EDTA在骨切片制作应用中的初步探讨
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中华医学研究杂志
【文献标识码】 B 【文章编号】 1680-6115(2003)09-0838-02
骨切片标本制作技术的关键在于骨组织的脱钙，而病理学骨组织切片的制作在病理学技术方面一向难度较大，选用何种脱钙剂进行脱钙，既不出现破坏其组织结构，又能达到病理诊断所需要的理想标本，故选择一种理想的脱钙剂就尤为重要，为此，笔者通过大量实验，发现传统酸性脱钙剂对骨组织的精细结构有较大的损伤，碱性染色操作起来也较困难，为解决这方面的难题，作者选用了硝酸、三氯醋酸、甲酸、乙二胺四乙酸(EDTA)四种脱钙剂进行脱钙对比实验，发现EDTA脱钙后骨组织结构保存完好，是其它脱钙剂都有所不及的，完全能达到骨组织诊断的要求，并为骨组织的功能研究及病理学教学提供形态学标本以及提供临床诊断的依据。
1 材料与方法
取长骨组织一段，长0.3～0.5cm，共计4块，经10%福尔马林固定24h后流水冲洗2h，以后分别以5%硝酸、5%三氯醋酸、10%甲酸和15%EDTA脱钙，脱水，石蜡包埋，切片，再同步进行苏木素—伊红染色，常规脱水、透明、封片 [1] 。
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2 结果
对比观察骨外膜、外环骨板、内环骨板、骨细胞和骨间板等组织结构清晰。其中以EDTA为脱钙剂最清晰、完整，制片效果最佳。
3 讨论
在制作合格的骨组织切片前，必须先去掉羟基磷灰石(Ca 10 [PO 4 ] 6 [OH] 2 )结晶，而骨盐的存在形式主要是羟基磷灰石结晶 [2] ，骨盐的无机成分是骨质坚硬的原因，组织内的钙质是薄切的障碍，不管怎么说预先将其除去是必需的。脱钙剂在到达无机成份之前，必须通过组织的有机成份，此过程中，必然会损坏部分骨组织结构，对硝酸、三氯醋酸、甲酸、乙二胺四乙酸脱钙剂行脱钙骨实验发现，硝酸、甲酸特点是作用快，染色效果较好，但破坏组织结构，而三氯醋酸，脱钙时间较长，尽管对组织结构破坏较小，但染色的效果不佳，而EDTA，对组织结构破坏小，染色效果颇佳。经实验证明，用EDTA脱钙
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切片后进行HE染色方法，能最大限度地减少脱钙剂对病理性组织的精细结构的损伤，结果令人满 意，为此，推荐EDTA液作为日
常使用的脱钙剂。
EDTA是一种很好的脱钙螯合剂“Versene”(乙二胺四乙酸ethylene diamine tetraacetic acid简称EDTA)，具有与钙形成可溶性非离子复合物的性能，脱钙时，常配制成中性EDTA液，以NaOH调到pH7.0，脱钙时湿度以不超过30℃为好，螯合作用最佳。按0.3～0.5cm取材，用15%EDTA行脱钙，2～3天可达到脱钙目的。其脱钙剂的效果，对组织破坏小，长期在EDTA液中数日也不致有明显破坏，不致影响染色效果，也不使组织产生气泡破坏，并不破坏酶活性，故可应用于组织化学的研究 [3] ，亦可应用于浸银染色方法的脱钙前处理，在Schiffer在硫堇骨组织切片染色法 [4] ，Tappen W.C(1965)脱钙组织块硝酸银浸染法的染色效果也较佳。但EDTA因能与铁、镁、铅发生络合，使用时应加注意，在脱钙时根据骨组织的致密程度，决定EDTA的浓度和时间，在实验中，人的扁骨15%EDTA液2～3天，长骨1～2周，新鲜牙齿4～5周，最后脱钙的结果，以骨针刺无阻力为度。实验进一步证明，制作病理性骨组织切片时，经EDTA液脱钙的骨组织，其结构清晰，结果令人满意，完全能达到骨组织标本的形态学教学以及临床诊断需要的目的。
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参考文献
1 熊绪畲.组织学标本制作技术.武汉:湖北医学院出版社，1979，171.
2 邹仲之.组织学与胚胎学.第五版.北京:人民卫生出版社，2001，47.
3 刘介眉，严庆汉.病理组织染色的理论方法和应用.北京:人民卫生出版社，1983，134.
4 龚志锦，詹溶洲.病理组织制片和染色技术.上海:上海科学技术出版社，1994，288.
