垂体腺瘤中c-fos、c-jun、c-myc癌基因蛋白表达的研究
【摘要】 目的 检测c-fos、c-jun、c-myc基因蛋白在垂体腺瘤中的表达，探讨它们与肿瘤侵袭性的关系。方法 采用免疫组化EnVision法检测c-fos、c-jun、c-myc蛋白的表达。结果 垂体腺瘤中c-fos、c-jun、c-myc蛋白表达阳性率分别为38.3%、40%、46.7%;c-fos在不同功能类型垂体腺瘤中的蛋白表达差异无显著性(P>0.05)，而c-jun、c-myc蛋白表达差异有显著性(P<0.05);在不同性别患者的垂体腺瘤中三者基因蛋白表达差异无显著性(P>0.05);c-fos、c-jun在侵袭性与非侵袭性垂体腺瘤中的蛋白表达差异无显著性(P>0.05)，c-myc侵袭性垂体腺瘤中的蛋白表达阳性率高于非侵袭性腺瘤，差异有显著性(P<0.05)。结论 垂体腺瘤中c-fos、c-jun、c-myc蛋白表达程度不同，在垂体腺瘤的分子发病基础中可能起一定作用;c-jun在PRL细胞腺瘤中高表达，c-myc在GH细胞腺瘤中高表达;垂体腺瘤中c-fos、c-jun、c-myc蛋白表达与性别无关;c-myc蛋白在侵袭性垂体腺瘤中高表达，c-myc可做为衡量垂体腺瘤侵袭性的一个参考指标。
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关键词 垂体腺瘤 癌基因 蛋白表达 转录调节 免疫组织化学
【文献标识码】 A 【文章编号】 1726-7587(2003)06-0486-02
A study on the protein expression of c-fos、c-jun
and c-myc in pituitary adenoma
Zhao Yonggeng，Zhang Haifeng，Sun Wei.
Department of Neurosurgery，The456th Hospital of PLA，Jinan250031.
【Abstract】 Objective Detecting the protein expression of c-fos、c-jun and c-myc so as to inquire into its relation with knubbly invasion.Methods The protein expression of c-fos、c-jun and c-myc was measured by means of immunochemical EnVision.Results The positive rate on the protein expression of c-fos、c-jun、c-myc was individually38.3%，40%and46.7%.There was not obvious difference that the protein expression of c-fos in pituitary adenoma of differently functional sort but c-jun and c-myc s were quite different.There was not obvious difference that the protein expression of c-fos、c-jun and c-myc in pituitary adenoma of different sex′s patient.Exˉpression of c-fos and c-jun in noninvasion pituitary adenomas was the same，positive rate of c-myc in noninvasion pituitary adenomas is lower than in invasion’s.Conclusion There was different degree express on the protein of c-fos、c-jun、c-myc in pituitary adenoma，they might be performing certain function in pituitary adenoma’s molecule pathogenesis.The protein expression of c-jun was higher in the prolactin cell adenoma，and the protein expression of c-myc is higher in the growth hormone cell adenoma.There was no relation between the protein express of c-fos、c-jun、c-myc in pituitary adenoma and sex.The protein expression of c-myc was higher among the invasion pituˉitary adenoma，and can being a referenced target to measure pituitary adenoma’s invasion.
