大柴胡汤对实验性动脉粥样硬化形成及原癌基因表达的影响
【文献标识码】 A 【文章编号】 1606-8106(2003)04-0489-02
Effect of Da Chai Hu decoction(DCHD)on atherogenesis and on c-myc gene expression
Wang Fengrong，Liu Tong，Yang Guanlin
Affiliated Hospital of Liaoning TCM，Shenyang110032.
【Abstract】 Objective To observe the effect of DCHD on the AS forming and expression of c-myc mRNA in aortic wall of the rabbits model with AS.Methods Atherosclerotic rabbit model fed by high cholesterol was established.The effects of DCHD on expression of c-myc mRNA in aortic wall was observed in situ hybridization.Results It was showed that in DCHD treated group the thickness of plaques was reduced significantly and expression of c-myc mRNA was markedly suppressed.Conclusion It suggest that DCHD exert strong antiatherosclerotic effect on exˉperimental rabbit hypolidemic and inhibit gene expression related to AS lesions maycontribute to the mechanisms.
, http://www.100md.com
Key words DaChaiHu decoction atherosclerosis c-mycgene hyperlipemia
大柴胡汤为《伤寒论》名方，具有和解少阳、畅通气机、内泻热结之功，现代药理研究其具有抗炎、降脂作用，本研究进一步探讨其抗动脉粥样硬化作用及其机制。
1 资料与方法
1.1 药物及试剂 大柴胡汤由辽宁中医学院附属医院制剂室提供，药物浓度为0.5g/ml，胆固醇购自辽宁化学试剂公司(荷兰进口分装)，辛伐他汀为美国默沙东大药厂生产。
1.2 主要仪器 OLYMPUS光学显微镜、HZS-H水浴振荡器(哈尔滨东联电子技术开发公司生产)、AO石蜡切片机(Scientific Instruments生产)、贝克曼700型全自动生化分析仪(美国制造)。
, 百拇医药
1.3 动物模型建立 雄性健康大耳白兔32只，体重2.0～2.5kg，购自辽宁中医学院实验动物中心。将实验兔随机分为四组，每组8只。正常对照组(C)喂饲基础饲料，AS模型组(CAS)给予每日1%胆固醇饲料100g，中药组(DCH)在AS模型组基础上另加大柴胡汤20ml(生药量8.8g)，日一次灌胃，西药组在AS模型组基础上另加每日10mg辛伐他汀。动物均为单笼饲养，每日进食量限制为100g，饮水不限。实验中每日观察动物进食和行为变化，定期称体重、抽血，实验共10周。
1.4 观察指标 (1)血液生化指标:实验后第5、10周末由兔耳缘静脉抽血测血清总胆固醇(CHOL)，甘油三酯(TG)，指标测定由辽宁中医学院检验科全自动生化分析仪完成，实验后第10周末由兔耳缘静脉抽血测超氧化物歧化酶(SOD)、磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(PHGPX)，测定由中国医科大学检验科完成。(2)AS面积和斑块病理观察:实验第10周末，空气栓塞处死家兔，立即取出主动脉，剪取主动脉弓近左颈总动脉分叉处全层动脉组织0.5cm×0.5cm，标本用4%多聚甲醛固定，留做石蜡切片原位杂交。另将主动脉纵行剪开，选择主动脉弓近左颈总动脉分叉AS斑块处取材经石蜡包埋，HE染色，光镜下测量最大AS斑块内膜厚及中膜厚度。(3)原位杂交:将各组石蜡标本切片脱蜡至水，按非放射性地高辛标记与检测试剂盒操作规程，进行各组病理切片的cDNA-mRNA原位分子杂交。阴性对照为已知本实验阳性切片，杂交时以预杂交液切片显色阴性。原位杂交结果判断:阳性信号显色为棕黄色。
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1.5 统计学处理 数据以ˉx±s表示，自身前后及两组间均数差异均采用t检验。
2 结果
