芒硝外敷联合清胰汤对大鼠急性坏死性胰腺炎的治疗作用
【摘要】 目的 探讨芒硝外敷与清胰汤内服联合应用治疗急性坏死性胰腺炎大鼠的疗效及其作用机制。方法 应用牛磺胆酸钠逆行胰胆管穿刺注射造成大鼠急性坏死性胰腺炎(acute necrotizing pancreatitis，ANP)模型，通过芒硝外敷与清胰汤内服联合应用，观察大鼠血清内皮素(endothelin，ET)、一氧化氮(nitric oxide，NO)、血清淀粉酶(amylase，AMY)的变化及芒硝外敷前后自身重量的变化和胰腺、肺脏的病理变化。结果 治疗前后各组在ET、NO、AMY的变化及芒硝外敷前后的自身重量变化比较差异有显著性(P<0.05);且胰腺、肺脏的病理损害在治疗后有明显的减轻。结论 芒硝外敷具有改善微循环、保护胰腺细胞等作用;芒硝外敷与清胰汤联合应用治疗急性坏死性胰腺炎有协同作用。
关键词 清胰汤 芒硝外敷 急性坏死型胰腺炎
【文献标识码】 A 【文章编号】 1726-7587(2003)04-0289-03
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Protective effects of combined mirabilit for external
application and qing yi decoction on acute necrotizing pancreatitis in rats
Xue Zhixiang，Zhu Tao，Gong Hangjun，et al.
The Department of Surgery，Shuguang Hospital，University of Traditional Chinese Medicine，Shanghai200021.
【Abstract】 Objective Discussing the curative effect of mirabilit for external application and qing yi decoction in rat with acute necrotizing pancreatitisand groping for the mechanism.Methods The acute necrotizing pancreatitis model was made by retrograde injection of3.5%Sodium Taurocholic Acid into the rat’s pancreatic duct.Through mirabilit for external application and qing yi decoction，the changes of serum endothelin，nitric oxide，amylase and the weight changes ofmirabilit for external application and the pathological changes of pancreas，lungs were observed.Reˉsults There were remarkable significance on the changes ofserum endothelin(ET)，nitric oxide(NO)，amylase(AMY)and the weight of mirabilit for external application after treating(P<0.05)and the improving effectoccurred at the pathology of pancreas and lungs.Conclusion The mirabilit for external application can ameliorate pancreatic microcirculation and protect cells of pancreas;mirabilit for external application associating with qing yi decoctionhave inter-accelerated effect.
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Key words qing yi decoction mirabilit for external application acute hemorrhagic necrotizing pancreatitis
