咳喘落及其拆方对哮喘模型豚鼠外周血ET-1影响的实验研究
http://www.100md.com
中华中西医杂志 2003年4月 第4卷 第8期
【摘要】 目的 探讨咳喘落及其拆方对哮喘模型豚鼠外周血ET-1水平的影响，进一步阐明咳喘落的免疫调节作用机制。方法 采用放射性免疫法测定哮喘模型的模型组、咳喘落组、地塞米松组豚鼠治疗前后外周血ET-1水平。结果 经过咳喘落组与地塞米松组治疗后，两组豚鼠血浆ET-1含量均明显下降(与模型组比较P<0.01)，接近正常水平(与正常组比较P>0.05)，而且两组作用程度相近(P>0.05);而去麻黄组豚鼠的血浆ET-1含量与咳喘落组豚鼠的血浆ET-1含量差异有显著性(P<0.05)。结论 咳喘落对哮喘模型豚鼠具有免疫调节作用，与地塞米松作用相近。而且麻黄在影响ET-1方面作用不容忽视。
关键词 支气管哮喘 咳喘落 内皮素-1
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2003)08-1147-02
Effects of kechuanluo decoction and its components on the ET-1
, http://www.100md.com
levels in peripheral blood of asthma guinea pigs
Feng Xinge，Huang Panhua，Wu Yingeng
Central Hospital of Nanhui District，Shanghai201300.
【Abstract】 Objective To study the effects of kechuanluo decoction and its components on the ET-1levels in peripheral blood of asthma guinea pigs and to elucidate the mechanisms contributing to kechuanluo decoction theraˉpy in asthma.Methods The levels of ET-1measured by radioimmunoassay method.Results In both of the groups of kechuanluo decoction and dexamethasone，the levels of ET-1were obviously lower than those in model control groups(P<0.01)and almostwere no changes than those in normal control group(P>0.05).The effects were almost equal in both the groups of kechuanluo decoction and dexamethasone(P>0.05).Conclusion Kechuanluo decoction and dexamthasone can decrease the levels of ET-1in peripheralblood of asthma guinea pigs and have an imˉmunomodulating effect on asthma.Ephedra-one of the elements of kechuanluo decoction-would be an important efˉfective fractions.
, 百拇医药
Key words asthma kechuanluo decoction endothelin-1
咳喘落是吴银根教授运用中医药治疗支气管哮喘的经验方。临床和实验证明咳喘落具有有效的平喘作用 [1～5] 。本实验通过咳喘落及其拆方对哮喘模型豚鼠外周血中内皮素-1(ET-1)水平变化的影响，以进一步阐明咳喘落防治支气管哮喘的免疫作用机制。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 主要试剂 卵白蛋白(Albumin chiken-egg):上海伯奥生物科技公司，批号:990817;戊巴比妥钠:上海试剂一厂，批号:990512;抑肽酶:珠海丽宝生物化学制药有限公司，批号:990503;内皮素放射性免疫试剂盒:北京东亚生物公司，批号:991126。
, 百拇医药
1.1.2 主要使用仪器 990T-型医用雾化器(日本);LXT-2型离心沉淀机(上海);Bio Rad450酶标阅读仪(美国);80型液体闪烁计数仪(日本);TN-100B型扭力天平(上海)。
