胆酸与栀子配伍拮抗大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中的作用环节分析
【摘要】 目的 探讨胆酸、栀子及二者配伍阻抑脑缺血级联反应的作用环节及作用部位。方法 用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型，观察胆酸、栀子及二者配伍对大鼠神经症状、死亡率、脑组织SOD、MDA、NOS、Na + -K + -ATP酶、Mg 2+ -ATP酶、NGF及血浆vWF等的影响。结果 胆酸、栀子均能改善大鼠神经症状，配伍后效果更为显著;各治疗组死亡率均低于模型组，但未见明显统计学差异;胆酸、栀子对脑组织SOD、MDA、NOS和血浆vWF均未见明显影响，而二者配伍则可显著提高脑组织SOD活性，降低NOS活性，降低脑组织MDA和血浆vWF含量;胆酸和栀子均可显著提高Na + -K + -ATP酶的活性、降低Mg 2+ -ATP酶的活性，二者配伍后作用减弱;胆酸对脑组织NGF含量未见明显影响，栀子可显著升高NGF含量，配入胆酸后作用未见明显变化。结论 中药组分配伍作用是依效应环节的生物特性表现为协同增效或减效等复杂的现象。
关键词 胆酸 栀子 脑缺血再灌注损伤 配伍
, http://www.100md.com
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2003)05-0643-04
Influence of cholic acid，ZhZ and their compatibility on ischemia
cascade reaction of focal cerebral ischemia-reperfusion injury in rats
LiChuanyun，Li Pengtao，Pan Yanshu，et al.
Beijing Social Welfare Hospital，Beijing100029.
【Abstract】 Objective Through studying treatment mechanism of cholic acid，ZhZ and their compatibility to ischemia stroke，treatment links and locations ofQRJD herbs to ischemia stroke are to be identified，and inhibition charactistics of compatibility of QRJD herbs to ischemia cascade reaction can be explored.Methods Using thread-occluding ways to make reversible middle cerebral artery occlusion(CMAO)in rats，we can watch influence of cholic acid，ZhZ and their compatibility on neural symptom，rats death rate，brain superoxide dismutase(SOD)，malondialdeˉhyde(MDA)，nitric oxide synthase(NOS)，nerve growth factor(NGF)，plasma von willebrand factor(vWF)，et al.Reˉsults Both cholic acid and ZhZ can attenuate neural symptom and the efficacy of their compatibility is the best.Neiˉther cholic acid nor ZhZ has influence on brain SOD，LPO，NOS and plasmavWF，while their compatibility can eviˉdently improve brain SOD and NOS activity，and decrease brain LPO and plasma vWF.Both cholic acid and ZhiZi can evidently improve Na + -K + -ATPase activity and inbibitMg 2+ -ATPase activity，while the efficacy of their compatˉibility is lower.Cholic acid has no influence on brain NGF，Both ZhiZi and compatibility can increase brain NGF.Conclusion The roleof herb compatibility is not a simple addition of efficacy of each one，but a complicated pheˉnomena showing as promoting or decreasing efficacy jointly.