随着近年来对急性坏死性胰腺炎(ANP)综合治疗措施的不断提高，ANP的病死率有所下降，但总的治疗时间太长，费用较高，如何寻求一种经济有效的治疗措施值得探讨。我们通过芒硝外敷及清胰汤联合应用，致力于初步探讨两者在急性坏死性胰腺炎大鼠实验中的疗效及其作用的机制。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验动物及主要试剂 SD雄性大鼠40只，体重(200±10)g，清洁级，由上海中医药大学实验动物中心提供。芒硝(Na 2 SO 4 ·5H 2 O):由上海市药材中心提供;乌拉坦(Ureˉthane):由中国上海化学试剂采购供应站经销;牛磺胆酸钠(Taurocholic Acid):由美国Sigma公司提供;清胰汤:组成(柴胡、大黄、杭白芍各15g，黄芩、木香、胡黄连、元胡、芒硝各9g)，由本院药剂科提供;ET抗血清，北京福瑞公司提供。
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1.1.2 中药剂量换算 清胰汤各药物剂量根据公式 [1] 换算成动物实际应用剂量，经折算后为柴胡、大黄、杭白芍各20g，黄芩、木香、胡黄连、元胡、芒硝各12g。以上组方加水浓煎至128ml。
1.1.3 主要仪器 SN-682放射免疫γ记数器，中国科学院上海原子核研究所日环仪器厂;721分光光度计，上海精密科学仪器有限公司;ABBOTT-AEROSET全自动生化分析仪，TOSHIBA JAPAN;BX-60显微镜，OLYMPUS JAPAN。
1.2 方法
1.2.1 动物模型制备 大鼠隔夜禁食，翌日按10ml/kg应用乌拉坦(浓度11%)腹腔注射麻醉后取仰卧位，四肢伸展固定在木制手术台上，腹部剃毛，并用碘伏和酒精消毒，取长约5cm上腹部正中切口，进腹后顺胃逐步寻到开口于十二指肠起始部，可见开口于此的胰胆管，呈白色条索状，用41/2号针头自开口根部逆行注射牛磺胆酸钠(浓度3.5%，用量2ml/kg)，注射压力为4kPa，注射结束时用微血管夹钳闭胆胰管后退出针头，钳闭15min后取出微血管夹，然后关腹。
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1.2.2 动物分组及给药方式 40只大鼠随机分为正常对照组、模型组、清胰汤组、芒硝组、清胰汤+芒硝外敷组各8只。造模后，清胰汤组按10ml/kg每隔12h灌胃1次;芒硝组则单纯应用芒硝袋外敷，每日更换1次(另置相同质量芒硝袋于空气中以对比外敷芒硝重量变化，芒硝袋重量平均为35g);清胰汤+芒硝外敷组除灌胃外，尚予芒硝袋外敷。各组按20ml·kg -1 ·d -1 皮下注射平衡液以支持。
1.2.3 标本的留取 48h后麻醉大鼠并剖腹，腹主动脉取血并切取胰腺、肺脏。所取血液放在-30℃冰箱内待测;将胰腺、肺脏标本放入福尔马林固定液中，备送病理检查。
1.2.4 主要观察指标 观察处死前大鼠的活动度、精神状态、饮食、大便的质等;处死后大鼠腹腔内腹水的量及色;治疗前后的芒硝外敷量与外置量的质量变化。
1.2.5 测定方法 (1)血AMY的测定:采用全自动生化分析仪检测。(2)NO的测定:采用硝酸还原酶法。(3)ET的测定:采用放免法。(4)胰腺、肺组织标本的病理学检查。
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1.3 统计学方法 计量资料使用SPSS11.0统计软件行F检验，所有数据均以(ˉx±s)表示。
2 结果
2.1 一般情况 实验期间，各组大鼠(正常组除外)均表现为活动差，精神萎靡，不能进食;清胰汤组及清胰汤+芒硝组见大便明显稀薄，其他几组大便无或成形。
2.2 腹水情况 模型组处死后见3例血性腹水，平均重量3.17g;芒硝组见1例血性腹水;清胰汤组及清胰汤+芒硝组无腹水。
2.3 治疗前后的芒硝外敷量、外置量的比较 芒硝组和清胰汤+芒硝组中，两组芒硝外敷量与外置量相比，外敷量重量变化大于外置量重量变化，差异有非常显著性(P<0.01)，见表1。
表1 两组芒硝外敷量、外置量的变化比较(略 )
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2.4 大鼠血淀粉酶、一氧化氮及内皮素的比较 正常组、芒硝组、清胰汤组、清胰汤+芒硝组血淀粉酶及一氧化氮水平均明显低于模型组，与模型组比较差异有显著性(P<0.05);清胰汤+芒硝组一氧化氮水平低于芒硝组与清胰汤组，比较差异有显著性(P<0.05);清胰汤+芒硝组血内皮素水平明显低于模型组，之间比较差异有显著性(P<0.05)，见表2。
