柴芩承气汤对实验性坏死性胰腺炎肠道屏障保护作用的实验研究
http://www.100md.com
中华医学实践杂志 2003年2月 第2卷 第2期
【摘要】 目的 观察柴芩承气汤与生长抑素对急性坏死性胰腺炎(ANP)肠道机械屏障和免疫屏障的改变的影响。方法 用经胰胆管逆行注入牛磺胆酸钠复制Wistar大鼠ANP模型，观察ANP时，两种药物治疗后肠粘膜和胰腺组织结构变化，肠内容物中分泌型免疫球蛋白(sIgA)，肠组织丙二醛(MDA)，血中淀粉酶(AMY)。结果 ANP时肠粘膜和胰腺发生病理损伤，肠内容物sIgA含量显著下降(P<0.01)，肠组织中MDA、血中AMY含量显著升高(均为P<0.01)，且MDA与sIgA呈显著负相关(r=-0.8818，r=-0.9236，P<0.01)，柴芩承气汤可降低肠组织MDA(P<0.01)，提高肠内容物sIgA含量(P<0.01)。结论 中药柴芩承气汤和生长抑素可减轻肠粘膜和胰腺组织损伤，提高肠内容物中sIgA含量。
关键词 急性胰腺炎 肠道屏障MDA 防治
【文献标识码】 A 【文章编号】 1684-2030(2003)02-0100-03
, http://www.100md.com
The protection of chai qin cheng qi juice for intestinal mechan-barrier
and immuno-barrier in experimental acute necrotizing pacreatitis
Lai Shaotong，Miao Dan，Bao Xiuqi，et al.
Department of Gastroenterology Dalian Friendship Hospital，Liaonin116001.
【Abstract】 Objective To observe the changes of intestinal mechan-barrier and immuno-barrier in acute necrotizing pacreatitis and the effects of Chai qin cheng qi juice on the changes.Methods The model of ANP reproˉduced by infusion of NaTc into biliopancreatic duct.All animals were sacrificed on24hour after reproduced model，sIgA level in intestinal content，MDA level in intestinal mousca，morphology of pancreas and intestinal mousca were obˉserved.Results The result showed that intestinal mousca and pancreas damage，a decrease of sIgA in intestinal conˉtent(P<0.01)，an increase of MDA in mousca(P<0.01)，were occurred inANP rats.Treatment with Chai qin cheng qi juice markely improved intestinal mousea and pancreas injury，elevated sIgA level(P<0.01，P<0.01)，reˉduced the levels of MDA in mousca，(P<0.01，P<0.01).Conclusion Chai qin cheng qi juice attenuated intestinal mechan and immuno-barrier damage after ANP.
, 百拇医药
Key words acute necrotizing pancreatitis intestinal/gut barrier MDA therapeutic measures
胰腺及周围组织感染是SAP(继发性急性胰腺感染)患者死亡的主要原因 [1] 。大量的细菌学研究证实SAP的继发感染是主要由肠道细菌移行所致，而肠道屏障功能受损是肠道细菌移位的前提 [2] 。本实验探讨柴芩承气汤及生长抑素治疗实验性ANP大鼠，观察两种药物的疗效并探讨其作用机制。
1 材料和方法
1.1 动物及试剂 Wistar纯系大鼠50只，雌雄各半，体重280±20g。SAP模型按Aho等 [10] 方法制备。牛磺胆酸钠(NaTc):购于美国Sigma公司。善得定:瑞士Serono公司生产。柴芩承气汤加减:由佳木斯大学临床医学院中药房煎制。AMY测定试剂盒:购于上海长征医学科学有限公司。 125 I标记的sIgA放射免疫分析试剂盒:购于上海放射免疫分析技术研究所。MDA测定试剂盒:购于南京建成生物工程研究所。将50只健康Wistar大鼠随机分成4组:假手术组(Sham组)，ANP组，生长抑素治疗组(S组)，中药治疗 组(C组)。
, 百拇医药
1.2 检查项目及测试方法
1.2.1 胰腺及回肠组织病理学检查 取各组大鼠胰腺及回肠相同部位，10%福尔马林固定，石蜡包埋切片，HE染色，光镜观察。