, 百拇医药
Key words pituitary adenoma oncogene protein expression transcription regulate immunohistochemistry
现代肿瘤基因学提出垂体腺瘤起源于癌基因的激活或抑癌基因的失活 [1～3] 。目前，已检测到多种癌基因蛋白在垂体腺瘤中表达，做为转录调节因子[4～6] 和垂体瘤转化基因(pituitary tumor transform gene，PTTG)的靶基因 [7，8] ，c-fos、c-jun、c-myc在垂体腺瘤的发生、发展中起着重要作用，并与肿瘤生物学行为的改变及侵袭性有关。本研究旨在同时检测c-fos、c-jun、c-myc蛋白在垂体腺瘤中的表达特点，探讨它们与肿瘤侵袭性的关系。
1 材料与方法
1.1 研究对象 住院患者60例，其中男24例，女36例。手术后新鲜标本40例，石蜡标本20例。据免疫组化染色分 为泌乳素腺瘤(prolactin，PRL)、生长激素腺瘤(growth horˉmone，GH)、促肾上腺皮质激素腺瘤(adrenocorticotrophic horˉmone，ACTH)、多功能腺瘤和无功能腺瘤 [9] ，分别为26例、14例、3例、9例、8例。参照任祖渊、龚俊扬等提出的标准 [10，11] ，符合其中1条者为侵袭性垂体腺瘤，据此分两组:侵袭性垂体腺瘤组28例，非侵袭性垂体腺瘤组32例。以Raghavan [12] 检测的16例正常人垂体组织(基因蛋白不表达)为方法对照。
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1.2 主要试剂 癌基因蛋白的检测采用北京中山生物技术有限公司提供的免疫组化试剂盒，试剂:第一抗体用鼠抗人单克隆抗体;第二抗体为兔抗鼠IgG抗血清。
1.3 试验方法 (1)标本收集:新鲜标本在10%中性缓冲甲醛溶液中浸泡、固定。(2)切片制备:标本经过洗涤、脱水、透明、浸蜡、包埋后制成石蜡切片。(3)免疫组织化学染色:采用EnVision二步法检测c-fos、c-jun、c-myc基因蛋白，操作过程略。
1.4 结果判定 抗体染色后细胞核呈棕褐色为阳性，根据每一显微镜视野下(×100)抗体阳性染色数计算表达阳性率，30%以上记为表达阳性，30%以下为表达阴性。
1.5 统计学处理 c-fos、c-jun、c-myc蛋白表达阳性率的比较应用SPSS统计软件分析处理。P<0.05确定为差异有显著性。
2 结果
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2.1 c-fos、c-jun、c-myc基因蛋白免疫组化染色结果 见图1～5。
2.2 转录调节因子在垂体腺瘤中的蛋白表达 见表1。
表1 c-fos、c-jun、c-myc在垂体腺瘤中的蛋白表达阳性率(略)
c-fos蛋白在PRL腺瘤、GH腺瘤、其它细胞腺瘤中的表达阳性率分别是42.3%、42.9%、30%，统计分析差异无显著性(P>0.05)。c-jun蛋白在PRL腺瘤、GH腺瘤中高表达，χ 2 检验:PRL腺瘤、GH腺瘤与其它细胞腺瘤之间比较差异有显著性(P<0.05)。c-myc在GH腺瘤中的蛋白表达(64.3%)高于PRL腺瘤(57.7%)及其它类型垂体腺瘤(20%)，χ 2 检验:PRL腺瘤、GH腺瘤与其它细胞腺瘤之间比较差异均有显著性(P<0.05)。
值得注意的是PRL腺瘤表达阴性的患者中有8例在手术前曾口服溴麦角隐亭(BC)，每日剂量2.5～12.5mg不等，疗程14～90天不等，c-fos、c-myc阳性细胞数低于15%，表明两者表达受抑制，与Burdma等人的报道相符合 [13] 。
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2.3 c-fos、c-jun、c-myc在不同性别患者垂体腺瘤中的表达 男24例，c-fos、c-jun、c-myc蛋白表达阳性率分别为33.3%、37.5%、41.7%，女36例，三者的蛋白表达阳性率分别为41.7%、41.7%、50%，经χ 2 检验三者在不同性别患者垂体腺瘤中的蛋白表达差异均无显著性(P>0.05)。
2.4 c-fos、c-jun、c-myc在侵袭性与非侵袭性垂体腺瘤中的蛋白表达 见表2。
表2 c-myc在侵袭性与非侵袭性垂体腺瘤中的蛋白表达阳性率(略)
c-fos在侵袭性与非侵袭性垂体腺瘤中的蛋白表达阳性率分别是42.9%、34.4%;c-jun在侵袭性与非侵袭性垂体腺瘤中的蛋白表达阳性率分别是46.4%、34.4%，统计学分析差异均无显著性(P>0.05)。c-myc在侵袭性垂体腺瘤中的蛋白表达明显高于非侵袭性垂体腺瘤，差异有显著性(P<0.05)。
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3 讨论
3.1 c-fos、c-jun、c-myc的功能特点 c-fos、c-jun、c-myc均属于核内癌基因，c-fos又称为基因转录调节因子，是参与细胞分裂、分化的重要分子，和细胞凋亡有关。c-jun在基因表达和信号转导的调节中起重要作用，对细胞生长和功能产生影响。c-myc在肿瘤细胞中表达增加，与细胞周期密切相关，又称分裂信号效应蛋白。
3.2 作用机制 c-fos、c-jun、c-myc在垂体腺瘤发病中的作用机制不尽相同，其中有些机制尚未完全认识清楚，目前认为可能与转录调节异常、信号转导异常、细胞凋亡等因素有关 [14] 。
3.3 临床意义 c-fos、c-jun、c-myc的基因蛋白在垂体腺瘤中表达程度不同，c-jun、c-myc在PRL腺瘤、GH腺瘤中高表达;c-myc与肿瘤侵袭性有关，与其它肿瘤标记物相结合，可做为监测预后的参考指标。垂体腺瘤从多方面危害人体导致相应的功能障碍，肿瘤的侵袭性又是影响预后导致复发的重要因素。随着对c-fos、c-jun、c-myc在垂体腺瘤发生、发展中作用的进一步了解，以及对垂体腺瘤基因治疗的探讨，转录调节因子有可能成为垂体腺瘤治疗的一个靶点。本研究初步筛选出了作为衡量垂体腺瘤侵袭性、监测预后的一个指标，具有潜在的应用价值。(本文图片略)
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参考文献
1 Suhardja AS，Kovacs KT，Rutka JT，et al.Molecular pathogenesis of piˉtuitary adenomas:a review.Acta Neurochir(Wien)，1999，141(7):729-736.