, 百拇医药
Key words cholic acid ZhiZi(ZhZ) cerebral ischemia-reperfusion injury compatibility
缺血性中风的病理过程是多环节的连锁效应。目前治疗中风的药物如钙拮抗剂、兴奋性氨基酸受体拮抗剂等均为单环节、单靶点起作用，疗效不够理想。近年来，针对中风病“毒损脑络”的病理机制，依照祛邪扶正原则，应用清开灵治疗缺血性中风获得肯定疗效。但对清开灵各有效部分的作用机制及相互间的配伍规律尚缺乏深入及系统的研究。本实验通过对清开灵中胆酸和栀子及二者配伍阻抑缺血损伤过程的研究，旨在揭示清开灵方剂配伍的部分机制。
1 材料与方法
1.1 实验动物 雄性Wistar大鼠，体重300g左右，购于北京大学医学部实验动物中心。
1.2 药品与试剂 胆酸、栀子及胆酸+栀子注射液由北京中医药大学药厂提供，为清开灵注射液制备工艺中的环节留样;SOD、MDA、NOS及Na + -K + -ATP酶、Mg 2+ -ATP酶试剂盒购自南京建成生物工程研究所，vWF试剂盒购自上海太阳生物技术公司，NGF试剂盒购自美国Sigma公司。
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1.3 模型制作 参照Longa法 [1] ，以10%的水合氯醛(0.35ml/100g体重)腹腔注射麻醉大鼠，颈部正中切口，逐层分离暴露左侧颈总动脉，于颈外动脉分叉处做切口置入2-0鱼线(头端加热呈直径约0.3mm的圆球形)，插入约18～20mm至大脑前动脉起始端，阻断大脑中动脉血流。以丝线结扎颈总动脉远端固定鱼线。逐层缝合切口，鱼线残端留置切口外约5mm。再灌注时，将鱼线拔出约10mm。
1.4 实验分组 造模成功57只，缺血2h，再灌注1h后，随机分为模型组13只，胆酸组13只，栀子组13只及胆酸+栀子组14只，试验中死亡4只;另设正常对照组10只。
1.5 给药方式与途径 各治疗组分别腹腔注射相应药物0.3ml/100g体重，模型组腹腔注射0.3ml/100g体重生理盐水作为对照，每日给药2次。
1.6 观察内容
, 百拇医药
1.6.1 神经功能缺损评分 于分组后及杀检前分别对各组造模大鼠进行神经功能缺损评分。评分参照Bedersont [2] 的方法稍加改进(总分为10分):①提起鼠尾，观察前肢有无异常表现。凡有左前肢内收、内旋者，视其轻重评为1～3分。如果大鼠表现为躯体向右侧旋转，评为4分。②将大鼠置于一金属网上，向后轻拉鼠尾，观察大鼠两前肢肌张力。根据其左前肢肌力下降程度评为0～2分。③将大鼠置于光滑平面上，观察侧向推挡阻力。根据向左侧推挡阻力下降程度评为0～2分。④大鼠出现左眼上睑下垂、左眼分泌物增多者评为2分。实验数据以ˉx±s表示，组间比较采用t检验。
1.6.2 死亡率的观察 统计自分组后至取材前各组大鼠的死亡率，组间比较采用χ 2 检验。
1.6.3 作用环节的效应观察 缺血2h再灌注22h后，将大鼠断头取脑，修取左半球大脑中动脉支配区域脑组织约100mg，加9倍生理盐水超声粉碎制备成10%的脑匀浆。将10%的脑匀浆稀释成1%的组织匀浆，4000rpm离心10min，取上清，按照试剂盒说明测定脑组织SOD、NOS、Na + -K + -ATP酶、Mg 2+ -ATP酶活性及MDA、NGF含量，考马斯亮蓝法测定蛋白含量;腹主动脉穿刺取血采集血浆，按试剂盒说明以酶联免疫吸附双抗体夹心法定量测定血浆中vWF水平。
, 百拇医药
2 结果
2.1 对大鼠神经功能缺损评分的影响 治疗前后神经功能缺损评分结果如表1所示，治疗前各损伤组之间未见明显差异，反映动物分组具有均匀一致性。治疗后各组动物的神经功能均出现不同程度地恢复。而各治疗组神经功能缺损评分均极其显著地低于模型组(P<0.001)，胆酸与栀子配伍组亦显著低于胆酸组和栀子组(P<0.05)。
表1 胆酸、栀子及二者配伍对大鼠神经功能缺损评分的影响 (略)
2.2 对模型大鼠死亡率的影响 结果如表2所示，实验结果表明，各治疗组死亡率均低于模型组，栀子组死亡率最低，但各组之间统计学差异无显著性(P>0.05)。
表2 胆酸、栀子及二者配伍对各组大鼠死亡率的影响(略)
2.3.1 脑组织SOD活性及MDA含量的组间比较 结果见表3，模型组大鼠脑组织SOD活性显著低于正常组(P<0.05)，MDA含量明显高于正常组(P<0.001);栀子组和胆酸组SOD活性及MDA含量与模型组之间未见明显差异;胆酸+栀子组SOD活性显著高于模型组(P<0.01)，MDA含量亦较模型组明显降低(P<0.001)。
, 百拇医药
表3 胆酸、栀子及二者配伍对大鼠脑组织SOD活性和MDA含量的影响 (略 )