1.2.2 血清AMY活性测定 采用PNPG 2 限定底物法。
1.2.3 肠内容物中sIgA含量的测定 采用放射免疫分析法。
1.2.4 肠组织MDA含量测定 采用硫代巴比妥酸法。
1.3 统计分析方法 实验数据用均数±标准差(X±s)表示，采用方差分析、t检验，直线相关分析。
2 结果
2.1 组织学变化
, 百拇医药
2.1.1 大体所见 术后24h，Sham组胰腺未见异常，ANP组有大量血性腹水渗出，胰腺明显肿胀，变硬，呈灰褐色，可见坏死灶，胰周可见大量皂化斑，肠管变粗，水肿;两个治疗组腹腔内仅见少量淡红色渗出液，胰腺肿胀、出血、坏死程度均较ANP组减轻，皂化斑减少，肠管肿胀减轻。
2.1.2 胰腺组织学变化 光镜下，Sham组大鼠胰腺小叶结构清晰，无异常改变;ANP组大鼠胰腺可见弥漫的叶间间隔扩张，点状细胞间间隔扩张，片状出血，大量的腺泡坏死和炎症细胞浸润;两个治疗组大鼠胰腺病理改变较ANP明显减轻，有少量炎症细胞浸润，偶见点状坏死。
2.1.3 回肠组织学变化 光镜下，Sham组大鼠回肠绒毛结构完整，间质无水肿及炎症细胞浸润:ANP组肠粘膜重度水肿，粘膜上皮细胞变性坏死，绒毛剥脱，融合，变矮，固有层有大量炎症细胞浸润，粘膜下层血管扩张;S组和C组大鼠肠粘膜损伤显著减轻，粘膜轻度水肿，上皮细胞基本完整，偶见血管扩张，固有层仅有少量炎细胞浸润。
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2.2 各组检测指标的变化
2.2.1 术后24h各组血清AMY活性变化 ANP组血清AMY活性较Sham组显著升高(P<0.01)，C组和S组血清AMY活性较ANP组显著降低(P<0.01，P<0.01)，但二组间差异无显著性(P>0.05)。
表1 术后24h各组血清AMY变化 (IU/L)
注:与Sham组相比， ˇ P<0.01;与ANP组比， ˇˇ P<0.012.2.2 术后24h肠内容物中sIgA含量的变化 ANP组肠内容物中sIgA含量较Sham组显著降低(P<0.01)，S组和C组肠内容物中sIgA含量较ANP组显著升高(P<0.01，P<0.01)，但二组间差异无显著性(P>0.05)。
表2 术后24h各组肠内容物中sIgA含量变化 (μg/ml)
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注:与Sham组比， ˇ P<0.01;与ANP组比， ˇˇ P<0.012.
2.3 术后24h各组肠组织中MDA含量变化 ANP组肠组织中MDA含量比Sham组显著升高(P<0.01)，S组与C组肠组织中MDA含量比ANP显著降低(P<0.01)，但二组间差异无显著性(P>0.05)。
表3 术后24h各组肠组织中MDA含量变化 (nmol/ml)
注:与Sham组比， ˇ P<0.01; ˇˇ 与ANP组比，P<0.01
2.3 相关分析肠组织MDA含量与肠内容物中sIgA含量显著直线负相关，相关系数r=-0.8455，P<0.01。
3 讨论
继发感染已成为SAP患者死亡的主要原因。对感染灶的病原学研究证实:引起继发感染的细菌主要来源于肠道中以大肠杆菌为首的G - 菌 [3] 。当各种因素导致肠道屏障功能受损时，导致肠道细菌和LPS大量移位，继而产生大量炎性介质和细胞因子作用于全身各脏器，引起SIRS(全身炎症反应综合征)，最终导致MODS(多脏器功能障碍综合征)。本实验在光镜上直观地观察到ANP大鼠回肠粘膜重度水肿，粘膜上皮细胞变性坏死，绒毛剥脱，融合，变矮，固有层有大量炎症细胞浸润，粘膜下层血管扩张，这表明ANP时肠道机械屏障受到损伤和破坏，与王兴鹏等观察一致 [4～6] ;本实验还发现ANP大鼠肠内容物中sIgA含量较Sham组显著下降(P<0.01)，而sIgA是构成肠道免疫屏障的重要组成部分，对肠道菌群中的G - 杆菌具有特殊亲合力，能包被这些细菌，封闭细菌与肠上皮细胞结合的特异部位，阻止其对肠上皮细胞的吸附，避免细菌穿透肠上皮发生移位，sIgA还能抑制细菌有害代谢产物的释放，与溶菌酶协同杀灭细菌和病毒，是阻断细菌移位的重要环节 [7～9] ，可见ANP时肠道机械屏障和免疫屏障功能障碍，是LPS和细菌移位导致继发感染的重要原因。
, 百拇医药
ANP肠道屏障损伤的机制尚未完全明了。本实验结果显示ANP时，降低MDA后肠道机械屏障和免疫屏障有所改善，这表明:OFR介导的过氧化损伤在ANP时肠道屏障的损伤过程中起到了重要的作用。它们可直接破坏肠粘膜上皮细胞，致肠道微循环障碍，导致肠粘膜缺血缺氧，上皮细胞代谢障碍、破坏;此外还能激发链式反应产生更多的炎性因子，蛋白酶和活性氧加重肠道炎症反应和微循环障碍。OFR对sIgA的影响可能是破坏了肠道免疫细胞生存环境，或直接损伤免疫细胞，使肠道免疫屏障贮备耗竭，免疫细胞分泌功能减退，聚合IgA合成分泌减少。
本实验发现柴芩承气汤及善得定除能降低血清AMY，减轻胰腺病理损伤外，还能显著降低血清中和肠组织中MDA的含量(均为P<0.01)。明显改善肠粘膜病理损伤，对肠道机械屏障具有保护作用;还可增加肠内容物中sIgA含量(P<0.01)，对肠道免疫屏障也有一定的保护作用。两者治疗效果相似(P>0.05)。证实了该方剂对肠道机械屏障和免疫屏障具有保护作用，阻断坏死性胰腺炎引起的肠道屏障持续性损伤。