2 孙敬武.垂体腺瘤的分子病理学研究进展.国外医学·生理、病理学与临床分册，2001，21(1):15-17.
3 徐春，王素菊.癌基因、抑癌基因与垂体腺瘤.武警医学，2000，11(2):108-110.
4 张遒蘅.医学分子生物学.北京:北京医科大学出版社，1999，621-622.
5 Wood LT，Mukher jee M，Dolde CE，et al.HMG-1/Y，a new c-myc target gene and potential oncogene.Mol Cell Biol，2000，20(15):5490-5502.
, http://www.100md.com
6 宫恩聪.病理学.北京:北京医科大学出版社，1999，86-87.
7 张龙，汪新华.PTTG一种新的垂体瘤转化基因.国外医学·神经病学、神经外科学分册，2001，22(3):116-118.
8 Zhang X，Horwitz GA，Heaney AP，et al.Pituitary tumors transforming gene(PTTG)expression in pituitary adenomas.J Clin Endocrmol Merab，1999，84(6):761-767.
9 吴承远，刘玉光.临床神经外科学.北京:人民卫生出版社，2001，306-307.
10 任祖渊.侵袭性垂体腺瘤的研究现状及展望.中华神经外科杂志，2000，16(S:S)112-115.
, 百拇医药
11 龚俊扬，史继新.侵袭性垂体瘤及其研究进展.国外医学·神经病学、神经外科学分册，2000，27(1):27-28.
12 Raghavan R，Harrison D，Lnce PG，et al.Oncoprotein immunoreactivity in human pituitary tumors.Clin Endocrinol(Oxf)，1994，40(1):117-126.
13 Burdman JA，Guerra LN，Calabress MT，et al.Neurol Res，2001，23(7):721-723.
14 张作洪，白祥军，雷霆，等.垂体瘤与细胞内信号传导机制异常.中华实验外科杂志，1999，2:190-192.
作者单位:1 250031济南解放军第456医院神经外科
2 250033山东大学第二医院神经外科
(收稿日期:2003-07-27)
(编辑 何蓓), http://www.100md.com(赵永更)
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关键词 垂体腺瘤 癌基因 蛋白表达 转录调节 免疫组织化学
【文献标识码】 A 【文章编号】 1726-7587(2003)06-0486-02
A study on the protein expression of c-fos、c-jun
and c-myc in pituitary adenoma
Zhao Yonggeng，Zhang Haifeng，Sun Wei.
Department of Neurosurgery，The456th Hospital of PLA，Jinan250031.