表2 大鼠血AMY、NO及ET的比较(略)
2.5 大鼠胰腺、肺组织病理学改变 肉眼观察见模型组胰腺表现有点状或片状坏死，网膜及附近脏器上有皂化斑，且肠壁有粘连，其它组略有改善。光镜下模型组可见胰腺间质明显水肿，伴有大量的脂肪坏死和部分实质坏死，血管充血，部分血管内可见有微血栓形成，大量炎性细胞浸润;芒硝组及清胰汤组亦可见胰腺间质明显水肿，伴有少量的脂 肪坏死和小部分实质坏死，血管充血，大量炎性细胞浸润;清胰汤+芒硝组可见胰腺间质明显水肿，伴有或不伴有少量的脂肪坏死和小部分实质坏死，血管充血，少量炎性细胞浸润。肺脏，肉眼观察没有发现明显变化，镜下模型组可见肺间质明显充血、水肿，大量中性粒细胞浸润，偶尔见肺泡及气管内出血，有时出现间质小脓肿;芒硝组及清胰汤组可见肺间质也有明显水肿及中性粒细胞浸润，肺泡腔内无出血及渗液，其损伤程度较模型组减轻;清胰汤+芒硝组可见肺间质水肿、充血，单核细胞及少量中性粒细胞浸润，较模型组有明显改善。
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3 讨论
3.1 清胰汤及芒硝 清胰汤源自天津市中西医结合治疗急腹症研究所，经过多年的临床和实验研究，被证明是治疗急性胰腺炎的有效方剂。而芒硝则主含结晶硫酸钠，祖国医学认为其是“热淫于内，治以咸寒”的代表药，具有内服泄热通便、软坚散结，外用消炎、渗湿之功。
3.2 作用机制探讨 NO是一种无机小分子化合物，是在NO合成酶催化下由L-精氨酸生成。内皮细胞、巨噬细胞、肥大细胞、中性粒细胞、单核细胞均可表达活化的诱生型NO合成酶，从而合成NO，一些细胞因子(如TNF-α、IL-1、IL-2)、创伤、缺氧等均可诱导诱生型NO合成酶的产生，而糖皮质激素、IL-4、IL-10等则可抑制诱生型NO合成酶的产生。NO在人体正常功能调节和许多疾病的发生中起着重要的作用，具有广泛的生物活性 [2] 。大量NO可导致持续性血管扩张，并与多种酶相互作用，具有细胞毒性作用，是炎症反应中炎症介质瀑布样连锁反应的最终共同介质之一 [3] 。在实验性急性胰腺炎中，NO水平可以降低 [4]或升高 [5] 。Viola [5] 等通过实验证实过量NO可以导致胰腺的损伤，而Andrzejewska [6] 等却发现NO有保护胰腺的作用。NO在急性胰腺炎中究竟发挥什么作用，目前仍有争伦。ET主要由血管内皮细胞合成和分泌，是内皮素前体原水解而成的多肽，具有多种形式，许多因素均可刺激其合成和分泌，如缺血、缺氧、血管紧张素、血管加压素、细胞因子TNF、IL-8等，ET是一种强烈的体内缩血管物质，可以通过介导微循环障碍而参与急性胰腺炎及其并发症的发生、发展 [7] 。Menger [8] 等及Unlmann [9] 等均在实验中证实ET可导致胰腺微循环障碍。我们通过NO及ET的实验结果可看出，模型组在ET及NO中均显著升高，清胰汤+芒硝组可显著降低其表达水平，芒硝组或清胰汤组亦能降低NO水平，但在ET水平表达上却与模型组没有显著差异，这说明在急性坏死性胰腺炎中，ET和大剂量NO对机体有损害作用，而小剂量NO对机体有保护作用，清胰汤和芒硝外敷能降低ET和NO的释放，从而改善胰腺微循环。此外尚能说明两者联合应用具有协同作用。
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另一方面，在急性胰腺炎中，由于各种损伤因子导致胰腺细胞的损伤，从而使胰酶外溢，胰蛋白酶原激活，而这又进一步导致其它酶的活化，诱导内皮粘连分子及白细胞激活，刺激白细胞分泌细胞因子、组织损伤酶、氧自由基等，引起系列组织细胞损伤 [10，11] ，这些因素亦能造成胰腺外脏器如肺脏的损害 [12，13] 。我们通过血淀粉酶的观测，初步可以肯定，高淀粉酶血症的出现，说明存在胰腺细胞的损伤，而芒硝组、清胰汤组及清胰汤加芒硝组均明显低于模型组，说明芒硝与清胰汤均具有直接或间接保护胰腺细胞的作用。在本实验中，清胰汤组及清胰汤加芒硝组见大便明显稀薄，这说明清胰汤确实具有促进肠蠕动的作用，发挥此作用的可能是大黄与芒硝;通过腹水观察，我们可明确芒硝具有吸收腹腔渗液的作用，而腹水存在是影响多器官衰竭一个重要因素尤其是肺脏 [14] ，这也可解释模型组较其它组肺脏病理损害严重。进一步通过治疗前后的芒硝外敷量、外置量的比较，发现芒硝外敷量重量变化大于外置量重量变化，这就排除了芒硝吸收空气中水分的影响，更能说明芒硝具有吸收腹腔渗液的作用。通过对大鼠胰腺、肺脏的病理观察，进一步说明芒硝外敷及清胰汤通过下调NO、ET等的过度释放，减轻和延缓了胰腺及肺脏的炎症细胞浸润、组织及细胞坏死程度、改善了其微循环，起到保护胰腺和肺脏的作用。