2.1 生化检测 实验前各组的血浆总胆固醇无差异，均值为(1.48±0.18)mmol/L。实验第10周末，对照组的血浆CHOL(1.45±0.20)mmol/L，与实验前比较差异无显著性(P>0.05);AS模型组和大柴胡汤(DCH)用药组的血浆CHOL分别为(31.7±4.81)mmol/L和(15.43±2.20)mmol/L，与实验前比较显著增高，DCH用药组与AS模型组比较，差异有非常显著性(P<0.01)。AS模型组PHGPX及铜锌超氧化物歧化酶(Cu-Zn-SOD)分别为(4.96±0.76)U/mgHb和(1.66±0.11)μmol/L NADPH/min·mgHb，DHC组分别为(7.15±0.49)U/mgHb和(1.95±0.07)μmol/L NADPH/min·mgHb，大柴胡汤组与AS组比较差异有非常显著性(P<0.01)。
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2.2 大体标本检测和病理检测结果 正常对照组主动脉内膜光滑，未见粥样硬化斑块。AS模型组的主动脉内膜均有严重的粥样硬化病变，肉眼呈点、斑、条状，边缘清楚，表面无明显破溃，较严重者斑块融合成片，密布内膜面。大柴胡汤组及辛伐他汀组的主动脉内膜散在粥样斑块，多集中在主动脉起始部和肠系膜动脉、肾动脉分叉处，光镜下见正常组血管内膜形态大致正常。高脂模型组血管内膜明显增厚，内膜下大量平滑肌细胞(SMC)增生，内有脂质沉积，形成泡沫细胞，内膜中有大量巨噬细胞浸润。AS组最大内膜厚度(0.38±0.04)mm，正常组(0.02±0.01)mm，大柴胡汤组(0.12±0.03)mm，辛伐他汀组(0.08±0.02)mm，大柴胡汤组与AS组比较P<0.01，差异有非常显著性。见图1，2(图略)。
2.3 c-myc原位杂交结果 AS模型组动物的硬化斑块中，c-myc m-RNA的阳性表达信号呈棕黄色颗粒，多见于增殖的平滑肌细胞内。大柴胡汤组及辛伐他汀组的主动脉内膜斑块亦可见c-myc mRNA的阳性表达，但强度明显弱于AS模型组，正常对照组的主动脉组织内未见c-myc mRNA阳性表达。见图3，4，5(图略)。
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3 讨论
3.1 大柴胡汤的抗AS作用 本实验结果表明，大柴胡汤具有显著的抗家兔实验性AS的作用。主要表现为减少主动脉内膜脂质斑块面积及斑块厚度，其途径可能为降低血脂及抗脂质过氧化。在长期高脂血症的情况下，增高的脂蛋白中主要是氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)和胆固醇对动脉内膜产生功能性损伤，主要是通过氧化损伤机制产生的，动脉壁的脂质过氧化损伤可导致内皮功能失调，脂质 过氧化损伤的内皮细胞可以促进平滑肌细胞增殖，逐步发展成动脉硬化。本实验提示大柴胡汤具有明显减低血脂作用，其降脂作用比辛伐他汀组略低，但两组经统计学处理差异无显著性。具有明显升高血浆PHGPX和SOD活性，抑制氧自由基，加速氧自由基的清除，及抗氧化作用。
3.2 c-myc基因表达与动脉硬化 癌基因c-myc参与细胞增殖调控，是细胞生长过程中的重要调节基因。c-myc的产物是核内蛋白质，与细胞从G 0 →G 1 期有关，参与DNA复制内膜损伤高脂血症等多种因素可引起血管壁PDGF基因的异常表达，而诱导c-myc等癌基因异常表达，LDL亦可直接促进c-myc基因表达，c-myc基因表达核内蛋白质，与DNA结合，调节细胞内其它基因表达，产生和分泌多种生长因子，再通过内分泌和旁分泌作用，使细胞增生更明显。增生的SMC巨噬细胞，脂肪摄入量增加后脂质代谢障碍，最终形成“泡沫细胞”。另外，增生的细胞产生大量细胞间质，最终形成AS斑块。本试验结果也证明，高脂组家兔血管壁c-myc基因表达量增高，而大柴胡汤组c-myc mRNA表达水平与高脂组比较明显降低。
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参考文献
1 Keaney JF，Jr Vita JA.Atherosclerosis，oxidative stress，and antioxidant protection.Progr Cardiovasc Diseas，1995，38:129-148.
2 高岩.内皮细胞脂质过氧化损伤对平滑肌细胞增殖的影响.中华病理学杂志，1997，26(1):42.
3 汤键，周爱儒.原癌基因与心血管病.北京:北京医科大学、中国协和医科大学联合出版社，1990，165.
4 Fantl WJ.Distinct phosphotyrosines on a growth factor receptor bind to specific molecules that mediate different signaling pathways.Cell，1992，69:413.