2.3.3 脑组织NOS活性的组间比较 结果见表4。模型组大鼠脑组织NOS活性明显高于正常组(P<0.05)，胆酸组与栀子组NOS活性与模型组之间均未见明显差异;胆酸+栀子组NOS活性较模型组明显降低(P<0.05)。
表4 胆酸、栀子及二者配伍对大鼠脑组织NOS活性的影响 (略 )
2.3.4 脑组织Na + -K + -ATP酶和Mg 2+ -ATP酶活性的组间比较 结果见表5。模型组大鼠脑组织Na + -K + -ATP酶活性显著地低于正常组，Mg 2+ -ATP酶活性明显高于正常组(P<0.001);胆酸组和栀子组脑组织Na + -K + -ATP酶的活性均极为显著地高于模型组(P<0.01)，Mg 2+ -ATP酶活性均极显著低于模型组(P<0.001，P<0.01);胆酸+栀子组脑组织Na +-K + -ATP酶的活性亦显著高于模型组(P<0.05)，Mg 2+ -ATP酶活性显著低于模型组织(P<0.05)。
, 百拇医药
表5 胆酸、栀子及二者配伍对大鼠脑组织Na + -K + -ATP酶和Mg 2+ -ATP酶活性的影响 (略)
2.3.6 血浆vWF值的组间比较 见表6。模型组大鼠血浆vWF含量显著高于正常组(P<0.01);胆酸组和栀子组vWF水平与模型组之间未见明显差异;而二者配伍则可显著降低vWF含量(P<0.01)。
表6 胆酸、栀子及二者配伍对大鼠血浆vWF值的影响 (略)
2.3.7 脑组织NGF含量的组间比较 见表7。模型组大鼠脑组织NGF含量明显低于正常组(P<0.05)，胆酸组NGF含量与模型组之间未见明显差异，栀子组及胆酸+栀子组均能显著升高脑组织NGF水平(P<0.05)。
表7 胆酸、栀子及二者配伍对大鼠脑组织NGF含量的影响 (略)
, 百拇医药 3 讨论
脑缺血再灌注损伤是一个多环节的级联反应过程，涉及到代谢性毒性物质(如自由基、NO、兴奋性氨基酸等)的损害和神经元自身抗损伤能力降低(如SOD、Na + -K + -ATP酶等活性降低)。
脑缺血再灌注损伤致机体SOD活性降低、自由基产生增加，氧自由基与细胞膜不饱和脂肪酸的不饱和双键发生加成反应生成脂质过氧化物，造成生物膜的脂质过氧化损 伤，过氧化脂质进一步降解，最终生成丙二醛(MDA) [3，4] 。脑缺血致NOS活性增强，诱导产生大量NO，进一步加重脑损伤 [5] 。缺血再灌注损伤致使Na + -K + -ATP酶活性降低、Mg 2+ -ATP酶活性升高，细胞内外离子的浓度差遭破坏，大量Na + 、Cl - 、H 2 O进入细胞内，导致细胞水肿 [6] 。内皮细胞凝血因子Ⅷ相关抗原(vWF)主要由血管内皮细胞合成，凡是有血管内皮细胞损害的病变，如脑缺血及动脉硬化等，均可导致血浆中vWF水平增高 [7] ，血浆vWF的水平可作为脑血管病变严重程度及判断预后的重要指标 [8] 。神经生长因子(NGF)不仅在中枢神经系统发育过程中对神经元的生存、分化、生长起重要作用，亦为成熟的中枢及周围神经系统的神经元维持生存及执行其正常功能所必需;神经生长因子在脑缺血后神经元损伤的修复和再生过程中具有重要作用 [9] ，它可使神经元内的钙结合蛋白Calbindin的含量增加，使细胞内超量的Ca 2+ 排出，维持细胞内钙的稳态，并能使神经元内超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶的含量明显增加，使自由基减少，从而保护神经元抵御缺血缺氧损伤[10] 。
, 百拇医药
实验表明，对于脑缺血级联损伤反应，胆酸、栀子两单味药的作用具有相对特异性，它们通过相对特定的环节起作用，如胆酸、栀子均能显著改善模型大鼠神经功能缺损症状、升高脑组织Na + -K + -ATP酶的活性、降低Mg 2+ -ATP酶的活性。栀子还能明显升高脑组织NGF的含量。两者配伍后，生物效应发生了较大变化，实验表明，配伍作用不是单纯的效应累加，而是依效应环节的生物特性表现为协同增效或减效等复杂的现象。单味胆酸、栀子对脑组织SOD、NOS的活性和脑组织MDA及血浆vWF的含量未见明显影响，而二者配伍则可显著提高脑组织SOD和NOS的活性，降低脑组织MDA和血浆vWF的含量，在这些环节上均表明为明显的配伍增效作用;胆酸和栀子均可极其显著地增加脑组织Na + -K + -ATP酶的活性，降低Mg 2+ -ATP酶的活性，二者配伍后的作用则不如单体显著，在这两个环节上似有配伍减效;胆酸对脑组织NGF的含量未见明显影响，栀子可显著增加NGF的含量，配入胆酸后此作用未见明显变化，在此环节上则未显示配伍作用。因此进一步深入探讨这些配伍关系的化学和生物学机制对于揭示中药方剂各组分在多环节、多靶点的配伍作用的内涵具有重要意义。
