散瘀接骨精对家兔骨折愈合的影响及皮肤急性毒性实验研究
【摘要】 目的 观察散瘀接骨精对家兔实验性骨折愈合的影响及其皮肤刺激性和急性毒性。方法 30只家兔左桡骨中下1/3骨折造模，随机分为溶媒组、散瘀接骨精组和阳性对照药正骨水组，用药14、22天后分批处死，取骨折处标本做X线摄片、骨痂称干重，以观察散瘀接骨精对骨折愈合的影响。另用8只家兔背部去毛，按上述分溶媒组、给药组，分别在用药后1、5、24、48h观察其表皮红斑及水肿，以反映皮肤刺激性。采用16只家兔随机分为完整皮肤使用散瘀接骨精和溶媒、破损皮肤使用散瘀接骨精和溶媒组，观察药物对各系统的毒性表现。结果 给予散瘀接骨精组的桡骨骨痂干重与溶媒对照组比较差异有非常显著性(P<0.001)，X线片显示有明显骨膜反应、骨痂形成。皮肤刺激性为中度，无明显急性毒性。结论 散瘀接骨精能明显提高骨折愈合质量，且为一种安全性较好的外用搽剂。
关键词 骨折 散瘀接骨精 皮肤刺激性 皮肤急性毒性 家兔
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2004)01-0008-03
, 百拇医药
Effects of choice for stasis dispersing and fracture settingon experimental fracture
rabbits and experimental study on the toxicity
Zhou Rongchu，Luo Jiaxing，Liu Daihua，et al.
Science Research Section of Nanhua University，Hengyang421001.
【Abstract】 Objective To investigate the effects of Choice for Stasis Dispersing and Fracture Setting on exˉperimental fracture rabbits and its toxicity.Methods The fracture model was made with rabbits.X ray and bone minˉeral were detected at the end of second and fourth week after operation.28rabbits were usedto detect the irritation and toxicity of Choice for Stasis Dispersing and Fracture Setting.Results The drug could promote the healing of fracture and the mineralization of the callus.No toxicity reaction occurred in complete and injured skin groups after applying Choice for Stasis Dispersing and Fracture Setting.The irritation reaction of the treament group was not different with the control group.Conclusion Choice for stasis Dispersing and Fracture setting has good effect on fracture without aderverse effect and toxicity on rabbits.It is an effective and safe liniment.
, 百拇医药
Key words fracture choice for stasis dispersing and fracture setting irritation to skin acute toxicity rabbit
散瘀接骨精是我校根据中国民间古方，自制的一种外用按揉剂，临床上对于各种原因所致急性软组织损伤、瘀滞疼痛以及骨折有明显的消肿、止痛和康复功能。但无实验证明其确切疗效及其毒性。本实验用家兔骨折造模后观察其促进骨折愈合的效果，并观察散瘀接骨精的皮肤刺激性和皮肤急性毒性。
1 材料与方法
1.1 动物 成年健康白色家兔60只(由南华大学动物实验动物部提供)，雌雄不拘，分笼喂养，体重2.8～3.1kg。受试动物健康，行动灵活，皮肤光滑，无损伤，无皮肤破损，符合要求。
1.2 药品和试剂 散瘀接骨精为我校自制中草药搽剂，用50ml盐水瓶分装。正骨水为市售成药，批号:桂卫药准字99091804。溶媒为溶解散瘀接骨精的烧酒，购自市场。万年青叶，备涂药用。Na 2 S为市售分析纯。
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1.3 方法
1.3.1 骨折愈合实验