作者单位:646000四川泸州医学院病理教研室
(收稿日期:2003-04-04) (编辑 何蓓), 百拇医药(张莉琼)
骨切片标本制作技术的关键在于骨组织的脱钙，而病理学骨组织切片的制作在病理学技术方面一向难度较大，选用何种脱钙剂进行脱钙，既不出现破坏其组织结构，又能达到病理诊断所需要的理想标本，故选择一种理想的脱钙剂就尤为重要，为此，笔者通过大量实验，发现传统酸性脱钙剂对骨组织的精细结构有较大的损伤，碱性染色操作起来也较困难，为解决这方面的难题，作者选用了硝酸、三氯醋酸、甲酸、乙二胺四乙酸(EDTA)四种脱钙剂进行脱钙对比实验，发现EDTA脱钙后骨组织结构保存完好，是其它脱钙剂都有所不及的，完全能达到骨组织诊断的要求，并为骨组织的功能研究及病理学教学提供形态学标本以及提供临床诊断的依据。
1 材料与方法
取长骨组织一段，长0.3～0.5cm，共计4块，经10%福尔马林固定24h后流水冲洗2h，以后分别以5%硝酸、5%三氯醋酸、10%甲酸和15%EDTA脱钙，脱水，石蜡包埋，切片，再同步进行苏木素—伊红染色，常规脱水、透明、封片 [1] 。
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2 结果
对比观察骨外膜、外环骨板、内环骨板、骨细胞和骨间板等组织结构清晰。其中以EDTA为脱钙剂最清晰、完整，制片效果最佳。
3 讨论
在制作合格的骨组织切片前，必须先去掉羟基磷灰石(Ca 10 [PO 4 ] 6 [OH] 2 )结晶，而骨盐的存在形式主要是羟基磷灰石结晶 [2] ，骨盐的无机成分是骨质坚硬的原因，组织内的钙质是薄切的障碍，不管怎么说预先将其除去是必需的。脱钙剂在到达无机成份之前，必须通过组织的有机成份，此过程中，必然会损坏部分骨组织结构，对硝酸、三氯醋酸、甲酸、乙二胺四乙酸脱钙剂行脱钙骨实验发现，硝酸、甲酸特点是作用快，染色效果较好，但破坏组织结构，而三氯醋酸，脱钙时间较长，尽管对组织结构破坏较小，但染色的效果不佳，而EDTA，对组织结构破坏小，染色效果颇佳。经实验证明，用EDTA脱钙
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切片后进行HE染色方法，能最大限度地减少脱钙剂对病理性组织的精细结构的损伤，结果令人满 意，为此，推荐EDTA液作为日
常使用的脱钙剂。
EDTA是一种很好的脱钙螯合剂“Versene”(乙二胺四乙酸ethylene diamine tetraacetic acid简称EDTA)，具有与钙形成可溶性非离子复合物的性能，脱钙时，常配制成中性EDTA液，以NaOH调到pH7.0，脱钙时湿度以不超过30℃为好，螯合作用最佳。按0.3～0.5cm取材，用15%EDTA行脱钙，2～3天可达到脱钙目的。其脱钙剂的效果，对组织破坏小，长期在EDTA液中数日也不致有明显破坏，不致影响染色效果，也不使组织产生气泡破坏，并不破坏酶活性，故可应用于组织化学的研究 [3] ，亦可应用于浸银染色方法的脱钙前处理，在Schiffer在硫堇骨组织切片染色法 [4] ，Tappen W.C(1965)脱钙组织块硝酸银浸染法的染色效果也较佳。但EDTA因能与铁、镁、铅发生络合，使用时应加注意，在脱钙时根据骨组织的致密程度，决定EDTA的浓度和时间，在实验中，人的扁骨15%EDTA液2～3天，长骨1～2周，新鲜牙齿4～5周，最后脱钙的结果，以骨针刺无阻力为度。实验进一步证明，制作病理性骨组织切片时，经EDTA液脱钙的骨组织，其结构清晰，结果令人满意，完全能达到骨组织标本的形态学教学以及临床诊断需要的目的。
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参考文献
1 熊绪畲.组织学标本制作技术.武汉:湖北医学院出版社，1979，171.
2 邹仲之.组织学与胚胎学.第五版.北京:人民卫生出版社，2001，47.
3 刘介眉，严庆汉.病理组织染色的理论方法和应用.北京:人民卫生出版社，1983，134.
4 龚志锦，詹溶洲.病理组织制片和染色技术.上海:上海科学技术出版社，1994，288.
作者单位:646000四川泸州医学院病理教研室
(收稿日期:2003-04-04) (编辑 何蓓), 百拇医药(张莉琼)