哮喘患儿血清中TNF-α及NO水平变化及其临床意义
【摘要】 目的 探讨哮喘患儿血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及一氧化氮(NO)的水平变化及其临床意义。方法 用放射免疫法测定60例哮喘患儿血清TNF-α水平，同时用比色法测定血清NO水平，同时设立54例正常儿童为对照。结果 急性期儿童及婴幼儿哮喘组TNF-α及NO水平均明显高于正常对照组(P<0.01)。缓解期TNF-α及NO水平均显著下降，与正常对照差异无显著性(P>0.05)，重症哮喘组急性期TNF-α及NO水平较轻组明显升高(P<0.01)。哮喘急性期TNF-α与NO水平显著正相关(r=0.778，P<0.01)。结论 哮喘患儿血清TNF-α及NO水平均增高，病情愈严重TNF-α及NO值愈高，TNF-α及NO水平呈正相关。提示它们均参与哮喘的发病，检测哮喘患儿血清TNF-α、NO水平对判断哮喘的病期、严重程度、预后及防治均有重要的指导意义。
关键词 哮喘 儿童 肿瘤坏死因子 一氧化氮
【文献标识码】 A 【文章编号】 1684-2030(2003)07-0586-02
, 百拇医药
Detection of serum tumor necrotic factor-αand nitric oxide levels and
its clinical significance in children with bronchial asthma
Guo Xiudong，Zhao Ping，Yan Wenkang
Department of Pediatrics，Huizhou Municipal Central Hosiptal，Guangdong516001.
【Abstract】 Objective To explore tumor necrotic factor-αand nitric oxide level in serum and its clinical significance in children with bronchial asthma.Methods the serum levels of tumor necrotic factor-α(TNF-α)and nitric oxide(NO)were investigated in60children with bronchial asthma.Results Separately during attack and recovˉery stages.The serum levels of TNF-αand NO in attack stage were significantly higher than those in recovery stage and normal control group(P<0.01).The serum levels of TNF-αand NO in recovery stage evidently decreased，and the levels of themwere not significantly higher than those of normal control group(P>0.05)，In attack stage the serum levels of TNF-αand NO were significantly higher in serious group than those in the light group(P<0.01).In attack stage the level of TNF-αhad significantly positive correlation with the level of NO(r=0.778，P<0.01).ConcluˉsionThe serum levels of TNF-αand NO increased significantly in children with bronchial asthma.The more serious attack the patients have，the higher the serum levels of TNF-αand NO were.It showed that TNF-αand NO play a role in clildren with bronchial asthma.The detection of TNF-αand NO levels in serum might be an important guiding index for judging disease stages，severity，prognosis even prevention and treatment of asthma in children.
, 百拇医药
Key words asthma children tumor necrotic factor-α nitric oxide