, 百拇医药
参考文献
1 Longa EZ，Weistein PR，Carlson S，et al.Reversible middel cerebral Ocˉclusion without craniectomy in rats.Stroke，1989，20(1):84-91.
2 Bederson JB，Pitts LH，Tsuji M，et al.Rat middle cerebral artery occluˉsion:Evaluation of the model and development of neurologic examinaˉtion.Stroke，1986，17(3):472-476.
3 Cuzzocrea S，Mazzon E，Dugo L，et al.Protective effects of a new stable，highly active SOD mimetic，M40401in splanchnic artery occlusion and reperfusion.Br J Pharmacol，2001，132(1):19-29.
, 百拇医药
4 Deng XL，Qian ZY.Antagonistic effect of3，6-dimethamiˉdodibenzopyriodonium gluconate on lipid peroxidation in cerebral cortical neuronal cultures and ratbrains during focal cerebral ischemia reperfuˉsion.Acta Pharmacol Sin，2000，21(5):460-462.
5 Qi WN，Yan ZQ，Whang PG，et al.Gene and protein expressions of niˉtric oxide synthases in ischemia-reperfused peripheral nerve of the rat.Am J Physiol Cell Physiol，2001，281(3):849-856.
6 De Souza Wyse AT，Streck EL，Worm P，et al.Preconditioning prevents the inhibition of Na + ，K + -ATPase activity after brain ischemia.Neuˉrochem Res，2000，25(7):971-975.
, 百拇医药
7 Botker HE，Ingerslev J.Plasma concentrations of von Willebrand factor in patients with angina pectoris secondary to coronary atherosclerosis or cardiac syndrome X.Thromb Res，2000，15，97(6):519-523.
8 Kumari M，Marmot M，Brunner E.Social determinants of von willebrandfactor:the Whitehall II study.Arterioscler Thromb Vasc Biol，2000，20 (7):1842-1847.
9 王晶，姬志娟，赵志炜，等.APP17肽对D-半乳糖性脑老化模型小鼠学习、记忆功能和海马神经元NT-3、NGF表达的影响.中国病理生理杂志，2000，16(6):545-548.
10 李爱丽，杨洪发，王彦红，等.老龄大鼠全脑缺血再灌注部分脑区NGF、BDNF的表达.中风与神经疾病杂志，1999，16(4):214-216.
(编辑 张璇), 百拇医药(李传云)
关键词 胆酸 栀子 脑缺血再灌注损伤 配伍
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【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2003)05-0643-04
Influence of cholic acid，ZhZ and their compatibility on ischemia
cascade reaction of focal cerebral ischemia-reperfusion injury in rats
LiChuanyun，Li Pengtao，Pan Yanshu，et al.
