标本存放时间对磷脂酶A 2 活性的影响
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中华中西医杂志 2003年5月 第4卷 第10期
【文献标识码】 B 【文章编号】 1606-8106(2003)10-1550-02
磷脂酶A 2 (PLA 2 )是一类特异作用于甘油磷酯分子上2位(Sn-2)的不饱和酯键的水解酶。体内分布极为广泛，参与炎症、细胞损伤及信号传递等许多重要的病理生理过程 [1，2] 。准确测定PLA 2 活性及其改变，对阐明一些疾病的发生机制、预后、疗效的判断及诊断均有重要意义 [3] 。
本研究观察不同条件下存放时间对PLA 2 活性的影响，以确定标本贮存期限，减少测定误差。
1 材料与方法
1.1 标本 血清及脑脊液标本各10例，来自住院病人。每例标本均小量分装，分置于4℃和-20℃保存。4℃保存的标本每日取出每例标本各1份进行PLA 2 测定连续监测7天;-20℃保存的标本，第1日测定后每隔10天取出每例标本各1份测定PLA 2 ，连续观察6个月。
, 百拇医药
1.2 PLA 2 测定 采用 3 H-油酸标记大肠杆菌为底物的放射化学法 [4] 。底物为本室自制。取血清10μl(或脑脊液50μl)，加底物15μl，再加测定缓冲液至200μl，37℃水浴振荡15min(脑脊液标本60min)，加入2mol/L HCl100μl及200mg/L无脂酸牛血清白蛋白100μl，立即置冰水浴20min，1000rpm离心5min，取上清液100μl加闪烁液6ml，避光静置12h以上，在LS1801液闪仪上计数。PLA 2 单位计算:PLA 2 =样品dpm-无酶对照dpm242×10 3 ×1孵浴时间× 1/样品用量×10 6 ×4
2 结果与讨论
4℃保存的10例血清及脑脊液标本重复7次测定，均值分别为(529.4±47.6U)/L、(18.7±2.1)U/L。平均日间变异率分别为9.0%和11.2%。放置7天的标本与第1天至第6天的测定值配伍组设计方差分析相比较差异均无显著性(P>0.05)。以每例标本各自的ˉx±3s为限度观察，无一例标本超出均线限制线。提示:标本4℃贮存<7天对PLA 2 活性无影响。我们在实验中还观察到4℃贮存时间>7天的标本极易生长细菌、霉菌。为避免其干扰，可在标本中加入终浓度为0.1%的叠氮钠，经干扰试验证实0.1%的叠氮钠对测定结果无影响，干扰度为4.3%，且标本放置第14天，结果仍在各自的ˉx±3s限度内。提示:无菌条件下 4℃贮存标本至少可保存14天。
, 百拇医药
-20℃贮存的血清及脑脊液标本均值分别为(524.3±48.2)U/L、(19.5±2.0)U/L，平均变异系数分别为9.2%和10.3%。放置6个月的标本(第18次)结果与第1日测定值相比差异均无显著性(P>0.05)。仍以每例标本各自的ˉx±3s为限度观察，无一例超出均线限制线。提示:-20℃长期贮存标本对PLA 2 活性影响极小，与lim KH [5] 的报道一致。
参考文献
1 Murakami M，Kudo I，Inoue K.Secretory phospholipases A 2 .J Lipid Meˉdiators Cell Signalling，1995，12:119-130.
2 Farooqui AA，Yang HC，Horrcks L，et al.Phospholipase A 2 and its role in brain tissue.J.Neurochem，1997，69:889-901.
, 百拇医药
3 Kaiser E.Phospholipase A 2 :Its Usefulness in Laboratory Diagnostics.Critical Review in Clinical Laboratory Sciences，1999，36(2):65-163.
4 李廷富，徐植光，康格菲，等.[ 3 H]-油酸标记的大肠杆菌测定血清磷脂酶A 2 的方法及评价.陕西医学检验，2000，15(4):7-9.
5 Lim KH，Rice GE，de Groot CJM，et al.Plasma typeⅡphospholipase A 2 levelsare elevated in severe preeclampsia.AM J Obstet Gynecol，1995，172:998-1002.