5 Ross R.The pathogenesis of antherosclerosis:a perspective for1990’s.Nature，1993，362:801.
(编辑 小川), http://www.100md.com(王凤荣)
Effect of Da Chai Hu decoction(DCHD)on atherogenesis and on c-myc gene expression
Wang Fengrong，Liu Tong，Yang Guanlin
Affiliated Hospital of Liaoning TCM，Shenyang110032.
【Abstract】 Objective To observe the effect of DCHD on the AS forming and expression of c-myc mRNA in aortic wall of the rabbits model with AS.Methods Atherosclerotic rabbit model fed by high cholesterol was established.The effects of DCHD on expression of c-myc mRNA in aortic wall was observed in situ hybridization.Results It was showed that in DCHD treated group the thickness of plaques was reduced significantly and expression of c-myc mRNA was markedly suppressed.Conclusion It suggest that DCHD exert strong antiatherosclerotic effect on exˉperimental rabbit hypolidemic and inhibit gene expression related to AS lesions maycontribute to the mechanisms.
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Key words DaChaiHu decoction atherosclerosis c-mycgene hyperlipemia
大柴胡汤为《伤寒论》名方，具有和解少阳、畅通气机、内泻热结之功，现代药理研究其具有抗炎、降脂作用，本研究进一步探讨其抗动脉粥样硬化作用及其机制。
1 资料与方法
1.1 药物及试剂 大柴胡汤由辽宁中医学院附属医院制剂室提供，药物浓度为0.5g/ml，胆固醇购自辽宁化学试剂公司(荷兰进口分装)，辛伐他汀为美国默沙东大药厂生产。
1.2 主要仪器 OLYMPUS光学显微镜、HZS-H水浴振荡器(哈尔滨东联电子技术开发公司生产)、AO石蜡切片机(Scientific Instruments生产)、贝克曼700型全自动生化分析仪(美国制造)。
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1.3 动物模型建立 雄性健康大耳白兔32只，体重2.0～2.5kg，购自辽宁中医学院实验动物中心。将实验兔随机分为四组，每组8只。正常对照组(C)喂饲基础饲料，AS模型组(CAS)给予每日1%胆固醇饲料100g，中药组(DCH)在AS模型组基础上另加大柴胡汤20ml(生药量8.8g)，日一次灌胃，西药组在AS模型组基础上另加每日10mg辛伐他汀。动物均为单笼饲养，每日进食量限制为100g，饮水不限。实验中每日观察动物进食和行为变化，定期称体重、抽血，实验共10周。
1.4 观察指标 (1)血液生化指标:实验后第5、10周末由兔耳缘静脉抽血测血清总胆固醇(CHOL)，甘油三酯(TG)，指标测定由辽宁中医学院检验科全自动生化分析仪完成，实验后第10周末由兔耳缘静脉抽血测超氧化物歧化酶(SOD)、磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(PHGPX)，测定由中国医科大学检验科完成。(2)AS面积和斑块病理观察:实验第10周末，空气栓塞处死家兔，立即取出主动脉，剪取主动脉弓近左颈总动脉分叉处全层动脉组织0.5cm×0.5cm，标本用4%多聚甲醛固定，留做石蜡切片原位杂交。另将主动脉纵行剪开，选择主动脉弓近左颈总动脉分叉AS斑块处取材经石蜡包埋，HE染色，光镜下测量最大AS斑块内膜厚及中膜厚度。(3)原位杂交:将各组石蜡标本切片脱蜡至水，按非放射性地高辛标记与检测试剂盒操作规程，进行各组病理切片的cDNA-mRNA原位分子杂交。阴性对照为已知本实验阳性切片，杂交时以预杂交液切片显色阴性。原位杂交结果判断:阳性信号显色为棕黄色。
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1.5 统计学处理 数据以ˉx±s表示，自身前后及两组间均数差异均采用t检验。
2 结果