, http://www.100md.com
参考文献
1 Lumsdon A，Bradlcy EL.Secondary pancreatic infections.Surg Gynecol Obstet，1990，170:459.
2 Renner TC，Savage WT，Pantoja JL，et al.Death due to acute pancreatiˉtis:a retrospective analysis of405autopsy cases.Dig Dis Sci，1985，30:1005-1018.
3 Tomasi TB.Structure and function of mucosal antibodies.Ann RevMed，1970，39:619.
4 Alverdy JC，Aoys E.The effect of dexamethasone and endotoxin adminisˉtration on biliary IgA and bacterial adhcrcnce.J Surg Res，1992，53(5):450-454.
, 百拇医药
5 Alverdy JA，Aoys E，Weiss-Carrington P，et al.The effect of glutamine-enriehed TPN on gut immune collularity.J Surg Res，1992，52(1):34-38.
6 Cheeseman KH，Slater TF.An introduction to Tree radical biochemistry.Br Med Bull，1993，49(3):481-493.
7 王兴鹏，徐家裕，裳耀宗.急性出血坏死性胰腺炎大鼠肠粘膜病变的实验研究.中华消化杂志，1994，14(8):213-215.
8 吴承堂，黎沾良，熊德鑫，等.急性坏死性胰腺炎时肠通透性改变与细菌移位的实验研究.肝胆外科杂志，1996，2:212.
, http://www.100md.com 9 黎沾良，邓群，陆连荣，等.急性坏死性胰腺炎继发感染的防治 研究.军医进修学院学报，1999，20(12):85-88.
10 Aho HJ，et al.Experimental pancreatitis in the rat:sodium taurocholate indueed acute hemorrhagie panereatitis.Scand J Gastroenterol，1980，15(4):411-416.
(收稿日期:2002-09-20)
作者单位:116001辽宁省大连市友谊医院消化内科
黑龙江省佳木斯大学第一临床医院
黑龙江省佳木斯市中心医院
(编辑晓 亮), 百拇医药(赖少彤)
关键词 急性胰腺炎 肠道屏障MDA 防治
【文献标识码】 A 【文章编号】 1684-2030(2003)02-0100-03
, http://www.100md.com
The protection of chai qin cheng qi juice for intestinal mechan-barrier
and immuno-barrier in experimental acute necrotizing pacreatitis
Lai Shaotong，Miao Dan，Bao Xiuqi，et al.
Department of Gastroenterology Dalian Friendship Hospital，Liaonin116001.
【Abstract】 Objective To observe the changes of intestinal mechan-barrier and immuno-barrier in acute necrotizing pacreatitis and the effects of Chai qin cheng qi juice on the changes.Methods The model of ANP reproˉduced by infusion of NaTc into biliopancreatic duct.All animals were sacrificed on24hour after reproduced model，sIgA level in intestinal content，MDA level in intestinal mousca，morphology of pancreas and intestinal mousca were obˉserved.Results The result showed that intestinal mousca and pancreas damage，a decrease of sIgA in intestinal conˉtent(P<0.01)，an increase of MDA in mousca(P<0.01)，were occurred inANP rats.Treatment with Chai qin cheng qi juice markely improved intestinal mousea and pancreas injury，elevated sIgA level(P<0.01，P<0.01)，reˉduced the levels of MDA in mousca，(P<0.01，P<0.01).Conclusion Chai qin cheng qi juice attenuated intestinal mechan and immuno-barrier damage after ANP.
