红细胞免疫粘附试验快速鉴别外周血T、B细胞初探
【摘要】 目的 探讨快速鉴别外周血T、B淋巴细胞的可能性。方法 利用红细胞免疫粘附试验进行分别鉴别。结果 红细胞既可直接与酵母菌结合亦可直接与T细胞结合;T细胞只能与红细胞直接结合;而B细胞只能与酵母菌细胞直接结合。结论 凡直接与红细胞结合的淋巴细胞是T细胞，凡直接与酵母菌结合的淋巴细胞是B细胞。
关键词 淋巴细胞 快速鉴别 红细胞 免疫粘附
【文献标识码】 A 【文章编号】 1680-6115(2004)03-0202-02
Preliminary studies for fast distinguishing between T-cell and B-cell inperipheral blood
adopted the experiment of immune adherence of erythrocytes
, 百拇医药
Zhu Ling，Yu Chuanxing
Immunology Department of Fujian Medical University，Fuzhou350004.
【Abstract】 Objective To investigate the possibility for distinguishing between T-cell and B-cell in peˉripheral blood fastly.Methods To adopt the experiment of immune adherence of erythrocytes.Results Erythrocytes can not only combining directly with microzymes but also with T-cell，T-cell can only combining directly with eryˉthrocytes;while B-cell can only combining directly with microzymes.Conclusion All that are T-cell if they can combining with erythrocytes;All that are B-cell if they can combining with microzymes.
, 百拇医药
Key words lymphocytes fast distinguishing erythrocytes immune adherence
外周血T、B淋巴细胞的分类鉴别、定量检测方法有许多 [1，2] ，但能够快速鉴别的未见报道。本文利用红细胞免疫粘附试验，初步证实了快速鉴别外周血T、B淋巴细胞的可能性。
1 材料与方法
1.1 材料 动物:昆明系小鼠体重(20±2)g，均为雄性(由福建医科大学动物中心提供)。正常人外周血(由福建医科大学第一附属医院提供)。
1.2 方法
1.2.1 菌液配制 将酵母菌用无菌NS洗涤(2000rpm×3min×3次)，配成1%悬液。置水浴内煮沸20min，充分混匀。用二层定性滤纸(或16层纱布)过滤，除去小凝块，在低倍镜下观察见分散或单个菌细胞即可。测定菌液量(用无菌量杯)等量分装2瓶。标号后4℃保存。
, http://www.100md.com
1.2.2 补体致敏的酵母菌试剂 试验当天，按需要取菌液 适量加入等量小白鼠血清;混匀后置37℃水浴15min。用无菌NS洗涤一次2500rpm×10min，弃上清。用无菌NS将沉淀细胞重新混悬(加1ml NS)。计数细胞数后，配成1×10 8 /ml悬液备用。
1.2.3 标本处理 肝素抗凝血或静脉血用NS洗涤离心3次，2000rpm×5min，计数后配成1.25×10 7 /ml红细胞悬液备用。
1.2.4 具体步骤 取洁净小试管2支，1号管加入RBC悬液100μl，补体致敏酵母菌100μl，2号管加入RBC悬液100μl，未致敏酵母菌100μl，摇匀，置37℃水浴30min，取出轻轻摇晃匀，各加NS200μl，混匀后再加0.25%戊二醛75μl轻轻摇匀，分别取1/3量涂片，吹干。加甲醛固定，用瑞氏染色。镜检200个RBC。
2 结果
, 百拇医药
细胞被染成粉红色;酵母菌细胞为兰色。本实验结果中可见三种结合现象，分别见图1、图2、图3。
图1 酵母菌与RBC的结合
图2 结合了酵母菌的RBC与T细胞的结合
图3 酵母菌或结合了RBC的酵母菌与B细胞的结合
3 讨论
随着红细胞免疫功能研究的日益深入，用红细胞免疫粘附试验来判定机体在各种病理状态下的免疫功能状态已成为一种常规的手段。
本实验的基本方法亦是红细胞粘附试验，从其结果中我们不难看出，酵母菌经过补体致敏后可与RBC牢固结合，主要是通过95%以上分布于RBC膜上的CR 1 与C3b相结合而实现的(图1) [3～5] 。图2中显示的结合状态，其机制主要是RBC膜上的LFA-3(CD58)与T细胞膜上的LFA-2(CD2)相结合;其本质即为红细胞的抗原提呈细胞(APC)样作用 [6，7] 。图3中的现象，则是由于B细胞膜CR 1 或CR 2 /CR 3 与经补体调理后的酵母菌细胞结合而造成的。因CR 1 绝大多数存在于RBC膜上，少数分布于B细胞、DC、粒细胞、肥大细胞及NKsub等细胞膜表面，而T细胞膜上无此粘附分子，所以T细胞不可能直接与酵母菌结合。同时CD2分子只存在于T细胞与NK sub 细胞膜表面，所以B细胞与红细胞膜结合的可能性很小。
, 百拇医药
综上所述，使得我们利用这不同的结合现象，不用荧光法即可初步快速区分外周血的T、B淋巴细胞成为可能。即，凡直接与红细胞结合的淋巴细胞是T细胞;凡直接与酵母菌结合的淋巴细胞是B细胞。但这种实验方法与传统的T、B淋巴细胞鉴别方法的平行关系究竟如何，还尚待进一步的研究论证。同时，本实验方法是否能对脾脏中的T、B淋巴细胞加以区分，亦有待进一步深入研究。但显然，传统鉴别方法操作步骤繁杂，耗时、 耗力，且实验成本高;而本方法快速、简便、易操作，且实验成本大幅度减低，不失为一种进行T、B淋巴细胞初步鉴别的新方法。
参考文献
1 John E Coligan，And H Kruisbeek，David MShevach，et al.Current Proˉtocols in Immunology.New York:Greene Publishing Associates and Wiˉley-Interscience，1992，222.
