2.3 川芎、郁金中提取液浓缩及醇沉 对按上述工艺提取得到的提取液进行浓缩，使达到一定浓度，用乙醇溶液进行醇沉，收取醇沉液，回收乙醇后，再浓缩，即得提取药膏。
3 讨论
根据以上实验研究，确定了稳定合理的生产工艺:即处方量地龙净处理后，加10%的乙醇溶液3.5倍量，室温浸提10h，离心。残渣再加10%乙醇溶液2.5倍量，浸提、离心同上，合并两次提取液备用。处方量川芎、郁金加8倍量水，
表3 水煎提取正交实验设计
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表4 水煎提取率方差分析表
注:F 1-0.10 (2，2)=9，F 1-0.05 (2，2)=19，F 1-0.01 (2，2)=99
蒸馏6.0h提取挥发油，滤出水溶液，药渣加8倍量水煎煮3次，每次2h，合并溶液，浓缩，浓缩液加乙醇去除杂质，收取醇沉液，回收乙醇，再浓缩。将上述地龙提取液和挥发油、浓缩膏合并，加水使成1000ml，混匀，灌封，即得。
参考文献
1 中华人民共和国卫生部部颁标准(试行).蚓激酶胶囊.附件一:TAME法.1995.
2 中华人民共和国药典委员会编.中华人民共和国药典.北京:人民卫生出版社，1995.
3 中华人民共和国卫生部部颁标准(试行).蚓激酶胶囊.附件二:琼脂糖-纤维蛋白平板法.1995.
4 湖北中药学院主编.药剂学.上海:上海科学技术出版社，1981，162.
作者单位:122000朝阳辽宁省微生物科学研究院
122000朝阳辽宁华源天利药业有限公司
(编辑李 木), 百拇医药(宗玉丽)
关键词 脑脉复元合剂 提取 正交实验 含量测定
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2003)19-2785-02
脑脉复元合剂是国家重点科技攻关项目“蚯蚓溶栓酶的研究” [1] 系列项目之一，处方是以地龙(蚯蚓)为主要原料，辅以川芎、郁金等中药加工而成的复方制剂，具有活血化瘀、行气通络的功效。而方中的成分比较复杂，影响提取效果的因素很多，故本文对方中地龙的提取工艺及川芎、郁金挥发油提取和水煎提取工艺分别进行了实验研究，最终确定了合理的提取工艺。
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1 材料与方法
1.1 材料 高速冷冻离心机，GL21型;紫外分光光度计，723OG型。蚯蚓:赤子爱胜蚓，本研究室养殖;川芎、郁金，均购于药材公司;乙醇为分析纯试剂。
1.2 方法 地龙中有效活性成分的提取采取对比提取法;川芎、郁金中挥发油及水煎工艺条件的确定采用正交实验法。
2 结果与分析
由于处方所含成分比较复杂，在提取过程中使用的溶剂及溶剂用量、提取次数、提取时间等均对提取效果产生影响，故对生产工艺进行了系统研究。
2.1 地龙有效成分的提取
2.1.1 提取溶剂的选择 地龙中主要有效成分在低浓度乙醇和水中均有很好的溶解度，故选用低浓度乙醇提取和加热水提及室温水提进行比较分析。取方量地龙两份，分别用10%乙醇溶液和蒸馏水作提取溶剂室温浸提，离心，收取上清液，再取方量地龙一份，加热水煮两次，合并提取液，然后分别测定三种提取液中活性蛋白成分，测定方法采用TAME法和溶解纤维蛋白平板法 [3] ，结果为:水煎煮提取的TAME单位效价和溶解纤维蛋白平板面积均为0;室温水提取的效果不明显;10%乙醇提取的TAME单位效价为6.89U/ml，溶解纤维蛋白平板面积为493.8mm 2 /ml。结果表明:低浓度乙醇提取效果较好。
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2.1.2 提取溶剂中最佳乙醇含量的确定 在上述研究的基础上，对溶剂中含醇量高低所产生的提取效果进行了对比试验，设含乙醇6个浓度的溶剂进行提取，然后测定TAME单位效价和溶解纤维蛋白平板面积，方法同2.1.1中的检测方法，结果见表1。由表1结果可知:含乙醇5%的溶剂提取效果相对较低，含乙醇10%和20%、30%的溶剂提取效果比较接近，但从降低成本考虑，以10%的乙醇溶液为提取溶剂更为合适。