Beijing Social Welfare Hospital，Beijing100029.
【Abstract】 Objective Through studying treatment mechanism of cholic acid，ZhZ and their compatibility to ischemia stroke，treatment links and locations ofQRJD herbs to ischemia stroke are to be identified，and inhibition charactistics of compatibility of QRJD herbs to ischemia cascade reaction can be explored.Methods Using thread-occluding ways to make reversible middle cerebral artery occlusion(CMAO)in rats，we can watch influence of cholic acid，ZhZ and their compatibility on neural symptom，rats death rate，brain superoxide dismutase(SOD)，malondialdeˉhyde(MDA)，nitric oxide synthase(NOS)，nerve growth factor(NGF)，plasma von willebrand factor(vWF)，et al.Reˉsults Both cholic acid and ZhZ can attenuate neural symptom and the efficacy of their compatibility is the best.Neiˉther cholic acid nor ZhZ has influence on brain SOD，LPO，NOS and plasmavWF，while their compatibility can eviˉdently improve brain SOD and NOS activity，and decrease brain LPO and plasma vWF.Both cholic acid and ZhiZi can evidently improve Na + -K + -ATPase activity and inbibitMg 2+ -ATPase activity，while the efficacy of their compatˉibility is lower.Cholic acid has no influence on brain NGF，Both ZhiZi and compatibility can increase brain NGF.Conclusion The roleof herb compatibility is not a simple addition of efficacy of each one，but a complicated pheˉnomena showing as promoting or decreasing efficacy jointly.
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Key words cholic acid ZhiZi(ZhZ) cerebral ischemia-reperfusion injury compatibility
缺血性中风的病理过程是多环节的连锁效应。目前治疗中风的药物如钙拮抗剂、兴奋性氨基酸受体拮抗剂等均为单环节、单靶点起作用，疗效不够理想。近年来，针对中风病“毒损脑络”的病理机制，依照祛邪扶正原则，应用清开灵治疗缺血性中风获得肯定疗效。但对清开灵各有效部分的作用机制及相互间的配伍规律尚缺乏深入及系统的研究。本实验通过对清开灵中胆酸和栀子及二者配伍阻抑缺血损伤过程的研究，旨在揭示清开灵方剂配伍的部分机制。
1 材料与方法
1.1 实验动物 雄性Wistar大鼠，体重300g左右，购于北京大学医学部实验动物中心。
1.2 药品与试剂 胆酸、栀子及胆酸+栀子注射液由北京中医药大学药厂提供，为清开灵注射液制备工艺中的环节留样;SOD、MDA、NOS及Na + -K + -ATP酶、Mg 2+ -ATP酶试剂盒购自南京建成生物工程研究所，vWF试剂盒购自上海太阳生物技术公司，NGF试剂盒购自美国Sigma公司。