支气管哮喘是一种气道慢性非特异性炎症，且与气道的高反应性有关，涉及多种炎性介质和细胞因子，我们从2000年2月～2003年1月检测了60例哮喘患儿发作期和缓解期血清肿瘤坏死因子(TNF-α)和一氧化氮(NO)水平变化，旨在研究TNF-α及NO在支气管哮喘发病机制中的作用以及它们的临床价值。
1 资料和方法
1.1 一般资料 观察组60例哮喘患儿均为本科室住院病人，均符合1998年全国儿科哮喘防治协作组制定的小儿哮喘诊断标准 [1] ，男34例，女26例;年龄8个月～14岁，平均(5.52±2.32)岁。均为急性发作期，根据病情分为轻度、中度41例，重度19例，均无合并全身变态反应性疾病及感染性疾病。对照组54例为儿童保健体检正常健康儿童，无慢性呼吸道疾病及变态反应性疾病和感染性疾病病史，无喘息发作史及哮喘家族史，体检无异常发现，近2个月无感染史，其中男32例，女22例;年龄9个月～14岁，平均年龄(5.33±2.45)岁(t=0.044，P>0.05)。
, 百拇医药
1.2 方法 患儿在入院后即刻及经过治疗症状控制后的缓解期各采血2份，分别测定TNF-α及NO。
1.2.1 血清TNF-α检测 血标本离心后分离血清置-20℃冰箱待检，采用放射免疫分析法测定，试剂盒由北京东亚免疫技术研究所提供，由专人严格按说明书要求进行检测。
1.2.2 血清NO检测 血标本分离血清置-20℃冰箱待检。NO半衰期极短，遇氧和水可生成硝酸盐(NO3- )和亚硝酸盐(NO2- )，而NO2- /NO3- 为NO的稳定代谢产物，硝酸盐可与碘酸及萘乙烯二胺盐酸盐反应生成粉红色偶氮化合物，通过721分光光度计545nm对其进行比色分析，间接知道NO浓度。试剂后由伊康和技术公司提供。
1.2.3 统计学方法 检测结果以X±s表示，各组间比较采取方差分析和q检验，相关性检验采用直线相关分析法。
, 百拇医药
2 结果
2.1 TNF-α及NO水平的变化 见表1。在哮喘急性期，无论是儿童哮喘组，还是婴幼儿哮喘组TNF-α及NO水平均明显高于正常对照组(P<0.01)，两哮喘组间差异无显著性(P>0.05);缓解期各哮喘组TNF-α及NO水平均下降，但均高于正常对照组，但差异无显著性(P>0.05)，各哮喘 组自身比较急性期均高于缓解期(P均<0.01)。重度哮喘组急性期TNF-α、NO水平与轻、中度哮喘组比较差异有显著性(P均<0.01)。见表2。
2.2 TNF-α与NO相关性比较 经直线相关分析发现，哮喘急性期TNF-α与NO呈显著正相关(r=0.778，P=0.01)。
表1 各哮喘组患儿TNF-α和NO水平变化 (略)
表2 不同程度哮喘患儿TNF-α和NO水平变化 (略)
, 百拇医药
3 讨论
支气管哮喘在小儿较常见，近年来有上升的趋势，患病率为0.11%～2.03% [2] ，近年来，通过纤维支气管镜、电子显微镜对哮喘病人支气管粘膜活检的病理研究，以及支气管肺泡灌洗的细胞学和免疫生化研究，结果发现哮喘患儿气道内均存在炎性细胞的浸润和炎症介质的增多。
一氧化氮(NO)作为内皮衍生舒张因子具有调节众多生理、病理生理过程的功能，NO所涉及的领域极其广泛，包括血管调节、舒张支气神管、神经介质、机体防御、抑制血小板细胞毒作用等 [3] ，而内源性NO具有双重作用，有CNOS产生小剂量NO有利于松弛平滑肌，而iNOS产生大剂量NO可引起支气管炎症水肿、肺损伤等不良反应 [4] 。有研究表明哮喘发作时气道神经中NO产生过多，引起气道高反应性，同时NO致cGMP升高致肥大细胞脱颗粒释放大量神经介质，从而引起和加重哮喘，经过吸入皮质激素治疗后，随着病情的好转气道中NO明显降低 [5] 。哮喘时产生大量的NO，一方面可对抗其他因素所致的支气管收缩，另一方面可以产生细胞毒性，特别是导致上皮细胞损害，是否导致哮喘时气道上皮脱落还不清楚 [6] 。本组研究表明，哮喘患儿血清NO水平显著高于轻、中度患儿，经治疗后NO则恢复正常，与正常儿童相当，提示血清NO水平与哮喘病情密切相关。因此，血清NO水平的异常可作为判断小儿支气管哮喘病情严重程度的指标之一。
, 百拇医药
TNF-α是由活化性单核巨噬细胞产生的一种多肽，它在正常体内浓度较低，用于调节免疫应答;有研究表明支气管哮喘患者支气管灌洗液中TNF-α含量增加 [7] ;TNF-α损伤内皮细胞，增加血管通透性，诱导粘附分子表达，刺激中性粒细胞附着血管壁，释放溶酶体酶等物质，进而细胞渗入气道粘膜组织 [8] 。
本研究结果表明:哮喘患儿清TNF-α水平与病情、病 期有相关性。哮喘急性期血清TNF-α明显升高，病情越严重TNF-α水平升高越明显。缓解期明显下降，接近正常水平。NO水平与TNF-α水平在哮喘发作时均明显增高，呈显著正相关。通过对哮喘患儿血清NO、TNF-α水平动态观察发现，经治疗后两者水平随着病情缓解而逐渐降低，但仍比正常稍增高，提示哮喘缓解期气道高反应和气道炎症仍然存在，提示哮喘须长期抗炎治疗。有研究表明长期小剂量吸入肾上腺皮质激素对哮喘患儿生长发育无影响 [9] 。测量血清TNF-α及NO水平有助于判断哮喘患儿病情、病期及指导治疗。
, 百拇医药
参考文献
1 全国儿科哮喘防治组.儿童哮喘防治常规.中华儿科杂志，1988，36:747-751.