, 百拇医药
总之，通过本实验我们认为，芒硝外敷具有改善微循环、保护胰腺细胞等作用，可能与吸收腹腔渗液(包括炎症介质)及其有效成分透过腹壁在腹腔内发挥作用有关;芒硝外敷与清胰汤联合应用有协同作用。两者联合应用对大鼠急性坏死性胰腺炎有较好的治疗作用。
参考文献
1 陈奇.中药药理研究方法学.北京:人民卫生出版社，2000，33-34.
2 Rodeberg DA，Chaet MS，Bass RC，et al.nitric oxide:an overview.Am j surg，1995，170(3):292-303.
3 Cunha FQ，Assreuy J，Moss DW，et al.Differential induction of nitric oxˉide synthase in various organs of the mouse during endotoxaemia:role of TNF-αlpha and IL-1-beta.Immunology，1994，81(2):211-215.
, 百拇医药
4 Shibuya K，Sunamura M，Yamauchi J，et al.Analysis of the derangement of the Pancereatic microcirculation in arat caerulein pancreatitis modelusing an intravital microscope system.Tohoku J Exp Med，1996，180 (2):173-186.
5 Viola G，al-Mufti RA，Sohail M，et al.Nitric oxide induction in a rat model of selective pancreatic ischemia and reperfusion.Hepatogasˉtroenterology，2000，47(35):1250-1255.
6 Andrzejewska A，Jurkowska G，Augustynowicz A.The influence of nitric oxidesynthesis modulation on the pancreatic acinar cells in caerulein-induced acute pancreatitis.An ultrastructural and morphometric study.Pol J Pathol，2002，53(4):215-221.
, http://www.100md.com
7 陈绪军.内皮素与急性胰腺炎.中国普外基础与临床杂志，1998，5(6):380.
8 Menger MD，Plusczyk T，Vollmar B.Microcirculatory derangements in aˉcute pancreatitis.J Hepatobiliary Pancreat Surg，2001，8(3):187-194.
9 Uhlmann D，Ludwig S，Geissler F，et al.Importance of microcirculatory disturbances in the pathogenesis of pancreatitis.Zentralbl Chir，2001，126(11):873-878.
10 Mithofer K，Fernandez-del Castillo C，Frick TW，et al.Acute hyperˉcalcemia causes acute pancreatitis and ectopic trypsinogen activation in the rat.Gastroenterology，1995，109(1):239-246.
, http://www.100md.com
11 Keck T.Site-specific therapeutic effects of protease inhibitors:effect ofroute of administration in experimental pancreatitis.Pancreatology，2001，1(6):656-661.