1.1.3 动物 雄性荷兰种豚鼠，体重为(350±20)g，年龄为5～7月龄，由上海中医药大学动物实验中心提供。
1.1.4 药物 咳喘落组方:麻黄、制附子、细辛、虎耳草、黄芩、桃仁按1:1:0.3:3:1:0.6比例组成;去麻黄组方:制附子、细辛、虎耳草、黄芩、桃仁按1:0.3:3:1:0.6;以上药物均由上海中医药大学龙华医院提供。
1.1.5 药品配置 (1)咳喘落全方浓缩液:麻黄提取挥发油，附子、桃仁、黄芩、虎耳草用乙醇提取，回收乙醇后，以上剩渣加入细辛水煎、浓缩，将提取物混合成合剂，调成含生药为3.45g/ml。(2)去麻黄组浓缩液:去掉麻黄，余制法同上，含生药2.95g/ml。以上均由上海中医药大学中药研究所加工制作。地塞米松0.75mg/ml，上海信谊制药厂，批号:990722。
, 百拇医药
1.2 方法
1.2.1 动物分组与造模 动物均由上海中医药大学动物实验中心提供，50只荷兰种雄性豚鼠，随机分为5组:正常组，模型组，咳喘落组，去麻黄组，地塞米松组，每组10只。造模方法采用卵蛋白雾化吸入致敏法 [1] ，雾化流量为3ml/min，豚鼠每组10只共置于同一容器35cm×25cm×15cm大小，于第1、3、5、7天用超声雾化仪雾化吸入1%卵蛋白5min致敏，第15天开始每天用2%卵蛋白雾化吸入3min激发哮喘一次，其中咳喘落组每天于激发前12h灌服相应方药浓缩液，剂量为34.5g/kg;去麻黄组每天于激发前12h灌服相应方药浓缩液，剂量为34.5g/(kg·只);地塞米松组于激发前12h灌服地塞米松，剂量为1mg/kg;正常组用生理盐水代替致敏和激发的不同浓度卵蛋白;模型组只单纯致敏和激发。各组均于开始后第22天处理动物，收集标本。
1.2.2 血浆中的ET-1含量的测定 (1)血浆采集:取2%戊巴比妥钠作腹腔注射麻醉豚鼠，注射剂量为50mg/(kg·只)，腹腔注射10～15min左右，豚鼠麻醉已达到一定深度，将其固定于手术台上。剖腹，分离腹主动脉，用10ml一次注射器(预先用4%EDTA-Na 2 湿润)抽取腹主动脉血6ml，立即注入含0.4ml4%EDTA-Na 2 抗凝管中，同时加入2000U/ml抑肽酶2ml抗凝离心250g×10min，分离血浆，分装保存于-30℃低温冰箱待测。(2)原理:采用放射性免疫法。(3)操作步骤:取聚苯乙烯试管编号，按表1操作。
, 百拇医药
1.3 统计学方法 t检验。
表1 ET RIA加液程序(略)
2 结果
哮喘模型组豚鼠血浆中ET的含量显著高于正常组(P<0.01);咳喘落组和地塞米松组均与模型组差异有非常显著性(P<0.01);咳喘落组和地塞米松组均与正常组差异无显著性(P>0.05)，见表2。
表2 各组豚鼠血浆中ET-1含量(略)
3 讨论
内皮素(ET)是80年代末期发现的一种多肽类活性物质，ET对动物和人的支气管有强烈的收缩作用，还能提高肺血管的渗透性，并能调节炎性细胞的激活。其中ET-1是迄今所发现的最强的支气管平滑肌收缩剂，内皮素-1可引起支气管收缩、激活炎症细胞、刺激炎症介质的产生等，在哮喘的发病中起重要作用 [6] 。ET-1可促进气道上皮细胞和肺泡巨噬细胞合成花生四烯酸及其代谢产物，刺激血小板活化因子(PAF)、白介素、组胺及氧自由基的产生和释放，损伤气道上皮细胞，促进炎症细胞聚集及分泌多种炎症介质，诱发和加重哮喘的慢性气道炎症 [6，7] 。ET-1还可促进平滑肌细胞、成纤维细胞分裂增殖等，参与气道高反应性形成及气道重建 [8] 。
, 百拇医药
中医药在治疗支气管哮喘方面有重要作用。许多中药对哮喘患者具有免疫调解作用。本研究发现哮喘豚鼠动物模型其血浆中内皮素含量明显高于正常组，表明ET在哮喘发病中起着重要作用。经过咳喘落治疗后其血浆内皮素含量得到改善，明显下降至正常水平，去麻黄组豚鼠的血浆内皮素含量与咳喘落全方组豚鼠的血浆内皮素含量有显著差异。结果提示，中药咳喘落全方可能在抑制ET合成，影响炎性细胞在气道内聚集方面起一定的作用，而全方去掉麻黄后疗效差异显著，表明麻黄在影响ET方面作用不容忽视，不能轻易去掉。
参考文献
1 吴银根，张惠勇，王宏长，等.温阳抗寒合剂治疗支气管哮喘98例临床观察.中国医药学报，1996，11(2):33.
2 吴银根，王宏长，张惠勇，等.温阳抗寒合剂对实验性哮喘模型的研究.中国中医基础医学杂志，1996，12(2):22.
, 百拇医药 3 吴银根，徐重明，李培成.咳喘落(温阳抗寒合剂)对哮喘模型豚鼠外周血白细胞糖皮质激素受体影响的实验研究.中国中医基础医学杂志，1997，3(6):36.
4 吴银根，徐重明，李培成.咳喘落对哮喘模型豚鼠外周血IL-5含量影响的实验研究.中国研究，1998，11(1):15.