2.1 生化检测 实验前各组的血浆总胆固醇无差异，均值为(1.48±0.18)mmol/L。实验第10周末，对照组的血浆CHOL(1.45±0.20)mmol/L，与实验前比较差异无显著性(P>0.05);AS模型组和大柴胡汤(DCH)用药组的血浆CHOL分别为(31.7±4.81)mmol/L和(15.43±2.20)mmol/L，与实验前比较显著增高，DCH用药组与AS模型组比较，差异有非常显著性(P<0.01)。AS模型组PHGPX及铜锌超氧化物歧化酶(Cu-Zn-SOD)分别为(4.96±0.76)U/mgHb和(1.66±0.11)μmol/L NADPH/min·mgHb，DHC组分别为(7.15±0.49)U/mgHb和(1.95±0.07)μmol/L NADPH/min·mgHb，大柴胡汤组与AS组比较差异有非常显著性(P<0.01)。
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2.2 大体标本检测和病理检测结果 正常对照组主动脉内膜光滑，未见粥样硬化斑块。AS模型组的主动脉内膜均有严重的粥样硬化病变，肉眼呈点、斑、条状，边缘清楚，表面无明显破溃，较严重者斑块融合成片，密布内膜面。大柴胡汤组及辛伐他汀组的主动脉内膜散在粥样斑块，多集中在主动脉起始部和肠系膜动脉、肾动脉分叉处，光镜下见正常组血管内膜形态大致正常。高脂模型组血管内膜明显增厚，内膜下大量平滑肌细胞(SMC)增生，内有脂质沉积，形成泡沫细胞，内膜中有大量巨噬细胞浸润。AS组最大内膜厚度(0.38±0.04)mm，正常组(0.02±0.01)mm，大柴胡汤组(0.12±0.03)mm，辛伐他汀组(0.08±0.02)mm，大柴胡汤组与AS组比较P<0.01，差异有非常显著性。见图1，2(图略)。
2.3 c-myc原位杂交结果 AS模型组动物的硬化斑块中，c-myc m-RNA的阳性表达信号呈棕黄色颗粒，多见于增殖的平滑肌细胞内。大柴胡汤组及辛伐他汀组的主动脉内膜斑块亦可见c-myc mRNA的阳性表达，但强度明显弱于AS模型组，正常对照组的主动脉组织内未见c-myc mRNA阳性表达。见图3，4，5(图略)。
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3 讨论
3.1 大柴胡汤的抗AS作用 本实验结果表明，大柴胡汤具有显著的抗家兔实验性AS的作用。主要表现为减少主动脉内膜脂质斑块面积及斑块厚度，其途径可能为降低血脂及抗脂质过氧化。在长期高脂血症的情况下，增高的脂蛋白中主要是氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)和胆固醇对动脉内膜产生功能性损伤，主要是通过氧化损伤机制产生的，动脉壁的脂质过氧化损伤可导致内皮功能失调，脂质 过氧化损伤的内皮细胞可以促进平滑肌细胞增殖，逐步发展成动脉硬化。本实验提示大柴胡汤具有明显减低血脂作用，其降脂作用比辛伐他汀组略低，但两组经统计学处理差异无显著性。具有明显升高血浆PHGPX和SOD活性，抑制氧自由基，加速氧自由基的清除，及抗氧化作用。
3.2 c-myc基因表达与动脉硬化 癌基因c-myc参与细胞增殖调控，是细胞生长过程中的重要调节基因。c-myc的产物是核内蛋白质，与细胞从G 0 →G 1 期有关，参与DNA复制内膜损伤高脂血症等多种因素可引起血管壁PDGF基因的异常表达，而诱导c-myc等癌基因异常表达，LDL亦可直接促进c-myc基因表达，c-myc基因表达核内蛋白质，与DNA结合，调节细胞内其它基因表达，产生和分泌多种生长因子，再通过内分泌和旁分泌作用，使细胞增生更明显。增生的SMC巨噬细胞，脂肪摄入量增加后脂质代谢障碍，最终形成“泡沫细胞”。另外，增生的细胞产生大量细胞间质，最终形成AS斑块。本试验结果也证明，高脂组家兔血管壁c-myc基因表达量增高，而大柴胡汤组c-myc mRNA表达水平与高脂组比较明显降低。
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参考文献
1 Keaney JF，Jr Vita JA.Atherosclerosis，oxidative stress，and antioxidant protection.Progr Cardiovasc Diseas，1995，38:129-148.
2 高岩.内皮细胞脂质过氧化损伤对平滑肌细胞增殖的影响.中华病理学杂志，1997，26(1):42.
3 汤键，周爱儒.原癌基因与心血管病.北京:北京医科大学、中国协和医科大学联合出版社，1990，165.
4 Fantl WJ.Distinct phosphotyrosines on a growth factor receptor bind to specific molecules that mediate different signaling pathways.Cell，1992，69:413.
5 Ross R.The pathogenesis of antherosclerosis:a perspective for1990’s.Nature，1993，362:801.
(编辑 小川), http://www.100md.com(王凤荣)