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Key words acute necrotizing pancreatitis intestinal/gut barrier MDA therapeutic measures
胰腺及周围组织感染是SAP(继发性急性胰腺感染)患者死亡的主要原因 [1] 。大量的细菌学研究证实SAP的继发感染是主要由肠道细菌移行所致，而肠道屏障功能受损是肠道细菌移位的前提 [2] 。本实验探讨柴芩承气汤及生长抑素治疗实验性ANP大鼠，观察两种药物的疗效并探讨其作用机制。
1 材料和方法
1.1 动物及试剂 Wistar纯系大鼠50只，雌雄各半，体重280±20g。SAP模型按Aho等 [10] 方法制备。牛磺胆酸钠(NaTc):购于美国Sigma公司。善得定:瑞士Serono公司生产。柴芩承气汤加减:由佳木斯大学临床医学院中药房煎制。AMY测定试剂盒:购于上海长征医学科学有限公司。 125 I标记的sIgA放射免疫分析试剂盒:购于上海放射免疫分析技术研究所。MDA测定试剂盒:购于南京建成生物工程研究所。将50只健康Wistar大鼠随机分成4组:假手术组(Sham组)，ANP组，生长抑素治疗组(S组)，中药治疗 组(C组)。
, 百拇医药
1.2 检查项目及测试方法
1.2.1 胰腺及回肠组织病理学检查 取各组大鼠胰腺及回肠相同部位，10%福尔马林固定，石蜡包埋切片，HE染色，光镜观察。
1.2.2 血清AMY活性测定 采用PNPG 2 限定底物法。
1.2.3 肠内容物中sIgA含量的测定 采用放射免疫分析法。
1.2.4 肠组织MDA含量测定 采用硫代巴比妥酸法。
1.3 统计分析方法 实验数据用均数±标准差(X±s)表示，采用方差分析、t检验，直线相关分析。
2 结果
2.1 组织学变化
, 百拇医药
2.1.1 大体所见 术后24h，Sham组胰腺未见异常，ANP组有大量血性腹水渗出，胰腺明显肿胀，变硬，呈灰褐色，可见坏死灶，胰周可见大量皂化斑，肠管变粗，水肿;两个治疗组腹腔内仅见少量淡红色渗出液，胰腺肿胀、出血、坏死程度均较ANP组减轻，皂化斑减少，肠管肿胀减轻。
2.1.2 胰腺组织学变化 光镜下，Sham组大鼠胰腺小叶结构清晰，无异常改变;ANP组大鼠胰腺可见弥漫的叶间间隔扩张，点状细胞间间隔扩张，片状出血，大量的腺泡坏死和炎症细胞浸润;两个治疗组大鼠胰腺病理改变较ANP明显减轻，有少量炎症细胞浸润，偶见点状坏死。
2.1.3 回肠组织学变化 光镜下，Sham组大鼠回肠绒毛结构完整，间质无水肿及炎症细胞浸润:ANP组肠粘膜重度水肿，粘膜上皮细胞变性坏死，绒毛剥脱，融合，变矮，固有层有大量炎症细胞浸润，粘膜下层血管扩张;S组和C组大鼠肠粘膜损伤显著减轻，粘膜轻度水肿，上皮细胞基本完整，偶见血管扩张，固有层仅有少量炎细胞浸润。
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2.2 各组检测指标的变化
2.2.1 术后24h各组血清AMY活性变化 ANP组血清AMY活性较Sham组显著升高(P<0.01)，C组和S组血清AMY活性较ANP组显著降低(P<0.01，P<0.01)，但二组间差异无显著性(P>0.05)。
表1 术后24h各组血清AMY变化 (IU/L)
注:与Sham组相比， ˇ P<0.01;与ANP组比， ˇˇ P<0.012.2.2 术后24h肠内容物中sIgA含量的变化 ANP组肠内容物中sIgA含量较Sham组显著降低(P<0.01)，S组和C组肠内容物中sIgA含量较ANP组显著升高(P<0.01，P<0.01)，但二组间差异无显著性(P>0.05)。
表2 术后24h各组肠内容物中sIgA含量变化 (μg/ml)
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注:与Sham组比， ˇ P<0.01;与ANP组比， ˇˇ P<0.012.