2 王慕逖.儿科学，第5版.北京:人民卫生出版社，2000，175-179.
3 Gaston B.J Respir crit care med，1994，149:538-551.
4 袁雅冬.一氧化氮与肺部疾病.国外医学·呼吸系统分册，1998，18:48-50.
5 Kharitonow SA，Yatel DH，Barnes PJ.Inhaled glucocorticoids decrease nitricoxide in exhaled air of asthmatic patients.Am J Respir crit med，1996，153:454-457.
, 百拇医药
6 Heiss LN.Natrol Acad sci USA，1994，91:267-270.
7 Cembrzynska-Nowakm，Sz Klarze，Inglot AD，et al.Elevated release of tumor necrosis factor-alpha and inter feron-gama by bronchoalveolar leucocytes from patients with brochial asthma.Am Rev Respir Dis，1993，147:291.
8 Schleimer RP，Benenati，Friedman B，et al.Docytokines play a role in leukocyte recruitment and activation in the lung?Am Respir Dis，1991，143(5):1169-1174.
9 李志骏，姚泽忠，刑富强，等.哮喘患儿性激素水平及长期吸入糖皮质激素影响的研究.中国实用儿科杂志，2000，11:670.
作者单位:516001广东省惠州市中心人民医院儿科
(收稿日期:2003-04-15)
(编辑 一坤), 百拇医药(郭秀东 赵萍 严文康)
关键词 哮喘 儿童 肿瘤坏死因子 一氧化氮
【文献标识码】 A 【文章编号】 1684-2030(2003)07-0586-02
, 百拇医药
Detection of serum tumor necrotic factor-αand nitric oxide levels and
its clinical significance in children with bronchial asthma
Guo Xiudong，Zhao Ping，Yan Wenkang
Department of Pediatrics，Huizhou Municipal Central Hosiptal，Guangdong516001.
【Abstract】 Objective To explore tumor necrotic factor-αand nitric oxide level in serum and its clinical significance in children with bronchial asthma.Methods the serum levels of tumor necrotic factor-α(TNF-α)and nitric oxide(NO)were investigated in60children with bronchial asthma.Results Separately during attack and recovˉery stages.The serum levels of TNF-αand NO in attack stage were significantly higher than those in recovery stage and normal control group(P<0.01).The serum levels of TNF-αand NO in recovery stage evidently decreased，and the levels of themwere not significantly higher than those of normal control group(P>0.05)，In attack stage the serum levels of TNF-αand NO were significantly higher in serious group than those in the light group(P<0.01).In attack stage the level of TNF-αhad significantly positive correlation with the level of NO(r=0.778，P<0.01).ConcluˉsionThe serum levels of TNF-αand NO increased significantly in children with bronchial asthma.The more serious attack the patients have，the higher the serum levels of TNF-αand NO were.It showed that TNF-αand NO play a role in clildren with bronchial asthma.The detection of TNF-αand NO levels in serum might be an important guiding index for judging disease stages，severity，prognosis even prevention and treatment of asthma in children.
