痹痛灵抗炎镇痛作用的实验研究
【文献标识码】 B 【文章编号】 1726-6424(2003)06-0499-03
痹痛灵冲剂是我室研制的治疗类风湿性关节炎的科研用药，为了研究其作用机制，笔者观察了其抗炎、镇痛等作用，现报道如下。
1 痹痛灵的抗炎实验研究
1.1 二甲苯致小鼠耳廓肿胀法
1.1.1 材料 (1)动物:取昆明种(KM)小鼠50只，雌雄各半，体重18～22g，由南京中医药大学实验动物中心提供。苏动质:99001。(2)药品及试剂:1g/ml痹痛灵浸膏液(本校炮制教研室生产，临用前用蒸馏水配成所需浓度);阿司匹林(南京制药厂，批号980618，制成混悬液);生理盐水;二甲苯(如皋市华瑞试剂厂，批号980701)。(3)仪器:DF-110电子天平(常熟衡器有限公司生产)。
, http://www.100md.com 1.1.2 方法 将实验小鼠随机分为正常对照组、痹痛灵小剂量组、中剂量组、大剂量组、阿司匹林组，每组10只。生理盐水组给予等量生理盐水;小剂量组给予12.6g/kg;中剂量组给予37.8g/kg;大剂量组给予113.4g/kg;阿司匹林组给予阿司匹林0.2g/kg。中药治疗组连续给
药5天，西药组一次性腹腔给药，各组末次给药后1h，将0.1ml二甲苯涂于小鼠右耳耳廓两面致炎，左耳不涂为对照组，致炎后1h处死小鼠，沿耳廓基线剪下两耳，于同一部位用直径8mm的打孔器打下左右耳片，称重，以左右耳片重量之差作为肿胀度，计算肿胀抑制百分率。
1.1.3 结果 见表1。
表1 痹痛灵对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响 (略)
结果表示，痹痛灵中剂量组和大剂量组能显著减轻二甲苯致小鼠耳廓肿胀值(P<0.05，P<0.01)，肿胀抑制率分别为25.85%和29.97%，表明痹痛灵中剂量组和大剂量组具有一定的抗炎作用。
, 百拇医药
1.2 痹痛灵对小鼠毛细血管通透性的影响 [1]
1.2.1 材料 (1)动物:取昆明种小鼠50只，雌雄各半，体重18～22g。(2)药品及试剂:1g/ml痹痛灵浸膏液;阿司匹林:生理盐水;0.5%伊文思蓝(上海化学试剂采购供应站分装厂，批号910518);二甲苯;丙酮(上海华光化学试剂厂，批号960412)。(3)仪器:7550分光光度计(惠普上海分析仪器厂生产);82-1型离心机(北京分析仪器厂生产)。
1.2.2 方法 将实验小鼠随机分为5组，分别为正常对照组、痹痛灵小剂量组、中剂量组、大剂量组、阿司匹林组，每组10只，前四组给药方法同上，阿司匹林组给予阿司匹林0.2g/kg。中药治疗组连续给药5天，西药组一次性腹腔给药，末次给药后1h，尾静脉注射伊文思蓝深液0.1ml/10g体重，随即于小鼠腹部正中部位去毛皮肤上滴加二甲苯，40μl/只，15min后小鼠脱颈椎致死，剪下腹部皮肤，用直径1.2cm打孔器取下等面积蓝染皮肤，剪碎放入盛有2ml丙酮∶生理盐水(7∶3)溶液的有塞玻璃试管内浸泡，置暗处放置20h后3000rpm离心15min，取上清液于波长590nm处比色，测定光密度(OD值)，判断小鼠皮肤毛细血管通透性。
, http://www.100md.com
1.2.3 结果 见表2。
表2 痹痛灵对小鼠毛细血管通透性的影响 (略)
2 痹痛灵的镇痛实验研究
2.1 痹痛灵冲剂对热传导引起小鼠拟痛反应影响 [2]