2.3 术后24h各组肠组织中MDA含量变化 ANP组肠组织中MDA含量比Sham组显著升高(P<0.01)，S组与C组肠组织中MDA含量比ANP显著降低(P<0.01)，但二组间差异无显著性(P>0.05)。
表3 术后24h各组肠组织中MDA含量变化 (nmol/ml)
注:与Sham组比， ˇ P<0.01; ˇˇ 与ANP组比，P<0.01
2.3 相关分析肠组织MDA含量与肠内容物中sIgA含量显著直线负相关，相关系数r=-0.8455，P<0.01。
3 讨论
继发感染已成为SAP患者死亡的主要原因。对感染灶的病原学研究证实:引起继发感染的细菌主要来源于肠道中以大肠杆菌为首的G - 菌 [3] 。当各种因素导致肠道屏障功能受损时，导致肠道细菌和LPS大量移位，继而产生大量炎性介质和细胞因子作用于全身各脏器，引起SIRS(全身炎症反应综合征)，最终导致MODS(多脏器功能障碍综合征)。本实验在光镜上直观地观察到ANP大鼠回肠粘膜重度水肿，粘膜上皮细胞变性坏死，绒毛剥脱，融合，变矮，固有层有大量炎症细胞浸润，粘膜下层血管扩张，这表明ANP时肠道机械屏障受到损伤和破坏，与王兴鹏等观察一致 [4～6] ;本实验还发现ANP大鼠肠内容物中sIgA含量较Sham组显著下降(P<0.01)，而sIgA是构成肠道免疫屏障的重要组成部分，对肠道菌群中的G - 杆菌具有特殊亲合力，能包被这些细菌，封闭细菌与肠上皮细胞结合的特异部位，阻止其对肠上皮细胞的吸附，避免细菌穿透肠上皮发生移位，sIgA还能抑制细菌有害代谢产物的释放，与溶菌酶协同杀灭细菌和病毒，是阻断细菌移位的重要环节 [7～9] ，可见ANP时肠道机械屏障和免疫屏障功能障碍，是LPS和细菌移位导致继发感染的重要原因。
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ANP肠道屏障损伤的机制尚未完全明了。本实验结果显示ANP时，降低MDA后肠道机械屏障和免疫屏障有所改善，这表明:OFR介导的过氧化损伤在ANP时肠道屏障的损伤过程中起到了重要的作用。它们可直接破坏肠粘膜上皮细胞，致肠道微循环障碍，导致肠粘膜缺血缺氧，上皮细胞代谢障碍、破坏;此外还能激发链式反应产生更多的炎性因子，蛋白酶和活性氧加重肠道炎症反应和微循环障碍。OFR对sIgA的影响可能是破坏了肠道免疫细胞生存环境，或直接损伤免疫细胞，使肠道免疫屏障贮备耗竭，免疫细胞分泌功能减退，聚合IgA合成分泌减少。
本实验发现柴芩承气汤及善得定除能降低血清AMY，减轻胰腺病理损伤外，还能显著降低血清中和肠组织中MDA的含量(均为P<0.01)。明显改善肠粘膜病理损伤，对肠道机械屏障具有保护作用;还可增加肠内容物中sIgA含量(P<0.01)，对肠道免疫屏障也有一定的保护作用。两者治疗效果相似(P>0.05)。证实了该方剂对肠道机械屏障和免疫屏障具有保护作用，阻断坏死性胰腺炎引起的肠道屏障持续性损伤。
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参考文献
1 Lumsdon A，Bradlcy EL.Secondary pancreatic infections.Surg Gynecol Obstet，1990，170:459.
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4 Alverdy JC，Aoys E.The effect of dexamethasone and endotoxin adminisˉtration on biliary IgA and bacterial adhcrcnce.J Surg Res，1992，53(5):450-454.
, 百拇医药
5 Alverdy JA，Aoys E，Weiss-Carrington P，et al.The effect of glutamine-enriehed TPN on gut immune collularity.J Surg Res，1992，52(1):34-38.
6 Cheeseman KH，Slater TF.An introduction to Tree radical biochemistry.Br Med Bull，1993，49(3):481-493.
7 王兴鹏，徐家裕，裳耀宗.急性出血坏死性胰腺炎大鼠肠粘膜病变的实验研究.中华消化杂志，1994，14(8):213-215.
8 吴承堂，黎沾良，熊德鑫，等.急性坏死性胰腺炎时肠通透性改变与细菌移位的实验研究.肝胆外科杂志，1996，2:212.
, http://www.100md.com 9 黎沾良，邓群，陆连荣，等.急性坏死性胰腺炎继发感染的防治 研究.军医进修学院学报，1999，20(12):85-88.
10 Aho HJ，et al.Experimental pancreatitis in the rat:sodium taurocholate indueed acute hemorrhagie panereatitis.Scand J Gastroenterol，1980，15(4):411-416.
(收稿日期:2002-09-20)
作者单位:116001辽宁省大连市友谊医院消化内科
黑龙江省佳木斯大学第一临床医院
黑龙江省佳木斯市中心医院
(编辑晓 亮), 百拇医药(赖少彤)