, 百拇医药
Key words asthma children tumor necrotic factor-α nitric oxide
支气管哮喘是一种气道慢性非特异性炎症，且与气道的高反应性有关，涉及多种炎性介质和细胞因子，我们从2000年2月～2003年1月检测了60例哮喘患儿发作期和缓解期血清肿瘤坏死因子(TNF-α)和一氧化氮(NO)水平变化，旨在研究TNF-α及NO在支气管哮喘发病机制中的作用以及它们的临床价值。
1 资料和方法
1.1 一般资料 观察组60例哮喘患儿均为本科室住院病人，均符合1998年全国儿科哮喘防治协作组制定的小儿哮喘诊断标准 [1] ，男34例，女26例;年龄8个月～14岁，平均(5.52±2.32)岁。均为急性发作期，根据病情分为轻度、中度41例，重度19例，均无合并全身变态反应性疾病及感染性疾病。对照组54例为儿童保健体检正常健康儿童，无慢性呼吸道疾病及变态反应性疾病和感染性疾病病史，无喘息发作史及哮喘家族史，体检无异常发现，近2个月无感染史，其中男32例，女22例;年龄9个月～14岁，平均年龄(5.33±2.45)岁(t=0.044，P>0.05)。
, 百拇医药
1.2 方法 患儿在入院后即刻及经过治疗症状控制后的缓解期各采血2份，分别测定TNF-α及NO。
1.2.1 血清TNF-α检测 血标本离心后分离血清置-20℃冰箱待检，采用放射免疫分析法测定，试剂盒由北京东亚免疫技术研究所提供，由专人严格按说明书要求进行检测。
1.2.2 血清NO检测 血标本分离血清置-20℃冰箱待检。NO半衰期极短，遇氧和水可生成硝酸盐(NO3- )和亚硝酸盐(NO2- )，而NO2- /NO3- 为NO的稳定代谢产物，硝酸盐可与碘酸及萘乙烯二胺盐酸盐反应生成粉红色偶氮化合物，通过721分光光度计545nm对其进行比色分析，间接知道NO浓度。试剂后由伊康和技术公司提供。
1.2.3 统计学方法 检测结果以X±s表示，各组间比较采取方差分析和q检验，相关性检验采用直线相关分析法。
, 百拇医药
2 结果
2.1 TNF-α及NO水平的变化 见表1。在哮喘急性期，无论是儿童哮喘组，还是婴幼儿哮喘组TNF-α及NO水平均明显高于正常对照组(P<0.01)，两哮喘组间差异无显著性(P>0.05);缓解期各哮喘组TNF-α及NO水平均下降，但均高于正常对照组，但差异无显著性(P>0.05)，各哮喘 组自身比较急性期均高于缓解期(P均<0.01)。重度哮喘组急性期TNF-α、NO水平与轻、中度哮喘组比较差异有显著性(P均<0.01)。见表2。
2.2 TNF-α与NO相关性比较 经直线相关分析发现，哮喘急性期TNF-α与NO呈显著正相关(r=0.778，P=0.01)。
表1 各哮喘组患儿TNF-α和NO水平变化 (略)
表2 不同程度哮喘患儿TNF-α和NO水平变化 (略)
, 百拇医药
3 讨论
支气管哮喘在小儿较常见，近年来有上升的趋势，患病率为0.11%～2.03% [2] ，近年来，通过纤维支气管镜、电子显微镜对哮喘病人支气管粘膜活检的病理研究，以及支气管肺泡灌洗的细胞学和免疫生化研究，结果发现哮喘患儿气道内均存在炎性细胞的浸润和炎症介质的增多。