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1.3 模型制作 参照Longa法 [1] ，以10%的水合氯醛(0.35ml/100g体重)腹腔注射麻醉大鼠，颈部正中切口，逐层分离暴露左侧颈总动脉，于颈外动脉分叉处做切口置入2-0鱼线(头端加热呈直径约0.3mm的圆球形)，插入约18～20mm至大脑前动脉起始端，阻断大脑中动脉血流。以丝线结扎颈总动脉远端固定鱼线。逐层缝合切口，鱼线残端留置切口外约5mm。再灌注时，将鱼线拔出约10mm。
1.4 实验分组 造模成功57只，缺血2h，再灌注1h后，随机分为模型组13只，胆酸组13只，栀子组13只及胆酸+栀子组14只，试验中死亡4只;另设正常对照组10只。
1.5 给药方式与途径 各治疗组分别腹腔注射相应药物0.3ml/100g体重，模型组腹腔注射0.3ml/100g体重生理盐水作为对照，每日给药2次。
1.6 观察内容
, 百拇医药
1.6.1 神经功能缺损评分 于分组后及杀检前分别对各组造模大鼠进行神经功能缺损评分。评分参照Bedersont [2] 的方法稍加改进(总分为10分):①提起鼠尾，观察前肢有无异常表现。凡有左前肢内收、内旋者，视其轻重评为1～3分。如果大鼠表现为躯体向右侧旋转，评为4分。②将大鼠置于一金属网上，向后轻拉鼠尾，观察大鼠两前肢肌张力。根据其左前肢肌力下降程度评为0～2分。③将大鼠置于光滑平面上，观察侧向推挡阻力。根据向左侧推挡阻力下降程度评为0～2分。④大鼠出现左眼上睑下垂、左眼分泌物增多者评为2分。实验数据以ˉx±s表示，组间比较采用t检验。
1.6.2 死亡率的观察 统计自分组后至取材前各组大鼠的死亡率，组间比较采用χ 2 检验。
1.6.3 作用环节的效应观察 缺血2h再灌注22h后，将大鼠断头取脑，修取左半球大脑中动脉支配区域脑组织约100mg，加9倍生理盐水超声粉碎制备成10%的脑匀浆。将10%的脑匀浆稀释成1%的组织匀浆，4000rpm离心10min，取上清，按照试剂盒说明测定脑组织SOD、NOS、Na + -K + -ATP酶、Mg 2+ -ATP酶活性及MDA、NGF含量，考马斯亮蓝法测定蛋白含量;腹主动脉穿刺取血采集血浆，按试剂盒说明以酶联免疫吸附双抗体夹心法定量测定血浆中vWF水平。
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2 结果
2.1 对大鼠神经功能缺损评分的影响 治疗前后神经功能缺损评分结果如表1所示，治疗前各损伤组之间未见明显差异，反映动物分组具有均匀一致性。治疗后各组动物的神经功能均出现不同程度地恢复。而各治疗组神经功能缺损评分均极其显著地低于模型组(P<0.001)，胆酸与栀子配伍组亦显著低于胆酸组和栀子组(P<0.05)。
表1 胆酸、栀子及二者配伍对大鼠神经功能缺损评分的影响 (略)
2.2 对模型大鼠死亡率的影响 结果如表2所示，实验结果表明，各治疗组死亡率均低于模型组，栀子组死亡率最低，但各组之间统计学差异无显著性(P>0.05)。
表2 胆酸、栀子及二者配伍对各组大鼠死亡率的影响(略)
2.3.1 脑组织SOD活性及MDA含量的组间比较 结果见表3，模型组大鼠脑组织SOD活性显著低于正常组(P<0.05)，MDA含量明显高于正常组(P<0.001);栀子组和胆酸组SOD活性及MDA含量与模型组之间未见明显差异;胆酸+栀子组SOD活性显著高于模型组(P<0.01)，MDA含量亦较模型组明显降低(P<0.001)。
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表3 胆酸、栀子及二者配伍对大鼠脑组织SOD活性和MDA含量的影响 (略 )
2.3.3 脑组织NOS活性的组间比较 结果见表4。模型组大鼠脑组织NOS活性明显高于正常组(P<0.05)，胆酸组与栀子组NOS活性与模型组之间均未见明显差异;胆酸+栀子组NOS活性较模型组明显降低(P<0.05)。
表4 胆酸、栀子及二者配伍对大鼠脑组织NOS活性的影响 (略 )
2.3.4 脑组织Na + -K + -ATP酶和Mg 2+ -ATP酶活性的组间比较 结果见表5。模型组大鼠脑组织Na + -K + -ATP酶活性显著地低于正常组，Mg 2+ -ATP酶活性明显高于正常组(P<0.001);胆酸组和栀子组脑组织Na + -K + -ATP酶的活性均极为显著地高于模型组(P<0.01)，Mg 2+ -ATP酶活性均极显著低于模型组(P<0.001，P<0.01);胆酸+栀子组脑组织Na +-K + -ATP酶的活性亦显著高于模型组(P<0.05)，Mg 2+ -ATP酶活性显著低于模型组织(P<0.05)。