2.1.1 材料 (1)动物:取痛阈合格(受热刺激后舔后足的时间在5～30s之间)的昆明种雌性小鼠50只，体重18～22g。(2)药品及试剂:1g/ml痹痛灵浸膏液;阿司匹林;生理盐水。器材:恒温水浴箱，秒表。
2.1.2 方法 将实验小鼠随机分为5组，分别为正常对照组、痹痛灵小剂量组、中剂量组、大剂量组、阿司匹林组，每组10只，前4组给药方法同上，阿司匹林组给予阿司匹林0.2g/kg。中药治疗组连续给药7天，西药组一次性给药，每组10只，调节恒温水浴箱，将水浴槽加满水，使水面接触热板水温控制在55.0±0.5℃，热板需预热10min。末次给药后60min、90min、120min、150min分别测定小鼠痛阈值(60s小鼠仍无反应，取出小鼠以60s计算)。
, 百拇医药
2.1.3 结果 见表3。
表3 痹痛灵冲剂对小鼠痛阈的影响 (略)
结果所示，痹痛灵各剂量组能延长小鼠痛阈值，与空白对照组比较差异有显著性，表明痹痛灵冲剂具有镇痛作用，且镇痛时间持久。
2.2 痹痛灵对化学刺激引起小鼠扭体反应的影响
2.2.1 材料 (1)动物:取KM小鼠50只，雌雄各半，体重18～22g。(2)药品及试剂:1g/ml的痹痛灵液;阿司匹林;生理盐水;0.5%的醋酸(南京化学试剂厂，批号981009)。
2.2.2 方法 将实验小鼠随机分为5组，分别为正常对照组、痹痛灵小剂量组、中剂量组、大剂量组、阿司匹林组，每组10只。正常对照组给予等量生理盐水;小剂量组给予12.6g/kg;中剂量组给予37.8g/kg;大剂量组给予113.4g/kg;阿司匹林组给予阿司匹林0.2g/kg。中药各组小鼠灌胃给药，1次/d×3天，阿司匹林组一次性给药。末次给药后30min，各鼠均由腹腔注射0.5%醋酸0.2ml/只，观察10min内各鼠出现扭体反应(腹部内凹、躯干与后腿伸张、臀部抬高)的次数，计算抑制百分率。
, 百拇医药
2.2.3 结果 见表4。
表4 痹痛灵对小鼠痛阈的影响 (扭体法)(略)
结果所示，痹痛灵各剂量组能明显减少醋酸所致小鼠反应次数，与正常对照组比较差异有显著性(P<0.01)，3组扭体抑制率随剂量增加而逐渐提高，其中以大剂量组的扭体抑制率最高。表明痹痛灵具有较强的镇痛作用。
3 痹痛灵对佐剂性关节炎大鼠血清PGE 2 含量的影响
3.1 材料 动物:取S雄性大鼠48只，体重150±50g。(2)药品及试剂:1g/ml的痹痛灵液;强的松混悬液(0.4mg/ml);生理盐水:PGE 2 放免试剂盒，苏州医院血液研究所提供。羊毛脂，石蜡，结核菌素(卫生部上海生物制品研究所提供，批号:980506)。弗氏(Freund’s)完全佐剂的制备:取无水羊毛脂4份加热熔化后置于研钵中，稍冷却，边磨边加液体石蜡至6份，高压消毒。再按5mg/ml加入经80℃灭活1h的结核杆菌，振荡混匀，置4℃冰箱保存备用。
, 百拇医药
3.2 实验模型的建立及方法 将实验大鼠随机分为6组， 分别为生理盐水组、痹痛灵小剂量组、中剂量组、大剂量组、强的松组，同时设一正常空白组，每组8只。用弗氏(Freˉund’s)完全佐剂0.1ml/只注射于右后足跖皮内，生理盐水组给予等量生理盐水;小剂量组给予2.5g/kg;中剂量组给予7.5g/kg;大剂量组给予22.5g/kg;强的松组给予强的松0.9mg/kg。各组大鼠灌胃给药，1次/d×30天，停药后次日，大鼠眼眶取血，按试剂盒的说明测定PGE 2 。
3.3 结果 见表5。