一氧化氮(NO)作为内皮衍生舒张因子具有调节众多生理、病理生理过程的功能，NO所涉及的领域极其广泛，包括血管调节、舒张支气神管、神经介质、机体防御、抑制血小板细胞毒作用等 [3] ，而内源性NO具有双重作用，有CNOS产生小剂量NO有利于松弛平滑肌，而iNOS产生大剂量NO可引起支气管炎症水肿、肺损伤等不良反应 [4] 。有研究表明哮喘发作时气道神经中NO产生过多，引起气道高反应性，同时NO致cGMP升高致肥大细胞脱颗粒释放大量神经介质，从而引起和加重哮喘，经过吸入皮质激素治疗后，随着病情的好转气道中NO明显降低 [5] 。哮喘时产生大量的NO，一方面可对抗其他因素所致的支气管收缩，另一方面可以产生细胞毒性，特别是导致上皮细胞损害，是否导致哮喘时气道上皮脱落还不清楚 [6] 。本组研究表明，哮喘患儿血清NO水平显著高于轻、中度患儿，经治疗后NO则恢复正常，与正常儿童相当，提示血清NO水平与哮喘病情密切相关。因此，血清NO水平的异常可作为判断小儿支气管哮喘病情严重程度的指标之一。
, 百拇医药
TNF-α是由活化性单核巨噬细胞产生的一种多肽，它在正常体内浓度较低，用于调节免疫应答;有研究表明支气管哮喘患者支气管灌洗液中TNF-α含量增加 [7] ;TNF-α损伤内皮细胞，增加血管通透性，诱导粘附分子表达，刺激中性粒细胞附着血管壁，释放溶酶体酶等物质，进而细胞渗入气道粘膜组织 [8] 。
本研究结果表明:哮喘患儿清TNF-α水平与病情、病 期有相关性。哮喘急性期血清TNF-α明显升高，病情越严重TNF-α水平升高越明显。缓解期明显下降，接近正常水平。NO水平与TNF-α水平在哮喘发作时均明显增高，呈显著正相关。通过对哮喘患儿血清NO、TNF-α水平动态观察发现，经治疗后两者水平随着病情缓解而逐渐降低，但仍比正常稍增高，提示哮喘缓解期气道高反应和气道炎症仍然存在，提示哮喘须长期抗炎治疗。有研究表明长期小剂量吸入肾上腺皮质激素对哮喘患儿生长发育无影响 [9] 。测量血清TNF-α及NO水平有助于判断哮喘患儿病情、病期及指导治疗。
, 百拇医药
参考文献
1 全国儿科哮喘防治组.儿童哮喘防治常规.中华儿科杂志，1988，36:747-751.
2 王慕逖.儿科学，第5版.北京:人民卫生出版社，2000，175-179.
3 Gaston B.J Respir crit care med，1994，149:538-551.
4 袁雅冬.一氧化氮与肺部疾病.国外医学·呼吸系统分册，1998，18:48-50.
5 Kharitonow SA，Yatel DH，Barnes PJ.Inhaled glucocorticoids decrease nitricoxide in exhaled air of asthmatic patients.Am J Respir crit med，1996，153:454-457.
, 百拇医药
6 Heiss LN.Natrol Acad sci USA，1994，91:267-270.
7 Cembrzynska-Nowakm，Sz Klarze，Inglot AD，et al.Elevated release of tumor necrosis factor-alpha and inter feron-gama by bronchoalveolar leucocytes from patients with brochial asthma.Am Rev Respir Dis，1993，147:291.
8 Schleimer RP，Benenati，Friedman B，et al.Docytokines play a role in leukocyte recruitment and activation in the lung?Am Respir Dis，1991，143(5):1169-1174.
9 李志骏，姚泽忠，刑富强，等.哮喘患儿性激素水平及长期吸入糖皮质激素影响的研究.中国实用儿科杂志，2000，11:670.
作者单位:516001广东省惠州市中心人民医院儿科
(收稿日期:2003-04-15)
(编辑 一坤), 百拇医药(郭秀东 赵萍 严文康)