1.3.1.1 家兔小腿闭合性骨折造模 [1]及分组 将兔固定在特制的动物实验架上，用6%的Na 2 S将兔左腿去毛后在牵引下把兔左小腿置于两块厚约1.5cm的木板上。木板长宽适当，使小腿中下段位于两板的间隙处，用纱布覆盖，以免损伤皮肤。再用两块长50cm、宽5cm的薄木制挡板置于小腿中下1/3段交界处，以免损伤组织。用重1250g、厚约1.5cm的牵引砣从50cm高处垂直向下冲击，造成兔左小腿中下1/3段闭合性骨折。造模后随机分为3组，每组10只。散瘀接骨精组每次取药液约15ml用万年青叶沾取，涂于骨折处，并轻轻按摩揉搽。每次取约15ml阳性对照药正骨水及溶媒用消毒棉签涂于骨折处，用小夹板包扎固定。各组均每天涂药一次。
1.3.1.2 摄X线片观察 分别于术后第14、22天随机分批处死动物，将骨折标本于46kV、100Ma、0.06s、80cm条件下摄X线片，采用文献 [2] 方法对每个标本评价，并按等级指数法进行统计学处理。
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1.3.1.3 骨痂干重称量 拍完X线片后将各标本骨折断端骨痂取下，置于试管内 [3] ，流水冲洗后加入丙酮-乙醚混合液(1:1)，脱脂24h后更换丙酮-乙醚混合液，再脱脂24h，冲洗，置于110℃烤箱，烘干至恒重，电子天平称重，按两样本均数检验及t检验进行统计学分析。
1.3.2 皮肤刺激性实验 取健康无伤白色家兔8只，分成2组，每组4只，一组用散瘀接骨精，一组用正骨水。给药前24h将家兔背部两侧用6%的Na 2 S去毛，去毛面积每侧约为70cm 2。将散瘀接骨精、正骨水分别用万年青叶和棉签浸润后涂在2层的消毒滤纸片上，贴于家兔左侧背上，用一层油纸及两层纱布覆盖，再用医用胶布封闭固定。右侧以溶媒作对照，4～6h后去除去残留的供试品，检查30～60min、24h、48h后供试品对家兔皮肤刺激反应，并进行评分，标准如下:(1)0分，皮肤上无红斑及水肿;(2)1分，皮肤隐约可见红斑及水肿:(3)2分，皮肤有明显红斑，且轮廓清楚;(4)3分，皮肤红斑隆起约1mm。皮肤刺激性强度的评价标准 [4] 为:(1)无刺激性，平均分值为0.00～0.49;(2)轻度刺激性，平均分值为0.50～2.99;(3)中度刺激性，平均分值为3.00～5.99;(4)强度刺激，平均分值为6.00～8.00。
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1.3.3 皮肤急性毒性实验 取16只健康成年白兔，随机分4组，每组4只。分别为散瘀接骨精完整皮肤组、散瘀接骨精破损皮肤组、溶媒完整皮肤组、溶媒破损皮肤组。动物在受试前24h背部用6%的Na 2 S去毛，去毛面积约80cm 2 。给药前检查去毛部位皮肤是否因去毛而受损，受伤皮肤不宜做完整皮肤的毒性实验。破损皮肤组造模是在实验前进 行。将家兔皮肤消毒后用消毒手术刀作井字形划破表皮，以皮肤出现轻微渗血为度。将散瘀接骨精或溶媒直接均匀涂抹于家兔的去毛皮肤上，面积约为70cm 2 ，稍干后再均匀涂抹一次(两次共约8ml)。乘湿以无刺激性纱布固定，在其上覆以聚乙烯薄膜，然后再包扎固定，以防止液体挥发。给受试物后24h无家兔中毒死亡。用温水、棉签洗去残留于皮肤的受试物，继续观察，连续7d。观察家兔死亡情况和全身中毒表现，即严密观察家兔的饮食、活动、皮毛、粪便、口、眼、鼻分泌物等反应。7d后空气栓塞处死家兔，肉眼观察其肝、肺、肾、胃、肠等内脏器官。
2 结果
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2.1 骨折愈合情况观察 X线片结果见表1。显示术后14天散瘀接骨精组、正骨水组表现为骨折间隙趋向模糊，有明显骨膜反应和骨痂形成;溶媒组则骨折间隙轻度模糊，轻度骨膜反应，骨痂较少。术后22天散瘀接骨精组、正骨水组骨痂密度增高，骨折边缘开始消失;溶媒组骨痂密度较低，骨折间隙趋向模糊，与散瘀接骨精、正骨水组术后14天的X线片相近。而散瘀接骨精组与正骨水组的X线片表现相近，差异无显著性。
表1 散瘀接骨精组、正骨水、溶媒组骨折愈合的X线片结果
2.2 骨痂干重结果 散瘀接骨精组、正骨水组在14～22天骨痂干重与溶媒组比较差异有显著性，说明用药组在骨折初、中期骨折断端骨痂量多，骨矿物质沉积明显，成骨作用优于溶媒对照组。而散瘀接骨精组、正骨水组两组间差异无显著性。结果如表2所示。
2.3 散瘀接骨精皮肤刺激性实验结果 见表3。按刺激反应评分标准，散瘀接骨精、正骨水的皮肤刺激性均为中度，而溶媒对皮肤无刺激，说明本品的皮肤刺激性与正骨水相当。引起皮肤刺激反应主要由于其中的中草药成分。在皮肤急性毒性实验过程中，家兔无一死亡，饮食、活动、皮毛、粪便、口、眼、鼻分泌物等均无异常。无论是完整皮肤组还是破损皮肤组，除涂药部位稍变红外，其余各部位及系统无异常表现。7d后处死家兔，肉眼观察其肝、肺、肾、胃、肠等内脏器官，未发现异常变化，说明本品对家兔无明显毒性。
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表2 不同时间用药后的骨痂干重
表3 散瘀接骨精皮肤刺激性实验结果