【Abstract】 Objective Detecting the protein expression of c-fos、c-jun and c-myc so as to inquire into its relation with knubbly invasion.Methods The protein expression of c-fos、c-jun and c-myc was measured by means of immunochemical EnVision.Results The positive rate on the protein expression of c-fos、c-jun、c-myc was individually38.3%，40%and46.7%.There was not obvious difference that the protein expression of c-fos in pituitary adenoma of differently functional sort but c-jun and c-myc s were quite different.There was not obvious difference that the protein expression of c-fos、c-jun and c-myc in pituitary adenoma of different sex′s patient.Exˉpression of c-fos and c-jun in noninvasion pituitary adenomas was the same，positive rate of c-myc in noninvasion pituitary adenomas is lower than in invasion’s.Conclusion There was different degree express on the protein of c-fos、c-jun、c-myc in pituitary adenoma，they might be performing certain function in pituitary adenoma’s molecule pathogenesis.The protein expression of c-jun was higher in the prolactin cell adenoma，and the protein expression of c-myc is higher in the growth hormone cell adenoma.There was no relation between the protein express of c-fos、c-jun、c-myc in pituitary adenoma and sex.The protein expression of c-myc was higher among the invasion pituˉitary adenoma，and can being a referenced target to measure pituitary adenoma’s invasion.
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Key words pituitary adenoma oncogene protein expression transcription regulate immunohistochemistry
现代肿瘤基因学提出垂体腺瘤起源于癌基因的激活或抑癌基因的失活 [1～3] 。目前，已检测到多种癌基因蛋白在垂体腺瘤中表达，做为转录调节因子[4～6] 和垂体瘤转化基因(pituitary tumor transform gene，PTTG)的靶基因 [7，8] ，c-fos、c-jun、c-myc在垂体腺瘤的发生、发展中起着重要作用，并与肿瘤生物学行为的改变及侵袭性有关。本研究旨在同时检测c-fos、c-jun、c-myc蛋白在垂体腺瘤中的表达特点，探讨它们与肿瘤侵袭性的关系。
1 材料与方法
1.1 研究对象 住院患者60例，其中男24例，女36例。手术后新鲜标本40例，石蜡标本20例。据免疫组化染色分 为泌乳素腺瘤(prolactin，PRL)、生长激素腺瘤(growth horˉmone，GH)、促肾上腺皮质激素腺瘤(adrenocorticotrophic horˉmone，ACTH)、多功能腺瘤和无功能腺瘤 [9] ，分别为26例、14例、3例、9例、8例。参照任祖渊、龚俊扬等提出的标准 [10，11] ，符合其中1条者为侵袭性垂体腺瘤，据此分两组:侵袭性垂体腺瘤组28例，非侵袭性垂体腺瘤组32例。以Raghavan [12] 检测的16例正常人垂体组织(基因蛋白不表达)为方法对照。
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1.2 主要试剂 癌基因蛋白的检测采用北京中山生物技术有限公司提供的免疫组化试剂盒，试剂:第一抗体用鼠抗人单克隆抗体;第二抗体为兔抗鼠IgG抗血清。
1.3 试验方法 (1)标本收集:新鲜标本在10%中性缓冲甲醛溶液中浸泡、固定。(2)切片制备:标本经过洗涤、脱水、透明、浸蜡、包埋后制成石蜡切片。(3)免疫组织化学染色:采用EnVision二步法检测c-fos、c-jun、c-myc基因蛋白，操作过程略。
1.4 结果判定 抗体染色后细胞核呈棕褐色为阳性，根据每一显微镜视野下(×100)抗体阳性染色数计算表达阳性率，30%以上记为表达阳性，30%以下为表达阴性。
1.5 统计学处理 c-fos、c-jun、c-myc蛋白表达阳性率的比较应用SPSS统计软件分析处理。P<0.05确定为差异有显著性。
2 结果