, http://www.100md.com
2 沈关心，周汝麟.现代免疫学实验技术.武汉:湖北科学技术出版社，1998，10.
3 刘景田，张洁.红细胞免疫学.西安:陕西科学技术出版社，1995，10.
4 Giuliani AL，Pora R，Verenini M，et al.Rabbit IgG antibodies against cord red blood cell membranes bind to complement receptor1(CD35).Acta-Haematol，1998，100(3):123-129.
5 Lach-Trifilieff E，Marfurt J，Schwarz S，et al.Complement receptor1(CD35)on human reticulocytes:normal expression in systemic lupus erythematosus and HIV-infected patients.J-Immunol，1999，162(12):7549-7554.
, 百拇医药
6 Neeson P J，Thurlow P J，Jamieson G P.Characterization of activated lymphocyte-tumor cell adhesion.J-Leukoc-Biol，2000，67(6):847-855.
7 Kitao A，Wagner G.A space-time structure determination of human CD2revealsthe CD58-binding mode.Proc-Natl-Acad-Sci-U-S-A，2000，97(5):2064-2068.
作者单位:350004福州福建医科大学基础免疫系
350003福建省第二人民医院呼吸内科
(收稿日期:2004-02-15)
(编辑刘 静), 百拇医药(朱玲 余传星)
关键词 淋巴细胞 快速鉴别 红细胞 免疫粘附
【文献标识码】 A 【文章编号】 1680-6115(2004)03-0202-02
Preliminary studies for fast distinguishing between T-cell and B-cell inperipheral blood
adopted the experiment of immune adherence of erythrocytes
, 百拇医药
Zhu Ling，Yu Chuanxing
Immunology Department of Fujian Medical University，Fuzhou350004.
【Abstract】 Objective To investigate the possibility for distinguishing between T-cell and B-cell in peˉripheral blood fastly.Methods To adopt the experiment of immune adherence of erythrocytes.Results Erythrocytes can not only combining directly with microzymes but also with T-cell，T-cell can only combining directly with eryˉthrocytes;while B-cell can only combining directly with microzymes.Conclusion All that are T-cell if they can combining with erythrocytes;All that are B-cell if they can combining with microzymes.