表5 痹痛灵对佐剂性关节炎大鼠血清PGE 2 含量的影响 (略)
实验结果表明:痹痛灵中、大剂量组能降低大鼠血清PGE 2 值，与模型组相比差异有显著性(P<0.05)。
, 百拇医药 4 讨论
类风湿性关节炎关节内主要表现为滑膜的炎症，炎性细胞及炎症物质阻碍软骨摄取营养，且又不断释放蛋白水解酶和胶原酶，使软骨损伤，造成不可逆的损害。而痹痛灵冲剂对小鼠的抗炎实验表明其能减轻二甲苯致小鼠的耳廓肿胀及对抗二甲苯所致小鼠腹腔毛细血管通透性的增加，使腹腔内透出染料减少。其抗炎的药理作用为其临床上的应用提供了依据。
关节的疼痛是类风湿性关节炎病情活动的症状表现之一。痹痛灵的镇痛实验表明其能抑制小鼠扭体反应次数，延长小鼠的痛阈值，且作用时间长久，佐证了本品临床缓解患者症状，改善患者的生活质量的作用。前列腺素E 2 (PGE 2 )是由单核巨噬细胞分泌的，是单核细胞和其他免疫细胞的反馈抑制物，特别是在调节淋巴细胞的免疫活动中起重要作用。它与炎症反应如局部充血、水肿及疼痛等症状密切相关。其免疫调节的功能与含量的多少有关。高浓度的PGE 2 能使骨组织吸收和破坏增加，是促进骨及关节破坏的因素之一。本实验的结果表明痹痛灵冲剂大、中剂量组能够降低PGE 2 含量，与生理盐水组相比差异显著。因而有调节免疫功能的作用，发挥治疗类风湿性关节炎的功效。
参考文献
1 陈奇.中药药理研究方法学，第1版.北京:人民卫生出版社， 1993，344.
2 徐叔云.药理实验方法学，第2版.北京:人民卫生出版社，1993，700.
作者单位:210029南京中医药大学
(收稿日期:2003-04-13)
(编辑 夫凡), http://www.100md.com(汪悦 陆兔林 姚华)
痹痛灵冲剂是我室研制的治疗类风湿性关节炎的科研用药，为了研究其作用机制，笔者观察了其抗炎、镇痛等作用，现报道如下。
1 痹痛灵的抗炎实验研究
1.1 二甲苯致小鼠耳廓肿胀法
1.1.1 材料 (1)动物:取昆明种(KM)小鼠50只，雌雄各半，体重18～22g，由南京中医药大学实验动物中心提供。苏动质:99001。(2)药品及试剂:1g/ml痹痛灵浸膏液(本校炮制教研室生产，临用前用蒸馏水配成所需浓度);阿司匹林(南京制药厂，批号980618，制成混悬液);生理盐水;二甲苯(如皋市华瑞试剂厂，批号980701)。(3)仪器:DF-110电子天平(常熟衡器有限公司生产)。
, http://www.100md.com 1.1.2 方法 将实验小鼠随机分为正常对照组、痹痛灵小剂量组、中剂量组、大剂量组、阿司匹林组，每组10只。生理盐水组给予等量生理盐水;小剂量组给予12.6g/kg;中剂量组给予37.8g/kg;大剂量组给予113.4g/kg;阿司匹林组给予阿司匹林0.2g/kg。中药治疗组连续给
药5天，西药组一次性腹腔给药，各组末次给药后1h，将0.1ml二甲苯涂于小鼠右耳耳廓两面致炎，左耳不涂为对照组，致炎后1h处死小鼠，沿耳廓基线剪下两耳，于同一部位用直径8mm的打孔器打下左右耳片，称重，以左右耳片重量之差作为肿胀度，计算肿胀抑制百分率。
1.1.3 结果 见表1。
表1 痹痛灵对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响 (略)
结果表示，痹痛灵中剂量组和大剂量组能显著减轻二甲苯致小鼠耳廓肿胀值(P<0.05，P<0.01)，肿胀抑制率分别为25.85%和29.97%，表明痹痛灵中剂量组和大剂量组具有一定的抗炎作用。