12 Bhatia M，Saluja AK，Hofbauer B，et al.The effects of neutrophil deˉpletion on a completely noninvasive model of acute pancreatitis-assoˉciated lung injury.Int J Pancreatol，1998，24(2):77-83.
13 Ogawa M.Acute pancreatitis and cytokines:“second attack”by septic complication leads to organ failure.Pancreas，1998，16(3):312-315.
14 Fujita M，Masamune A，Satoh A，et al.Ascites of rat experimental modˉel of severe acute pancreatitis induces lung injury.Pancreas，2001，22(4):409-418.
(收稿日期:2003-06-05) (编辑 小迟), 百拇医药(薛志祥)
关键词 清胰汤 芒硝外敷 急性坏死型胰腺炎
【文献标识码】 A 【文章编号】 1726-7587(2003)04-0289-03
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Protective effects of combined mirabilit for external
application and qing yi decoction on acute necrotizing pancreatitis in rats
Xue Zhixiang，Zhu Tao，Gong Hangjun，et al.
The Department of Surgery，Shuguang Hospital，University of Traditional Chinese Medicine，Shanghai200021.
【Abstract】 Objective Discussing the curative effect of mirabilit for external application and qing yi decoction in rat with acute necrotizing pancreatitisand groping for the mechanism.Methods The acute necrotizing pancreatitis model was made by retrograde injection of3.5%Sodium Taurocholic Acid into the rat’s pancreatic duct.Through mirabilit for external application and qing yi decoction，the changes of serum endothelin，nitric oxide，amylase and the weight changes ofmirabilit for external application and the pathological changes of pancreas，lungs were observed.Reˉsults There were remarkable significance on the changes ofserum endothelin(ET)，nitric oxide(NO)，amylase(AMY)and the weight of mirabilit for external application after treating(P<0.05)and the improving effectoccurred at the pathology of pancreas and lungs.Conclusion The mirabilit for external application can ameliorate pancreatic microcirculation and protect cells of pancreas;mirabilit for external application associating with qing yi decoctionhave inter-accelerated effect.
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Key words qing yi decoction mirabilit for external application acute hemorrhagic necrotizing pancreatitis