5 冯新格，黄盼华，吴银根.咳喘落拮抗血小板活化因子对豚鼠气管作用的实验研究.中华中西医杂志，2002，11，2406.
6 Filep JG.Endothelin peptides:Biological action and pathophysiological significance in the lung.Life Science，1993，52:119.
7 Rubanyi GM.Polokoff MA.Endothelins:Molecular biology，biochemˉistry，pharmacology，physiology，and pathophysiology.Phamacological Reviews，1994，46:325.
8 Vittori E，Marine M，Fasoli A，et al.Increased expression of endothelin in bronchial epithelial cells of asthmatic patients and effect of corticosteˉriods.Am Rev Respir Dis，1992，146:1320.
作者单位:1 201300上海市南汇区中心医院中医科
2 200032上海中医药大学附属龙华医院呼吸内科
(编辑 小川), 百拇医药(冯新格 黄盼华 吴银根)
关键词 支气管哮喘 咳喘落 内皮素-1
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2003)08-1147-02
Effects of kechuanluo decoction and its components on the ET-1
, http://www.100md.com
levels in peripheral blood of asthma guinea pigs
Feng Xinge，Huang Panhua，Wu Yingeng
Central Hospital of Nanhui District，Shanghai201300.
【Abstract】 Objective To study the effects of kechuanluo decoction and its components on the ET-1levels in peripheral blood of asthma guinea pigs and to elucidate the mechanisms contributing to kechuanluo decoction theraˉpy in asthma.Methods The levels of ET-1measured by radioimmunoassay method.Results In both of the groups of kechuanluo decoction and dexamethasone，the levels of ET-1were obviously lower than those in model control groups(P<0.01)and almostwere no changes than those in normal control group(P>0.05).The effects were almost equal in both the groups of kechuanluo decoction and dexamethasone(P>0.05).Conclusion Kechuanluo decoction and dexamthasone can decrease the levels of ET-1in peripheralblood of asthma guinea pigs and have an imˉmunomodulating effect on asthma.Ephedra-one of the elements of kechuanluo decoction-would be an important efˉfective fractions.
, 百拇医药
Key words asthma kechuanluo decoction endothelin-1
咳喘落是吴银根教授运用中医药治疗支气管哮喘的经验方。临床和实验证明咳喘落具有有效的平喘作用 [1～5] 。本实验通过咳喘落及其拆方对哮喘模型豚鼠外周血中内皮素-1(ET-1)水平变化的影响，以进一步阐明咳喘落防治支气管哮喘的免疫作用机制。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 主要试剂 卵白蛋白(Albumin chiken-egg):上海伯奥生物科技公司，批号:990817;戊巴比妥钠:上海试剂一厂，批号:990512;抑肽酶:珠海丽宝生物化学制药有限公司，批号:990503;内皮素放射性免疫试剂盒:北京东亚生物公司，批号:991126。
, 百拇医药