, 百拇医药
1.2 痹痛灵对小鼠毛细血管通透性的影响 [1]
1.2.1 材料 (1)动物:取昆明种小鼠50只，雌雄各半，体重18～22g。(2)药品及试剂:1g/ml痹痛灵浸膏液;阿司匹林:生理盐水;0.5%伊文思蓝(上海化学试剂采购供应站分装厂，批号910518);二甲苯;丙酮(上海华光化学试剂厂，批号960412)。(3)仪器:7550分光光度计(惠普上海分析仪器厂生产);82-1型离心机(北京分析仪器厂生产)。
1.2.2 方法 将实验小鼠随机分为5组，分别为正常对照组、痹痛灵小剂量组、中剂量组、大剂量组、阿司匹林组，每组10只，前四组给药方法同上，阿司匹林组给予阿司匹林0.2g/kg。中药治疗组连续给药5天，西药组一次性腹腔给药，末次给药后1h，尾静脉注射伊文思蓝深液0.1ml/10g体重，随即于小鼠腹部正中部位去毛皮肤上滴加二甲苯，40μl/只，15min后小鼠脱颈椎致死，剪下腹部皮肤，用直径1.2cm打孔器取下等面积蓝染皮肤，剪碎放入盛有2ml丙酮∶生理盐水(7∶3)溶液的有塞玻璃试管内浸泡，置暗处放置20h后3000rpm离心15min，取上清液于波长590nm处比色，测定光密度(OD值)，判断小鼠皮肤毛细血管通透性。
, http://www.100md.com
1.2.3 结果 见表2。
表2 痹痛灵对小鼠毛细血管通透性的影响 (略)
2 痹痛灵的镇痛实验研究
2.1 痹痛灵冲剂对热传导引起小鼠拟痛反应影响 [2]
2.1.1 材料 (1)动物:取痛阈合格(受热刺激后舔后足的时间在5～30s之间)的昆明种雌性小鼠50只，体重18～22g。(2)药品及试剂:1g/ml痹痛灵浸膏液;阿司匹林;生理盐水。器材:恒温水浴箱，秒表。
2.1.2 方法 将实验小鼠随机分为5组，分别为正常对照组、痹痛灵小剂量组、中剂量组、大剂量组、阿司匹林组，每组10只，前4组给药方法同上，阿司匹林组给予阿司匹林0.2g/kg。中药治疗组连续给药7天，西药组一次性给药，每组10只，调节恒温水浴箱，将水浴槽加满水，使水面接触热板水温控制在55.0±0.5℃，热板需预热10min。末次给药后60min、90min、120min、150min分别测定小鼠痛阈值(60s小鼠仍无反应，取出小鼠以60s计算)。
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2.1.3 结果 见表3。
表3 痹痛灵冲剂对小鼠痛阈的影响 (略)
结果所示，痹痛灵各剂量组能延长小鼠痛阈值，与空白对照组比较差异有显著性，表明痹痛灵冲剂具有镇痛作用，且镇痛时间持久。
2.2 痹痛灵对化学刺激引起小鼠扭体反应的影响
2.2.1 材料 (1)动物:取KM小鼠50只，雌雄各半，体重18～22g。(2)药品及试剂:1g/ml的痹痛灵液;阿司匹林;生理盐水;0.5%的醋酸(南京化学试剂厂，批号981009)。
2.2.2 方法 将实验小鼠随机分为5组，分别为正常对照组、痹痛灵小剂量组、中剂量组、大剂量组、阿司匹林组，每组10只。正常对照组给予等量生理盐水;小剂量组给予12.6g/kg;中剂量组给予37.8g/kg;大剂量组给予113.4g/kg;阿司匹林组给予阿司匹林0.2g/kg。中药各组小鼠灌胃给药，1次/d×3天，阿司匹林组一次性给药。末次给药后30min，各鼠均由腹腔注射0.5%醋酸0.2ml/只，观察10min内各鼠出现扭体反应(腹部内凹、躯干与后腿伸张、臀部抬高)的次数，计算抑制百分率。