作者单位:1 400016重庆医科大学检验系临床生化教研室
2 646000泸州医学院附院检验科
3 400016重庆刑事科学技术研究所
(编辑 于少伟), 百拇医药
磷脂酶A 2 (PLA 2 )是一类特异作用于甘油磷酯分子上2位(Sn-2)的不饱和酯键的水解酶。体内分布极为广泛，参与炎症、细胞损伤及信号传递等许多重要的病理生理过程 [1，2] 。准确测定PLA 2 活性及其改变，对阐明一些疾病的发生机制、预后、疗效的判断及诊断均有重要意义 [3] 。
本研究观察不同条件下存放时间对PLA 2 活性的影响，以确定标本贮存期限，减少测定误差。
1 材料与方法
1.1 标本 血清及脑脊液标本各10例，来自住院病人。每例标本均小量分装，分置于4℃和-20℃保存。4℃保存的标本每日取出每例标本各1份进行PLA 2 测定连续监测7天;-20℃保存的标本，第1日测定后每隔10天取出每例标本各1份测定PLA 2 ，连续观察6个月。
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1.2 PLA 2 测定 采用 3 H-油酸标记大肠杆菌为底物的放射化学法 [4] 。底物为本室自制。取血清10μl(或脑脊液50μl)，加底物15μl，再加测定缓冲液至200μl，37℃水浴振荡15min(脑脊液标本60min)，加入2mol/L HCl100μl及200mg/L无脂酸牛血清白蛋白100μl，立即置冰水浴20min，1000rpm离心5min，取上清液100μl加闪烁液6ml，避光静置12h以上，在LS1801液闪仪上计数。PLA 2 单位计算:PLA 2 =样品dpm-无酶对照dpm242×10 3 ×1孵浴时间× 1/样品用量×10 6 ×4
2 结果与讨论
4℃保存的10例血清及脑脊液标本重复7次测定，均值分别为(529.4±47.6U)/L、(18.7±2.1)U/L。平均日间变异率分别为9.0%和11.2%。放置7天的标本与第1天至第6天的测定值配伍组设计方差分析相比较差异均无显著性(P>0.05)。以每例标本各自的ˉx±3s为限度观察，无一例标本超出均线限制线。提示:标本4℃贮存<7天对PLA 2 活性无影响。我们在实验中还观察到4℃贮存时间>7天的标本极易生长细菌、霉菌。为避免其干扰，可在标本中加入终浓度为0.1%的叠氮钠，经干扰试验证实0.1%的叠氮钠对测定结果无影响，干扰度为4.3%，且标本放置第14天，结果仍在各自的ˉx±3s限度内。提示:无菌条件下 4℃贮存标本至少可保存14天。
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-20℃贮存的血清及脑脊液标本均值分别为(524.3±48.2)U/L、(19.5±2.0)U/L，平均变异系数分别为9.2%和10.3%。放置6个月的标本(第18次)结果与第1日测定值相比差异均无显著性(P>0.05)。仍以每例标本各自的ˉx±3s为限度观察，无一例超出均线限制线。提示:-20℃长期贮存标本对PLA 2 活性影响极小，与lim KH [5] 的报道一致。
参考文献
1 Murakami M，Kudo I，Inoue K.Secretory phospholipases A 2 .J Lipid Meˉdiators Cell Signalling，1995，12:119-130.
2 Farooqui AA，Yang HC，Horrcks L，et al.Phospholipase A 2 and its role in brain tissue.J.Neurochem，1997，69:889-901.
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3 Kaiser E.Phospholipase A 2 :Its Usefulness in Laboratory Diagnostics.Critical Review in Clinical Laboratory Sciences，1999，36(2):65-163.
4 李廷富，徐植光，康格菲，等.[ 3 H]-油酸标记的大肠杆菌测定血清磷脂酶A 2 的方法及评价.陕西医学检验，2000，15(4):7-9.
5 Lim KH，Rice GE，de Groot CJM，et al.Plasma typeⅡphospholipase A 2 levelsare elevated in severe preeclampsia.AM J Obstet Gynecol，1995，172:998-1002.
作者单位:1 400016重庆医科大学检验系临床生化教研室
2 646000泸州医学院附院检验科
3 400016重庆刑事科学技术研究所
(编辑 于少伟), 百拇医药