表1 溶剂中不同乙醇含量对提取效果影响比较
2.1.3 提取次数确定试验取方量地龙，加10%的乙醇溶液6倍量，提取次数分别以1、2、3次进行提取，离心，各自合并上清液，分别用2.1.1中的方法测定，结果为:1次提取的TAME单位效价为5.42，溶纤面积为390.24mm 2 /ml;2次提取的结果分别为7.61和550.01mm 2 /ml;3次提取的结果分别为7.69和552.96mm 2 /ml。从结果看，提取次数以3次提取效果最优，但2次提取与3次提取有效成分浸出量相差较小，从减少工时缩短生产周期考虑，故提取次数定分为2次提取。
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2.1.4 浸提时间研究 取一定量地龙加10%乙醇溶液6倍量，分别浸提4h、8h、10h、12h，进行试验比较，结果分别为:TAME单位效价3.01、5.47、7.12、7.16;溶解纤维蛋白平板面积(mm 2 /ml)216.72、393.84、512.64、515.52。由试验结果看出:在一定时间内，浸提时间与浸提量成正比，超过10h，有效成分的含量增加很小，无实际意义，故浸提时间选用10h为宜。
2.2 川芎、郁金中挥发油提取及水煎工艺条件的确定
2.2.1 挥发油提取时间考查 取三倍处方量郁金、川芎药材，水蒸气蒸馏法提取挥发油，加水量为药材量的8倍，测定第1.5、3.0、4.5、6.0h的出油量，计算出油率分别为1.52、2.78、2.88、2.90，结果表明，加8倍量水蒸馏提取4.5h已基本将挥发油提尽，故挥发油蒸馏提取时间确定为4.5h。
2.2.2 川芎、郁金水煎工艺条件的确定 水煎工艺条件采用正交试验优化选择，考察加水量、水煎时间、水煎次数三个因子，采用四因素三水平正交表。选择川芎中阿魏酸含量为考查水煎工艺条件的指标，采用双波长扫描法 [2] 进行测定。选用L 9 (3 4 )正交实验表 [4] 安排实验，见表2。水煎工艺正交实验结果及方差分析见表3和表4。
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表2 水煎提取三水平正交表水平
表中直观结果和方差分析均表明A、C为显著因子，B属不显著因子，最优组合为A 2 B1 C 1 ，即8倍量水煎煮3次，每次2.0h。
2.2.3 川芎、郁金中提取液浓缩及醇沉 对按上述工艺提取得到的提取液进行浓缩，使达到一定浓度，用乙醇溶液进行醇沉，收取醇沉液，回收乙醇后，再浓缩，即得提取药膏。
3 讨论
根据以上实验研究，确定了稳定合理的生产工艺:即处方量地龙净处理后，加10%的乙醇溶液3.5倍量，室温浸提10h，离心。残渣再加10%乙醇溶液2.5倍量，浸提、离心同上，合并两次提取液备用。处方量川芎、郁金加8倍量水，
表3 水煎提取正交实验设计
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表4 水煎提取率方差分析表
注:F 1-0.10 (2，2)=9，F 1-0.05 (2，2)=19，F 1-0.01 (2，2)=99
蒸馏6.0h提取挥发油，滤出水溶液，药渣加8倍量水煎煮3次，每次2h，合并溶液，浓缩，浓缩液加乙醇去除杂质，收取醇沉液，回收乙醇，再浓缩。将上述地龙提取液和挥发油、浓缩膏合并，加水使成1000ml，混匀，灌封，即得。
参考文献
1 中华人民共和国卫生部部颁标准(试行).蚓激酶胶囊.附件一:TAME法.1995.
2 中华人民共和国药典委员会编.中华人民共和国药典.北京:人民卫生出版社，1995.
3 中华人民共和国卫生部部颁标准(试行).蚓激酶胶囊.附件二:琼脂糖-纤维蛋白平板法.1995.
4 湖北中药学院主编.药剂学.上海:上海科学技术出版社，1981，162.
作者单位:122000朝阳辽宁省微生物科学研究院
122000朝阳辽宁华源天利药业有限公司
(编辑李 木), 百拇医药(宗玉丽)