随着近年来对急性坏死性胰腺炎(ANP)综合治疗措施的不断提高，ANP的病死率有所下降，但总的治疗时间太长，费用较高，如何寻求一种经济有效的治疗措施值得探讨。我们通过芒硝外敷及清胰汤联合应用，致力于初步探讨两者在急性坏死性胰腺炎大鼠实验中的疗效及其作用的机制。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验动物及主要试剂 SD雄性大鼠40只，体重(200±10)g，清洁级，由上海中医药大学实验动物中心提供。芒硝(Na 2 SO 4 ·5H 2 O):由上海市药材中心提供;乌拉坦(Ureˉthane):由中国上海化学试剂采购供应站经销;牛磺胆酸钠(Taurocholic Acid):由美国Sigma公司提供;清胰汤:组成(柴胡、大黄、杭白芍各15g，黄芩、木香、胡黄连、元胡、芒硝各9g)，由本院药剂科提供;ET抗血清，北京福瑞公司提供。
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1.1.2 中药剂量换算 清胰汤各药物剂量根据公式 [1] 换算成动物实际应用剂量，经折算后为柴胡、大黄、杭白芍各20g，黄芩、木香、胡黄连、元胡、芒硝各12g。以上组方加水浓煎至128ml。
1.1.3 主要仪器 SN-682放射免疫γ记数器，中国科学院上海原子核研究所日环仪器厂;721分光光度计，上海精密科学仪器有限公司;ABBOTT-AEROSET全自动生化分析仪，TOSHIBA JAPAN;BX-60显微镜，OLYMPUS JAPAN。
1.2 方法
1.2.1 动物模型制备 大鼠隔夜禁食，翌日按10ml/kg应用乌拉坦(浓度11%)腹腔注射麻醉后取仰卧位，四肢伸展固定在木制手术台上，腹部剃毛，并用碘伏和酒精消毒，取长约5cm上腹部正中切口，进腹后顺胃逐步寻到开口于十二指肠起始部，可见开口于此的胰胆管，呈白色条索状，用41/2号针头自开口根部逆行注射牛磺胆酸钠(浓度3.5%，用量2ml/kg)，注射压力为4kPa，注射结束时用微血管夹钳闭胆胰管后退出针头，钳闭15min后取出微血管夹，然后关腹。
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1.2.2 动物分组及给药方式 40只大鼠随机分为正常对照组、模型组、清胰汤组、芒硝组、清胰汤+芒硝外敷组各8只。造模后，清胰汤组按10ml/kg每隔12h灌胃1次;芒硝组则单纯应用芒硝袋外敷，每日更换1次(另置相同质量芒硝袋于空气中以对比外敷芒硝重量变化，芒硝袋重量平均为35g);清胰汤+芒硝外敷组除灌胃外，尚予芒硝袋外敷。各组按20ml·kg -1 ·d -1 皮下注射平衡液以支持。
1.2.3 标本的留取 48h后麻醉大鼠并剖腹，腹主动脉取血并切取胰腺、肺脏。所取血液放在-30℃冰箱内待测;将胰腺、肺脏标本放入福尔马林固定液中，备送病理检查。
1.2.4 主要观察指标 观察处死前大鼠的活动度、精神状态、饮食、大便的质等;处死后大鼠腹腔内腹水的量及色;治疗前后的芒硝外敷量与外置量的质量变化。
1.2.5 测定方法 (1)血AMY的测定:采用全自动生化分析仪检测。(2)NO的测定:采用硝酸还原酶法。(3)ET的测定:采用放免法。(4)胰腺、肺组织标本的病理学检查。
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1.3 统计学方法 计量资料使用SPSS11.0统计软件行F检验，所有数据均以(ˉx±s)表示。
2 结果
2.1 一般情况 实验期间，各组大鼠(正常组除外)均表现为活动差，精神萎靡，不能进食;清胰汤组及清胰汤+芒硝组见大便明显稀薄，其他几组大便无或成形。
2.2 腹水情况 模型组处死后见3例血性腹水，平均重量3.17g;芒硝组见1例血性腹水;清胰汤组及清胰汤+芒硝组无腹水。
2.3 治疗前后的芒硝外敷量、外置量的比较 芒硝组和清胰汤+芒硝组中，两组芒硝外敷量与外置量相比，外敷量重量变化大于外置量重量变化，差异有非常显著性(P<0.01)，见表1。
表1 两组芒硝外敷量、外置量的变化比较(略 )
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2.4 大鼠血淀粉酶、一氧化氮及内皮素的比较 正常组、芒硝组、清胰汤组、清胰汤+芒硝组血淀粉酶及一氧化氮水平均明显低于模型组，与模型组比较差异有显著性(P<0.05);清胰汤+芒硝组一氧化氮水平低于芒硝组与清胰汤组，比较差异有显著性(P<0.05);清胰汤+芒硝组血内皮素水平明显低于模型组，之间比较差异有显著性(P<0.05)，见表2。
表2 大鼠血AMY、NO及ET的比较(略)