, 百拇医药
2.2.3 结果 见表4。
表4 痹痛灵对小鼠痛阈的影响 (扭体法)(略)
结果所示，痹痛灵各剂量组能明显减少醋酸所致小鼠反应次数，与正常对照组比较差异有显著性(P<0.01)，3组扭体抑制率随剂量增加而逐渐提高，其中以大剂量组的扭体抑制率最高。表明痹痛灵具有较强的镇痛作用。
3 痹痛灵对佐剂性关节炎大鼠血清PGE 2 含量的影响
3.1 材料 动物:取S雄性大鼠48只，体重150±50g。(2)药品及试剂:1g/ml的痹痛灵液;强的松混悬液(0.4mg/ml);生理盐水:PGE 2 放免试剂盒，苏州医院血液研究所提供。羊毛脂，石蜡，结核菌素(卫生部上海生物制品研究所提供，批号:980506)。弗氏(Freund’s)完全佐剂的制备:取无水羊毛脂4份加热熔化后置于研钵中，稍冷却，边磨边加液体石蜡至6份，高压消毒。再按5mg/ml加入经80℃灭活1h的结核杆菌，振荡混匀，置4℃冰箱保存备用。
, 百拇医药
3.2 实验模型的建立及方法 将实验大鼠随机分为6组， 分别为生理盐水组、痹痛灵小剂量组、中剂量组、大剂量组、强的松组，同时设一正常空白组，每组8只。用弗氏(Freˉund’s)完全佐剂0.1ml/只注射于右后足跖皮内，生理盐水组给予等量生理盐水;小剂量组给予2.5g/kg;中剂量组给予7.5g/kg;大剂量组给予22.5g/kg;强的松组给予强的松0.9mg/kg。各组大鼠灌胃给药，1次/d×30天，停药后次日，大鼠眼眶取血，按试剂盒的说明测定PGE 2 。
3.3 结果 见表5。
表5 痹痛灵对佐剂性关节炎大鼠血清PGE 2 含量的影响 (略)
实验结果表明:痹痛灵中、大剂量组能降低大鼠血清PGE 2 值，与模型组相比差异有显著性(P<0.05)。
, 百拇医药 4 讨论
类风湿性关节炎关节内主要表现为滑膜的炎症，炎性细胞及炎症物质阻碍软骨摄取营养，且又不断释放蛋白水解酶和胶原酶，使软骨损伤，造成不可逆的损害。而痹痛灵冲剂对小鼠的抗炎实验表明其能减轻二甲苯致小鼠的耳廓肿胀及对抗二甲苯所致小鼠腹腔毛细血管通透性的增加，使腹腔内透出染料减少。其抗炎的药理作用为其临床上的应用提供了依据。
关节的疼痛是类风湿性关节炎病情活动的症状表现之一。痹痛灵的镇痛实验表明其能抑制小鼠扭体反应次数，延长小鼠的痛阈值，且作用时间长久，佐证了本品临床缓解患者症状，改善患者的生活质量的作用。前列腺素E 2 (PGE 2 )是由单核巨噬细胞分泌的，是单核细胞和其他免疫细胞的反馈抑制物，特别是在调节淋巴细胞的免疫活动中起重要作用。它与炎症反应如局部充血、水肿及疼痛等症状密切相关。其免疫调节的功能与含量的多少有关。高浓度的PGE 2 能使骨组织吸收和破坏增加，是促进骨及关节破坏的因素之一。本实验的结果表明痹痛灵冲剂大、中剂量组能够降低PGE 2 含量，与生理盐水组相比差异显著。因而有调节免疫功能的作用，发挥治疗类风湿性关节炎的功效。
参考文献
1 陈奇.中药药理研究方法学，第1版.北京:人民卫生出版社， 1993，344.
2 徐叔云.药理实验方法学，第2版.北京:人民卫生出版社，1993，700.
作者单位:210029南京中医药大学
(收稿日期:2003-04-13)
(编辑 夫凡), http://www.100md.com(汪悦 陆兔林 姚华)