3 讨论
散瘀接骨精的功效为活血化瘀，促进骨折愈合，临床上主要适用于骨折的初、中期。影响骨组织修复的最根本的因素是局部的血液供应 [5] 。创伤骨折后局部产生血肿，同时患肢局部血流发生改变，粘度增高、微循环血流减慢，即中医所说的“瘀血”，它可使骨折愈合时间延长。活血化瘀药能降低毛细血管通透性，减少炎症渗出及红细胞外漏;此类药亦能改善血液流变学的性质，降低血液粘度，减轻血液凝集程度，促进血肿吸收，改善局部血液循环 [6，7] 。钙盐的沉积是骨折修复的一个重要过程。本实验骨折X线摄片及骨痂干重结果显示实验组的骨痂量及密度与溶媒组比较差异有显著性，散瘀接骨精能促进钙盐的沉积。
本品的皮肤刺激性为中度，与临床应用的正骨水相当，无明显的皮肤急性毒性反应。证明散瘀接骨精是一种毒副作用较小、安全性较好，对骨折的治疗效果明显的外用揉搽剂。但其作用机制尚需进一步探讨。
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参考文献
1 周正新，丁锷，李保泉，等.消瘀接骨散对骨折肢体血流循环的影响及其与骨折愈合的关系.中医正骨，1997，9(4):5.
2 魏云，刘年彪，吉米，等.接骨片促进骨折愈合作用机理探讨.中 成药，1998，20(5):32.
3 江树连，丁锷，李保泉，等.消瘀接骨散对家兔骨折愈合质量的影响.中医正骨，2000，12(8):5.
4 梅全喜，吴惠妃，高玉桥，等.跌打镇痛液皮肤急性毒性及刺激性实验研究.时珍国医国药，2001，12(9):5.
5 邹培，阮默，李立一，等.长骨液促进骨延长区骨矿化的实验研究.中国骨伤，1998，11(5):15.
6 孙明岩.三七活血丸治疗骨折对血液流变学的影响.中国中医骨伤科杂志，1988，4(1):3.
7 廖福龙，黄深，李文，等.活血化瘀药物药性的血液流变学研究.中西医结合杂志，1986，6(2):103.
作者单位:421001湖南衡阳南华大学科研处(药物药理研究所)
南华大学附属第一医院外科
通讯作者:E-mail:ljx729@yahoo.com.cn
(编辑曲 全), 百拇医药(周荣初)
关键词 骨折 散瘀接骨精 皮肤刺激性 皮肤急性毒性 家兔
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2004)01-0008-03
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Effects of choice for stasis dispersing and fracture settingon experimental fracture
rabbits and experimental study on the toxicity
Zhou Rongchu，Luo Jiaxing，Liu Daihua，et al.
Science Research Section of Nanhua University，Hengyang421001.
【Abstract】 Objective To investigate the effects of Choice for Stasis Dispersing and Fracture Setting on exˉperimental fracture rabbits and its toxicity.Methods The fracture model was made with rabbits.X ray and bone minˉeral were detected at the end of second and fourth week after operation.28rabbits were usedto detect the irritation and toxicity of Choice for Stasis Dispersing and Fracture Setting.Results The drug could promote the healing of fracture and the mineralization of the callus.No toxicity reaction occurred in complete and injured skin groups after applying Choice for Stasis Dispersing and Fracture Setting.The irritation reaction of the treament group was not different with the control group.Conclusion Choice for stasis Dispersing and Fracture setting has good effect on fracture without aderverse effect and toxicity on rabbits.It is an effective and safe liniment.