1.1.2 主要使用仪器 990T-型医用雾化器(日本);LXT-2型离心沉淀机(上海);Bio Rad450酶标阅读仪(美国);80型液体闪烁计数仪(日本);TN-100B型扭力天平(上海)。
1.1.3 动物 雄性荷兰种豚鼠，体重为(350±20)g，年龄为5～7月龄，由上海中医药大学动物实验中心提供。
1.1.4 药物 咳喘落组方:麻黄、制附子、细辛、虎耳草、黄芩、桃仁按1:1:0.3:3:1:0.6比例组成;去麻黄组方:制附子、细辛、虎耳草、黄芩、桃仁按1:0.3:3:1:0.6;以上药物均由上海中医药大学龙华医院提供。
1.1.5 药品配置 (1)咳喘落全方浓缩液:麻黄提取挥发油，附子、桃仁、黄芩、虎耳草用乙醇提取，回收乙醇后，以上剩渣加入细辛水煎、浓缩，将提取物混合成合剂，调成含生药为3.45g/ml。(2)去麻黄组浓缩液:去掉麻黄，余制法同上，含生药2.95g/ml。以上均由上海中医药大学中药研究所加工制作。地塞米松0.75mg/ml，上海信谊制药厂，批号:990722。
, 百拇医药
1.2 方法
1.2.1 动物分组与造模 动物均由上海中医药大学动物实验中心提供，50只荷兰种雄性豚鼠，随机分为5组:正常组，模型组，咳喘落组，去麻黄组，地塞米松组，每组10只。造模方法采用卵蛋白雾化吸入致敏法 [1] ，雾化流量为3ml/min，豚鼠每组10只共置于同一容器35cm×25cm×15cm大小，于第1、3、5、7天用超声雾化仪雾化吸入1%卵蛋白5min致敏，第15天开始每天用2%卵蛋白雾化吸入3min激发哮喘一次，其中咳喘落组每天于激发前12h灌服相应方药浓缩液，剂量为34.5g/kg;去麻黄组每天于激发前12h灌服相应方药浓缩液，剂量为34.5g/(kg·只);地塞米松组于激发前12h灌服地塞米松，剂量为1mg/kg;正常组用生理盐水代替致敏和激发的不同浓度卵蛋白;模型组只单纯致敏和激发。各组均于开始后第22天处理动物，收集标本。
1.2.2 血浆中的ET-1含量的测定 (1)血浆采集:取2%戊巴比妥钠作腹腔注射麻醉豚鼠，注射剂量为50mg/(kg·只)，腹腔注射10～15min左右，豚鼠麻醉已达到一定深度，将其固定于手术台上。剖腹，分离腹主动脉，用10ml一次注射器(预先用4%EDTA-Na 2 湿润)抽取腹主动脉血6ml，立即注入含0.4ml4%EDTA-Na 2 抗凝管中，同时加入2000U/ml抑肽酶2ml抗凝离心250g×10min，分离血浆，分装保存于-30℃低温冰箱待测。(2)原理:采用放射性免疫法。(3)操作步骤:取聚苯乙烯试管编号，按表1操作。
, 百拇医药
1.3 统计学方法 t检验。
表1 ET RIA加液程序(略)
2 结果
哮喘模型组豚鼠血浆中ET的含量显著高于正常组(P<0.01);咳喘落组和地塞米松组均与模型组差异有非常显著性(P<0.01);咳喘落组和地塞米松组均与正常组差异无显著性(P>0.05)，见表2。
表2 各组豚鼠血浆中ET-1含量(略)
3 讨论
内皮素(ET)是80年代末期发现的一种多肽类活性物质，ET对动物和人的支气管有强烈的收缩作用，还能提高肺血管的渗透性，并能调节炎性细胞的激活。其中ET-1是迄今所发现的最强的支气管平滑肌收缩剂，内皮素-1可引起支气管收缩、激活炎症细胞、刺激炎症介质的产生等，在哮喘的发病中起重要作用 [6] 。ET-1可促进气道上皮细胞和肺泡巨噬细胞合成花生四烯酸及其代谢产物，刺激血小板活化因子(PAF)、白介素、组胺及氧自由基的产生和释放，损伤气道上皮细胞，促进炎症细胞聚集及分泌多种炎症介质，诱发和加重哮喘的慢性气道炎症 [6，7] 。ET-1还可促进平滑肌细胞、成纤维细胞分裂增殖等，参与气道高反应性形成及气道重建 [8] 。
, 百拇医药
中医药在治疗支气管哮喘方面有重要作用。许多中药对哮喘患者具有免疫调解作用。本研究发现哮喘豚鼠动物模型其血浆中内皮素含量明显高于正常组，表明ET在哮喘发病中起着重要作用。经过咳喘落治疗后其血浆内皮素含量得到改善，明显下降至正常水平，去麻黄组豚鼠的血浆内皮素含量与咳喘落全方组豚鼠的血浆内皮素含量有显著差异。结果提示，中药咳喘落全方可能在抑制ET合成，影响炎性细胞在气道内聚集方面起一定的作用，而全方去掉麻黄后疗效差异显著，表明麻黄在影响ET方面作用不容忽视，不能轻易去掉。
参考文献
1 吴银根，张惠勇，王宏长，等.温阳抗寒合剂治疗支气管哮喘98例临床观察.中国医药学报，1996，11(2):33.
2 吴银根，王宏长，张惠勇，等.温阳抗寒合剂对实验性哮喘模型的研究.中国中医基础医学杂志，1996，12(2):22.
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4 吴银根，徐重明，李培成.咳喘落对哮喘模型豚鼠外周血IL-5含量影响的实验研究.中国研究，1998，11(1):15.
5 冯新格，黄盼华，吴银根.咳喘落拮抗血小板活化因子对豚鼠气管作用的实验研究.中华中西医杂志，2002，11，2406.
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作者单位:1 201300上海市南汇区中心医院中医科
2 200032上海中医药大学附属龙华医院呼吸内科
(编辑 小川), 百拇医药(冯新格 黄盼华 吴银根)