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表5 胆酸、栀子及二者配伍对大鼠脑组织Na + -K + -ATP酶和Mg 2+ -ATP酶活性的影响 (略)
2.3.6 血浆vWF值的组间比较 见表6。模型组大鼠血浆vWF含量显著高于正常组(P<0.01);胆酸组和栀子组vWF水平与模型组之间未见明显差异;而二者配伍则可显著降低vWF含量(P<0.01)。
表6 胆酸、栀子及二者配伍对大鼠血浆vWF值的影响 (略)
2.3.7 脑组织NGF含量的组间比较 见表7。模型组大鼠脑组织NGF含量明显低于正常组(P<0.05)，胆酸组NGF含量与模型组之间未见明显差异，栀子组及胆酸+栀子组均能显著升高脑组织NGF水平(P<0.05)。
表7 胆酸、栀子及二者配伍对大鼠脑组织NGF含量的影响 (略)
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脑缺血再灌注损伤是一个多环节的级联反应过程，涉及到代谢性毒性物质(如自由基、NO、兴奋性氨基酸等)的损害和神经元自身抗损伤能力降低(如SOD、Na + -K + -ATP酶等活性降低)。
脑缺血再灌注损伤致机体SOD活性降低、自由基产生增加，氧自由基与细胞膜不饱和脂肪酸的不饱和双键发生加成反应生成脂质过氧化物，造成生物膜的脂质过氧化损 伤，过氧化脂质进一步降解，最终生成丙二醛(MDA) [3，4] 。脑缺血致NOS活性增强，诱导产生大量NO，进一步加重脑损伤 [5] 。缺血再灌注损伤致使Na + -K + -ATP酶活性降低、Mg 2+ -ATP酶活性升高，细胞内外离子的浓度差遭破坏，大量Na + 、Cl - 、H 2 O进入细胞内，导致细胞水肿 [6] 。内皮细胞凝血因子Ⅷ相关抗原(vWF)主要由血管内皮细胞合成，凡是有血管内皮细胞损害的病变，如脑缺血及动脉硬化等，均可导致血浆中vWF水平增高 [7] ，血浆vWF的水平可作为脑血管病变严重程度及判断预后的重要指标 [8] 。神经生长因子(NGF)不仅在中枢神经系统发育过程中对神经元的生存、分化、生长起重要作用，亦为成熟的中枢及周围神经系统的神经元维持生存及执行其正常功能所必需;神经生长因子在脑缺血后神经元损伤的修复和再生过程中具有重要作用 [9] ，它可使神经元内的钙结合蛋白Calbindin的含量增加，使细胞内超量的Ca 2+ 排出，维持细胞内钙的稳态，并能使神经元内超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶的含量明显增加，使自由基减少，从而保护神经元抵御缺血缺氧损伤[10] 。
, 百拇医药
实验表明，对于脑缺血级联损伤反应，胆酸、栀子两单味药的作用具有相对特异性，它们通过相对特定的环节起作用，如胆酸、栀子均能显著改善模型大鼠神经功能缺损症状、升高脑组织Na + -K + -ATP酶的活性、降低Mg 2+ -ATP酶的活性。栀子还能明显升高脑组织NGF的含量。两者配伍后，生物效应发生了较大变化，实验表明，配伍作用不是单纯的效应累加，而是依效应环节的生物特性表现为协同增效或减效等复杂的现象。单味胆酸、栀子对脑组织SOD、NOS的活性和脑组织MDA及血浆vWF的含量未见明显影响，而二者配伍则可显著提高脑组织SOD和NOS的活性，降低脑组织MDA和血浆vWF的含量，在这些环节上均表明为明显的配伍增效作用;胆酸和栀子均可极其显著地增加脑组织Na + -K + -ATP酶的活性，降低Mg 2+ -ATP酶的活性，二者配伍后的作用则不如单体显著，在这两个环节上似有配伍减效;胆酸对脑组织NGF的含量未见明显影响，栀子可显著增加NGF的含量，配入胆酸后此作用未见明显变化，在此环节上则未显示配伍作用。因此进一步深入探讨这些配伍关系的化学和生物学机制对于揭示中药方剂各组分在多环节、多靶点的配伍作用的内涵具有重要意义。
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参考文献
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(编辑 张璇), 百拇医药(李传云)