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Key words fracture choice for stasis dispersing and fracture setting irritation to skin acute toxicity rabbit
散瘀接骨精是我校根据中国民间古方，自制的一种外用按揉剂，临床上对于各种原因所致急性软组织损伤、瘀滞疼痛以及骨折有明显的消肿、止痛和康复功能。但无实验证明其确切疗效及其毒性。本实验用家兔骨折造模后观察其促进骨折愈合的效果，并观察散瘀接骨精的皮肤刺激性和皮肤急性毒性。
1 材料与方法
1.1 动物 成年健康白色家兔60只(由南华大学动物实验动物部提供)，雌雄不拘，分笼喂养，体重2.8～3.1kg。受试动物健康，行动灵活，皮肤光滑，无损伤，无皮肤破损，符合要求。
1.2 药品和试剂 散瘀接骨精为我校自制中草药搽剂，用50ml盐水瓶分装。正骨水为市售成药，批号:桂卫药准字99091804。溶媒为溶解散瘀接骨精的烧酒，购自市场。万年青叶，备涂药用。Na 2 S为市售分析纯。
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1.3 方法
1.3.1 骨折愈合实验
1.3.1.1 家兔小腿闭合性骨折造模 [1]及分组 将兔固定在特制的动物实验架上，用6%的Na 2 S将兔左腿去毛后在牵引下把兔左小腿置于两块厚约1.5cm的木板上。木板长宽适当，使小腿中下段位于两板的间隙处，用纱布覆盖，以免损伤皮肤。再用两块长50cm、宽5cm的薄木制挡板置于小腿中下1/3段交界处，以免损伤组织。用重1250g、厚约1.5cm的牵引砣从50cm高处垂直向下冲击，造成兔左小腿中下1/3段闭合性骨折。造模后随机分为3组，每组10只。散瘀接骨精组每次取药液约15ml用万年青叶沾取，涂于骨折处，并轻轻按摩揉搽。每次取约15ml阳性对照药正骨水及溶媒用消毒棉签涂于骨折处，用小夹板包扎固定。各组均每天涂药一次。
1.3.1.2 摄X线片观察 分别于术后第14、22天随机分批处死动物，将骨折标本于46kV、100Ma、0.06s、80cm条件下摄X线片，采用文献 [2] 方法对每个标本评价，并按等级指数法进行统计学处理。
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1.3.1.3 骨痂干重称量 拍完X线片后将各标本骨折断端骨痂取下，置于试管内 [3] ，流水冲洗后加入丙酮-乙醚混合液(1:1)，脱脂24h后更换丙酮-乙醚混合液，再脱脂24h，冲洗，置于110℃烤箱，烘干至恒重，电子天平称重，按两样本均数检验及t检验进行统计学分析。
1.3.2 皮肤刺激性实验 取健康无伤白色家兔8只，分成2组，每组4只，一组用散瘀接骨精，一组用正骨水。给药前24h将家兔背部两侧用6%的Na 2 S去毛，去毛面积每侧约为70cm 2。将散瘀接骨精、正骨水分别用万年青叶和棉签浸润后涂在2层的消毒滤纸片上，贴于家兔左侧背上，用一层油纸及两层纱布覆盖，再用医用胶布封闭固定。右侧以溶媒作对照，4～6h后去除去残留的供试品，检查30～60min、24h、48h后供试品对家兔皮肤刺激反应，并进行评分，标准如下:(1)0分，皮肤上无红斑及水肿;(2)1分，皮肤隐约可见红斑及水肿:(3)2分，皮肤有明显红斑，且轮廓清楚;(4)3分，皮肤红斑隆起约1mm。皮肤刺激性强度的评价标准 [4] 为:(1)无刺激性，平均分值为0.00～0.49;(2)轻度刺激性，平均分值为0.50～2.99;(3)中度刺激性，平均分值为3.00～5.99;(4)强度刺激，平均分值为6.00～8.00。
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1.3.3 皮肤急性毒性实验 取16只健康成年白兔，随机分4组，每组4只。分别为散瘀接骨精完整皮肤组、散瘀接骨精破损皮肤组、溶媒完整皮肤组、溶媒破损皮肤组。动物在受试前24h背部用6%的Na 2 S去毛，去毛面积约80cm 2 。给药前检查去毛部位皮肤是否因去毛而受损，受伤皮肤不宜做完整皮肤的毒性实验。破损皮肤组造模是在实验前进 行。将家兔皮肤消毒后用消毒手术刀作井字形划破表皮，以皮肤出现轻微渗血为度。将散瘀接骨精或溶媒直接均匀涂抹于家兔的去毛皮肤上，面积约为70cm 2 ，稍干后再均匀涂抹一次(两次共约8ml)。乘湿以无刺激性纱布固定，在其上覆以聚乙烯薄膜，然后再包扎固定，以防止液体挥发。给受试物后24h无家兔中毒死亡。用温水、棉签洗去残留于皮肤的受试物，继续观察，连续7d。观察家兔死亡情况和全身中毒表现，即严密观察家兔的饮食、活动、皮毛、粪便、口、眼、鼻分泌物等反应。7d后空气栓塞处死家兔，肉眼观察其肝、肺、肾、胃、肠等内脏器官。