, 百拇医药
Key words lymphocytes fast distinguishing erythrocytes immune adherence
外周血T、B淋巴细胞的分类鉴别、定量检测方法有许多 [1，2] ，但能够快速鉴别的未见报道。本文利用红细胞免疫粘附试验，初步证实了快速鉴别外周血T、B淋巴细胞的可能性。
1 材料与方法
1.1 材料 动物:昆明系小鼠体重(20±2)g，均为雄性(由福建医科大学动物中心提供)。正常人外周血(由福建医科大学第一附属医院提供)。
1.2 方法
1.2.1 菌液配制 将酵母菌用无菌NS洗涤(2000rpm×3min×3次)，配成1%悬液。置水浴内煮沸20min，充分混匀。用二层定性滤纸(或16层纱布)过滤，除去小凝块，在低倍镜下观察见分散或单个菌细胞即可。测定菌液量(用无菌量杯)等量分装2瓶。标号后4℃保存。
, http://www.100md.com
1.2.2 补体致敏的酵母菌试剂 试验当天，按需要取菌液 适量加入等量小白鼠血清;混匀后置37℃水浴15min。用无菌NS洗涤一次2500rpm×10min，弃上清。用无菌NS将沉淀细胞重新混悬(加1ml NS)。计数细胞数后，配成1×10 8 /ml悬液备用。
1.2.3 标本处理 肝素抗凝血或静脉血用NS洗涤离心3次，2000rpm×5min，计数后配成1.25×10 7 /ml红细胞悬液备用。
1.2.4 具体步骤 取洁净小试管2支，1号管加入RBC悬液100μl，补体致敏酵母菌100μl，2号管加入RBC悬液100μl，未致敏酵母菌100μl，摇匀，置37℃水浴30min，取出轻轻摇晃匀，各加NS200μl，混匀后再加0.25%戊二醛75μl轻轻摇匀，分别取1/3量涂片，吹干。加甲醛固定，用瑞氏染色。镜检200个RBC。
2 结果
, 百拇医药
细胞被染成粉红色;酵母菌细胞为兰色。本实验结果中可见三种结合现象，分别见图1、图2、图3。
图1 酵母菌与RBC的结合
图2 结合了酵母菌的RBC与T细胞的结合
图3 酵母菌或结合了RBC的酵母菌与B细胞的结合
3 讨论
随着红细胞免疫功能研究的日益深入，用红细胞免疫粘附试验来判定机体在各种病理状态下的免疫功能状态已成为一种常规的手段。
本实验的基本方法亦是红细胞粘附试验，从其结果中我们不难看出，酵母菌经过补体致敏后可与RBC牢固结合，主要是通过95%以上分布于RBC膜上的CR 1 与C3b相结合而实现的(图1) [3～5] 。图2中显示的结合状态，其机制主要是RBC膜上的LFA-3(CD58)与T细胞膜上的LFA-2(CD2)相结合;其本质即为红细胞的抗原提呈细胞(APC)样作用 [6，7] 。图3中的现象，则是由于B细胞膜CR 1 或CR 2 /CR 3 与经补体调理后的酵母菌细胞结合而造成的。因CR 1 绝大多数存在于RBC膜上，少数分布于B细胞、DC、粒细胞、肥大细胞及NKsub等细胞膜表面，而T细胞膜上无此粘附分子，所以T细胞不可能直接与酵母菌结合。同时CD2分子只存在于T细胞与NK sub 细胞膜表面，所以B细胞与红细胞膜结合的可能性很小。
, 百拇医药
综上所述，使得我们利用这不同的结合现象，不用荧光法即可初步快速区分外周血的T、B淋巴细胞成为可能。即，凡直接与红细胞结合的淋巴细胞是T细胞;凡直接与酵母菌结合的淋巴细胞是B细胞。但这种实验方法与传统的T、B淋巴细胞鉴别方法的平行关系究竟如何，还尚待进一步的研究论证。同时，本实验方法是否能对脾脏中的T、B淋巴细胞加以区分，亦有待进一步深入研究。但显然，传统鉴别方法操作步骤繁杂，耗时、 耗力，且实验成本高;而本方法快速、简便、易操作，且实验成本大幅度减低，不失为一种进行T、B淋巴细胞初步鉴别的新方法。
参考文献
1 John E Coligan，And H Kruisbeek，David MShevach，et al.Current Proˉtocols in Immunology.New York:Greene Publishing Associates and Wiˉley-Interscience，1992，222.
, http://www.100md.com
2 沈关心，周汝麟.现代免疫学实验技术.武汉:湖北科学技术出版社，1998，10.
3 刘景田，张洁.红细胞免疫学.西安:陕西科学技术出版社，1995，10.
4 Giuliani AL，Pora R，Verenini M，et al.Rabbit IgG antibodies against cord red blood cell membranes bind to complement receptor1(CD35).Acta-Haematol，1998，100(3):123-129.
5 Lach-Trifilieff E，Marfurt J，Schwarz S，et al.Complement receptor1(CD35)on human reticulocytes:normal expression in systemic lupus erythematosus and HIV-infected patients.J-Immunol，1999，162(12):7549-7554.
, 百拇医药
6 Neeson P J，Thurlow P J，Jamieson G P.Characterization of activated lymphocyte-tumor cell adhesion.J-Leukoc-Biol，2000，67(6):847-855.
7 Kitao A，Wagner G.A space-time structure determination of human CD2revealsthe CD58-binding mode.Proc-Natl-Acad-Sci-U-S-A，2000，97(5):2064-2068.
作者单位:350004福州福建医科大学基础免疫系
350003福建省第二人民医院呼吸内科
(收稿日期:2004-02-15)
(编辑刘 静), 百拇医药(朱玲 余传星)