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2.1 c-fos、c-jun、c-myc基因蛋白免疫组化染色结果 见图1～5。
2.2 转录调节因子在垂体腺瘤中的蛋白表达 见表1。
表1 c-fos、c-jun、c-myc在垂体腺瘤中的蛋白表达阳性率(略)
c-fos蛋白在PRL腺瘤、GH腺瘤、其它细胞腺瘤中的表达阳性率分别是42.3%、42.9%、30%，统计分析差异无显著性(P>0.05)。c-jun蛋白在PRL腺瘤、GH腺瘤中高表达，χ 2 检验:PRL腺瘤、GH腺瘤与其它细胞腺瘤之间比较差异有显著性(P<0.05)。c-myc在GH腺瘤中的蛋白表达(64.3%)高于PRL腺瘤(57.7%)及其它类型垂体腺瘤(20%)，χ 2 检验:PRL腺瘤、GH腺瘤与其它细胞腺瘤之间比较差异均有显著性(P<0.05)。
值得注意的是PRL腺瘤表达阴性的患者中有8例在手术前曾口服溴麦角隐亭(BC)，每日剂量2.5～12.5mg不等，疗程14～90天不等，c-fos、c-myc阳性细胞数低于15%，表明两者表达受抑制，与Burdma等人的报道相符合 [13] 。
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2.3 c-fos、c-jun、c-myc在不同性别患者垂体腺瘤中的表达 男24例，c-fos、c-jun、c-myc蛋白表达阳性率分别为33.3%、37.5%、41.7%，女36例，三者的蛋白表达阳性率分别为41.7%、41.7%、50%，经χ 2 检验三者在不同性别患者垂体腺瘤中的蛋白表达差异均无显著性(P>0.05)。
2.4 c-fos、c-jun、c-myc在侵袭性与非侵袭性垂体腺瘤中的蛋白表达 见表2。
表2 c-myc在侵袭性与非侵袭性垂体腺瘤中的蛋白表达阳性率(略)
c-fos在侵袭性与非侵袭性垂体腺瘤中的蛋白表达阳性率分别是42.9%、34.4%;c-jun在侵袭性与非侵袭性垂体腺瘤中的蛋白表达阳性率分别是46.4%、34.4%，统计学分析差异均无显著性(P>0.05)。c-myc在侵袭性垂体腺瘤中的蛋白表达明显高于非侵袭性垂体腺瘤，差异有显著性(P<0.05)。
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3 讨论
3.1 c-fos、c-jun、c-myc的功能特点 c-fos、c-jun、c-myc均属于核内癌基因，c-fos又称为基因转录调节因子，是参与细胞分裂、分化的重要分子，和细胞凋亡有关。c-jun在基因表达和信号转导的调节中起重要作用，对细胞生长和功能产生影响。c-myc在肿瘤细胞中表达增加，与细胞周期密切相关，又称分裂信号效应蛋白。
3.2 作用机制 c-fos、c-jun、c-myc在垂体腺瘤发病中的作用机制不尽相同，其中有些机制尚未完全认识清楚，目前认为可能与转录调节异常、信号转导异常、细胞凋亡等因素有关 [14] 。
3.3 临床意义 c-fos、c-jun、c-myc的基因蛋白在垂体腺瘤中表达程度不同，c-jun、c-myc在PRL腺瘤、GH腺瘤中高表达;c-myc与肿瘤侵袭性有关，与其它肿瘤标记物相结合，可做为监测预后的参考指标。垂体腺瘤从多方面危害人体导致相应的功能障碍，肿瘤的侵袭性又是影响预后导致复发的重要因素。随着对c-fos、c-jun、c-myc在垂体腺瘤发生、发展中作用的进一步了解，以及对垂体腺瘤基因治疗的探讨，转录调节因子有可能成为垂体腺瘤治疗的一个靶点。本研究初步筛选出了作为衡量垂体腺瘤侵袭性、监测预后的一个指标，具有潜在的应用价值。(本文图片略)
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参考文献
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6 宫恩聪.病理学.北京:北京医科大学出版社，1999，86-87.
7 张龙，汪新华.PTTG一种新的垂体瘤转化基因.国外医学·神经病学、神经外科学分册，2001，22(3):116-118.
8 Zhang X，Horwitz GA，Heaney AP，et al.Pituitary tumors transforming gene(PTTG)expression in pituitary adenomas.J Clin Endocrmol Merab，1999，84(6):761-767.
9 吴承远，刘玉光.临床神经外科学.北京:人民卫生出版社，2001，306-307.
10 任祖渊.侵袭性垂体腺瘤的研究现状及展望.中华神经外科杂志，2000，16(S:S)112-115.
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11 龚俊扬，史继新.侵袭性垂体瘤及其研究进展.国外医学·神经病学、神经外科学分册，2000，27(1):27-28.
12 Raghavan R，Harrison D，Lnce PG，et al.Oncoprotein immunoreactivity in human pituitary tumors.Clin Endocrinol(Oxf)，1994，40(1):117-126.
13 Burdman JA，Guerra LN，Calabress MT，et al.Neurol Res，2001，23(7):721-723.
14 张作洪，白祥军，雷霆，等.垂体瘤与细胞内信号传导机制异常.中华实验外科杂志，1999，2:190-192.
作者单位:1 250031济南解放军第456医院神经外科
2 250033山东大学第二医院神经外科
(收稿日期:2003-07-27)
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