2.5 大鼠胰腺、肺组织病理学改变 肉眼观察见模型组胰腺表现有点状或片状坏死，网膜及附近脏器上有皂化斑，且肠壁有粘连，其它组略有改善。光镜下模型组可见胰腺间质明显水肿，伴有大量的脂肪坏死和部分实质坏死，血管充血，部分血管内可见有微血栓形成，大量炎性细胞浸润;芒硝组及清胰汤组亦可见胰腺间质明显水肿，伴有少量的脂 肪坏死和小部分实质坏死，血管充血，大量炎性细胞浸润;清胰汤+芒硝组可见胰腺间质明显水肿，伴有或不伴有少量的脂肪坏死和小部分实质坏死，血管充血，少量炎性细胞浸润。肺脏，肉眼观察没有发现明显变化，镜下模型组可见肺间质明显充血、水肿，大量中性粒细胞浸润，偶尔见肺泡及气管内出血，有时出现间质小脓肿;芒硝组及清胰汤组可见肺间质也有明显水肿及中性粒细胞浸润，肺泡腔内无出血及渗液，其损伤程度较模型组减轻;清胰汤+芒硝组可见肺间质水肿、充血，单核细胞及少量中性粒细胞浸润，较模型组有明显改善。
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3 讨论
3.1 清胰汤及芒硝 清胰汤源自天津市中西医结合治疗急腹症研究所，经过多年的临床和实验研究，被证明是治疗急性胰腺炎的有效方剂。而芒硝则主含结晶硫酸钠，祖国医学认为其是“热淫于内，治以咸寒”的代表药，具有内服泄热通便、软坚散结，外用消炎、渗湿之功。
3.2 作用机制探讨 NO是一种无机小分子化合物，是在NO合成酶催化下由L-精氨酸生成。内皮细胞、巨噬细胞、肥大细胞、中性粒细胞、单核细胞均可表达活化的诱生型NO合成酶，从而合成NO，一些细胞因子(如TNF-α、IL-1、IL-2)、创伤、缺氧等均可诱导诱生型NO合成酶的产生，而糖皮质激素、IL-4、IL-10等则可抑制诱生型NO合成酶的产生。NO在人体正常功能调节和许多疾病的发生中起着重要的作用，具有广泛的生物活性 [2] 。大量NO可导致持续性血管扩张，并与多种酶相互作用，具有细胞毒性作用，是炎症反应中炎症介质瀑布样连锁反应的最终共同介质之一 [3] 。在实验性急性胰腺炎中，NO水平可以降低 [4]或升高 [5] 。Viola [5] 等通过实验证实过量NO可以导致胰腺的损伤，而Andrzejewska [6] 等却发现NO有保护胰腺的作用。NO在急性胰腺炎中究竟发挥什么作用，目前仍有争伦。ET主要由血管内皮细胞合成和分泌，是内皮素前体原水解而成的多肽，具有多种形式，许多因素均可刺激其合成和分泌，如缺血、缺氧、血管紧张素、血管加压素、细胞因子TNF、IL-8等，ET是一种强烈的体内缩血管物质，可以通过介导微循环障碍而参与急性胰腺炎及其并发症的发生、发展 [7] 。Menger [8] 等及Unlmann [9] 等均在实验中证实ET可导致胰腺微循环障碍。我们通过NO及ET的实验结果可看出，模型组在ET及NO中均显著升高，清胰汤+芒硝组可显著降低其表达水平，芒硝组或清胰汤组亦能降低NO水平，但在ET水平表达上却与模型组没有显著差异，这说明在急性坏死性胰腺炎中，ET和大剂量NO对机体有损害作用，而小剂量NO对机体有保护作用，清胰汤和芒硝外敷能降低ET和NO的释放，从而改善胰腺微循环。此外尚能说明两者联合应用具有协同作用。
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另一方面，在急性胰腺炎中，由于各种损伤因子导致胰腺细胞的损伤，从而使胰酶外溢，胰蛋白酶原激活，而这又进一步导致其它酶的活化，诱导内皮粘连分子及白细胞激活，刺激白细胞分泌细胞因子、组织损伤酶、氧自由基等，引起系列组织细胞损伤 [10，11] ，这些因素亦能造成胰腺外脏器如肺脏的损害 [12，13] 。我们通过血淀粉酶的观测，初步可以肯定，高淀粉酶血症的出现，说明存在胰腺细胞的损伤，而芒硝组、清胰汤组及清胰汤加芒硝组均明显低于模型组，说明芒硝与清胰汤均具有直接或间接保护胰腺细胞的作用。在本实验中，清胰汤组及清胰汤加芒硝组见大便明显稀薄，这说明清胰汤确实具有促进肠蠕动的作用，发挥此作用的可能是大黄与芒硝;通过腹水观察，我们可明确芒硝具有吸收腹腔渗液的作用，而腹水存在是影响多器官衰竭一个重要因素尤其是肺脏 [14] ，这也可解释模型组较其它组肺脏病理损害严重。进一步通过治疗前后的芒硝外敷量、外置量的比较，发现芒硝外敷量重量变化大于外置量重量变化，这就排除了芒硝吸收空气中水分的影响，更能说明芒硝具有吸收腹腔渗液的作用。通过对大鼠胰腺、肺脏的病理观察，进一步说明芒硝外敷及清胰汤通过下调NO、ET等的过度释放，减轻和延缓了胰腺及肺脏的炎症细胞浸润、组织及细胞坏死程度、改善了其微循环，起到保护胰腺和肺脏的作用。
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总之，通过本实验我们认为，芒硝外敷具有改善微循环、保护胰腺细胞等作用，可能与吸收腹腔渗液(包括炎症介质)及其有效成分透过腹壁在腹腔内发挥作用有关;芒硝外敷与清胰汤联合应用有协同作用。两者联合应用对大鼠急性坏死性胰腺炎有较好的治疗作用。
参考文献
1 陈奇.中药药理研究方法学.北京:人民卫生出版社，2000，33-34.
2 Rodeberg DA，Chaet MS，Bass RC，et al.nitric oxide:an overview.Am j surg，1995，170(3):292-303.