2 结果
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2.1 骨折愈合情况观察 X线片结果见表1。显示术后14天散瘀接骨精组、正骨水组表现为骨折间隙趋向模糊，有明显骨膜反应和骨痂形成;溶媒组则骨折间隙轻度模糊，轻度骨膜反应，骨痂较少。术后22天散瘀接骨精组、正骨水组骨痂密度增高，骨折边缘开始消失;溶媒组骨痂密度较低，骨折间隙趋向模糊，与散瘀接骨精、正骨水组术后14天的X线片相近。而散瘀接骨精组与正骨水组的X线片表现相近，差异无显著性。
表1 散瘀接骨精组、正骨水、溶媒组骨折愈合的X线片结果
2.2 骨痂干重结果 散瘀接骨精组、正骨水组在14～22天骨痂干重与溶媒组比较差异有显著性，说明用药组在骨折初、中期骨折断端骨痂量多，骨矿物质沉积明显，成骨作用优于溶媒对照组。而散瘀接骨精组、正骨水组两组间差异无显著性。结果如表2所示。
2.3 散瘀接骨精皮肤刺激性实验结果 见表3。按刺激反应评分标准，散瘀接骨精、正骨水的皮肤刺激性均为中度，而溶媒对皮肤无刺激，说明本品的皮肤刺激性与正骨水相当。引起皮肤刺激反应主要由于其中的中草药成分。在皮肤急性毒性实验过程中，家兔无一死亡，饮食、活动、皮毛、粪便、口、眼、鼻分泌物等均无异常。无论是完整皮肤组还是破损皮肤组，除涂药部位稍变红外，其余各部位及系统无异常表现。7d后处死家兔，肉眼观察其肝、肺、肾、胃、肠等内脏器官，未发现异常变化，说明本品对家兔无明显毒性。
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表2 不同时间用药后的骨痂干重
表3 散瘀接骨精皮肤刺激性实验结果
3 讨论
散瘀接骨精的功效为活血化瘀，促进骨折愈合，临床上主要适用于骨折的初、中期。影响骨组织修复的最根本的因素是局部的血液供应 [5] 。创伤骨折后局部产生血肿，同时患肢局部血流发生改变，粘度增高、微循环血流减慢，即中医所说的“瘀血”，它可使骨折愈合时间延长。活血化瘀药能降低毛细血管通透性，减少炎症渗出及红细胞外漏;此类药亦能改善血液流变学的性质，降低血液粘度，减轻血液凝集程度，促进血肿吸收，改善局部血液循环 [6，7] 。钙盐的沉积是骨折修复的一个重要过程。本实验骨折X线摄片及骨痂干重结果显示实验组的骨痂量及密度与溶媒组比较差异有显著性，散瘀接骨精能促进钙盐的沉积。
本品的皮肤刺激性为中度，与临床应用的正骨水相当，无明显的皮肤急性毒性反应。证明散瘀接骨精是一种毒副作用较小、安全性较好，对骨折的治疗效果明显的外用揉搽剂。但其作用机制尚需进一步探讨。
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参考文献
1 周正新，丁锷，李保泉，等.消瘀接骨散对骨折肢体血流循环的影响及其与骨折愈合的关系.中医正骨，1997，9(4):5.
2 魏云，刘年彪，吉米，等.接骨片促进骨折愈合作用机理探讨.中 成药，1998，20(5):32.
3 江树连，丁锷，李保泉，等.消瘀接骨散对家兔骨折愈合质量的影响.中医正骨，2000，12(8):5.
4 梅全喜，吴惠妃，高玉桥，等.跌打镇痛液皮肤急性毒性及刺激性实验研究.时珍国医国药，2001，12(9):5.
5 邹培，阮默，李立一，等.长骨液促进骨延长区骨矿化的实验研究.中国骨伤，1998，11(5):15.
6 孙明岩.三七活血丸治疗骨折对血液流变学的影响.中国中医骨伤科杂志，1988，4(1):3.
7 廖福龙，黄深，李文，等.活血化瘀药物药性的血液流变学研究.中西医结合杂志，1986，6(2):103.
作者单位:421001湖南衡阳南华大学科研处(药物药理研究所)
南华大学附属第一医院外科
通讯作者:E-mail:ljx729@yahoo.com.cn
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