3 Cunha FQ，Assreuy J，Moss DW，et al.Differential induction of nitric oxˉide synthase in various organs of the mouse during endotoxaemia:role of TNF-αlpha and IL-1-beta.Immunology，1994，81(2):211-215.
, 百拇医药
4 Shibuya K，Sunamura M，Yamauchi J，et al.Analysis of the derangement of the Pancereatic microcirculation in arat caerulein pancreatitis modelusing an intravital microscope system.Tohoku J Exp Med，1996，180 (2):173-186.
5 Viola G，al-Mufti RA，Sohail M，et al.Nitric oxide induction in a rat model of selective pancreatic ischemia and reperfusion.Hepatogasˉtroenterology，2000，47(35):1250-1255.
6 Andrzejewska A，Jurkowska G，Augustynowicz A.The influence of nitric oxidesynthesis modulation on the pancreatic acinar cells in caerulein-induced acute pancreatitis.An ultrastructural and morphometric study.Pol J Pathol，2002，53(4):215-221.
, http://www.100md.com
7 陈绪军.内皮素与急性胰腺炎.中国普外基础与临床杂志，1998，5(6):380.
8 Menger MD，Plusczyk T，Vollmar B.Microcirculatory derangements in aˉcute pancreatitis.J Hepatobiliary Pancreat Surg，2001，8(3):187-194.
9 Uhlmann D，Ludwig S，Geissler F，et al.Importance of microcirculatory disturbances in the pathogenesis of pancreatitis.Zentralbl Chir，2001，126(11):873-878.
10 Mithofer K，Fernandez-del Castillo C，Frick TW，et al.Acute hyperˉcalcemia causes acute pancreatitis and ectopic trypsinogen activation in the rat.Gastroenterology，1995，109(1):239-246.
, http://www.100md.com
11 Keck T.Site-specific therapeutic effects of protease inhibitors:effect ofroute of administration in experimental pancreatitis.Pancreatology，2001，1(6):656-661.
12 Bhatia M，Saluja AK，Hofbauer B，et al.The effects of neutrophil deˉpletion on a completely noninvasive model of acute pancreatitis-assoˉciated lung injury.Int J Pancreatol，1998，24(2):77-83.
13 Ogawa M.Acute pancreatitis and cytokines:“second attack”by septic complication leads to organ failure.Pancreas，1998，16(3):312-315.
14 Fujita M，Masamune A，Satoh A，et al.Ascites of rat experimental modˉel of severe acute pancreatitis induces lung injury.Pancreas，2001，22(4):409-418.
(收稿日期:2003-06-05) (编辑 小迟), 百拇医药(薛志祥)